应用等电聚焦技术研究血清型取得的若干进展(综述)

近年来,随着等电聚焦技术的应用,血清型的研究也有许多进展,本文择其要者综述如下: 1.ORM ORM亦称α_1-酸性糖蛋白(α_1-acid glycoprotein),是人类血浆中含量最丰富的一种蛋白质(80—250mg/100ml,由肝脏合成,是一种急性时相反应物,分子量为41 000,含糖42％,含神经氨酸12％。     

分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

建立两株分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株G_8与E_(10),采用洗涤人精子免疫Balb/c小鼠,取免疫脾与Balb/c小鼠的Sp2/0骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞诱生腹水的方法。Elisa,IIF或酶标抗体免疫组化法结果发现,G_8与E_(10)单抗与人精子(射出精子、睾丸、副睾管及输精管中的精子)及睾丸各级生殖细胞均发生反应;与人甲状腺上皮细胞、肾小管上皮细胞、胰腺导管上皮细胞以及胰岛均发生不同程度的交叉反应,与其他33种人体正常组织、9种人体液与分泌液、8种不同种族的动物精子均不发生交叉反应,说明在一般情况下这两种抗体可用于鉴定人类的精液斑以及精液与阴道分泌液的混合斑。两种单抗与人精子的顶体部、赤道部、后核帽、颈部及中段结合,证明精子特异性表面抗原分布于这几个区域。两种抗体均属IgG_1,G_8与E_(10)抗体的效价分别为1:512与1:1024。     

四川省茂汶县羌族Gc表型的分布调查

Gc(维生素D结合蛋白)的遗传多态性由Hirschfeld首次发现。用免疫电泳或聚丙稀胺凝胶园盘电泳可检查Gc三种表型:Gc1-1、Gc2-1、与Gc2-2,它们受一对等位基因Gc~1与Gc~2的控制。本文调查了四川省茂汶县羌族三种Gc表型的分布,算出其基因频率,作为羌族人群亲子鉴定的理论根据。     

用斑点ELISA方法检测p30确证人类精斑

作者建立了检测精浆特异性抗原p30的斑点ELISA试验方法,确证人类精斑。p30最小检出量为0.4ng。用该法盲测了室温存放1年的生物性斑痕180例,无一例假阳性和假阴性,证明用此法确证人类精斑的敏感性和特异性均优于传统的方法,具有操作简便、快速,检材用量小,结果准确等优点。     

人血痕ORM、Pi、AHSG和GC同步等电聚焦分型

作者在国内外首次建立了血清类粘蛋白、α1－抗胰蛋白酶、α2－HS－糖蛋白和型特异性成份等四种遗传标记同步等电聚焦免疫酶放大分型方法。累计个人识别机率为0．9878，非父排除率为0．6648，是国内外已报道同步电泳分型方法中鉴别能力最高的。本法可对稀释度为1／100的血清进行分型。对于室温保存四周的血痕盯全部正确分型。除Pi外，ORM、AHSG和GC三种遗传标记至少在24周之内皆可正确分型。     

α_2HS-糖蛋白、α_1-抗胰蛋白酶和GC的同步分型与应用

作者应用等电聚焦技术,建立了同步检测α_2HS-糖蛋白表型,α_1-抗胰蛋白酶亚型和GC亚型的方法。本法累计个人识别机率为0.9701,累计非父排除率为0.5811、是国内外同步电泳分型史鉴别效率最高的方法。在11例亲子鉴定中应用本法取得了满意结果。     

Gc蛋白的分离纯化

本文报道Gc蛋白的分离与纯化.人血浆经DEAE-Sephadex-A50, Sephadex G100和DEAE-Sephadex-A50三次柱层析即可获得纯化Gc.纯化Gc经PAGE, SDS-PAGE和免疫电泳等证明,其纯度和特异性均符合要求.     

抗GC血清的制备及鉴定

作者用分离纯化的GC蛋白免疫新西兰兔制备了抗GC血清。鉴定结果表明,抗GC血清与进口商品抗GC血清特异性相同;与人血清其他蛋白没有交叉反应。琼脂双向扩散法测得抗血清效价为128;可检出GC蛋白的最低浓度为3.1μg/ml。免疫电泳法可测出入血清三种GC表型。     

短串联重复序列基因座复合扩增研究进展

人类基因组的基因及基因外区域含有的二碱基。三碱基及四碱基的短串联重复序列（shorttandemre．peatloctls,STR）,能提供大量的遗传标记（geneticmarker,GM［1,2］,可用于构建基因连锁图,诊断遗传性疾病,以及解决法科学实践中生物物证的个人识别及亲子鉴定等问题。STR基因座的DNA多态性可用聚合酶链式反应（polpoerasechainreaction,PCR）。聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyscrylamidegelelectmphore．sis,PAGE）及硝酸银染色法检测,通过待测样品扩增产物与等位基因标记物比较,可迅速准确地判断扩增产物片段的大小,并命名等位…     

PCR-STR分型技术在尿样DNA分型中的应用

目的　对尿样的DNA分型进行研究。　方法　 10份尿样随机收集于无关个体 ,同时采集血液样本做DNA分型对照 ,用PCR -STR分型技术对尿样DNA进行FIBRA和D18S5 35基因座分型。　结果　 10份尿样 10ml、1ml及 0 .2ml体积均获得准确的分型结果 ,且与同一个体的血样DNA分型结果完全相同 ;室温储存 4天及 4℃保存 4周的尿样均分型成功。　结论PCR -STR分型技术对尿样DNA分型是一种有效的方法 ,在尿样的个人识别中具有极高的实用价值。