盖塔病毒6K蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为用于猪群中盖塔病毒(Getah virus,GETV)的流行病学调查,并研究其6K蛋白功能,制备了该蛋白的单克隆抗体。将6K基因克隆至原核表达载体pCold-TF,并转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG低温诱导表达。将诱导的重组菌超声裂解,离心后收集上清,经过镍柱亲和和切胶纯化后,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。使用间接免疫荧光(IFA)法筛选阳性杂交瘤细胞,获得1株GETV 6K单克隆抗体,命名为25C5。将其注射小鼠腹腔,制备6K单抗腹水。IFA检测结果显示,单抗25C5可以结合GETV蛋白并产生特异性荧光。在Western-blot和免疫沉淀试验中,单抗25C5可以结合GETV感染的ST-R细胞样品,其特异性条带大小约6 ku。以上结果表明,单抗25C5免疫学反应特性良好,可用于检测GETV,为该病毒的分离鉴定、致病机制和蛋白功能等研究奠定了基础。     

The Diagnostic Value of Quantitative Assessment of Diatom Test for Drowning: An Analysis of 128 Water‐related Death Cases using Microwave Digestion‐Vacuum Filtration‐Automated Scanning Electron Microscopy

The value of diatom test for the diagnosis of drowning remains controversial. The conventional forensic diatom test with low sensitivity is not a useful tool to provide accurate information about diatom in the tissues and organs. To improve the sensitivity of the diatom test, we developed a novel method called the Microwave Digestion‐Vacuum Filtration‐Automated Scanning Electron Microscopy (MD‐VF‐Auto SEM) method which resulted in a high recovery of diatoms. In this article, we analyzed 128 water‐related death cases. Our results showed that the MD‐VF‐Auto SEM method could achieve a much higher positive rate (0.97) in drowning cases. Large amounts of diatoms are retained, even concentrated, in the lung tissues during the intense breathing movement in drowning process. This might be useful for the diagnosis of drowning. Our research indicates that the MD‐VF‐Auto SEM method would be a valuable methodology in the study of diatom test for the forensic community.     

猪瘟病毒石门株E2蛋白的单抗制备及抗原表位鉴定

用猪瘟病毒石门株E2(SM-E2)的BC区原核表达蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备单抗,测定其效价并鉴定抗原表位。结果表明,制备了1株持续、稳定分泌抗SM-E2的单克隆抗体2B10,效价在1∶600～1∶1 000之间。单抗2B10能与常规SDS-PAGE转膜的SM-E2蛋白发生反应,表明其识别的是线性表位,并且该单抗只能识别石门毒株,而不能与C株疫苗及2型流行毒株发生反应。点突变E2蛋白ELISA分析结果表明,该单抗不与707、709、711、713和714位突变蛋白发生反应,表明单抗2B10识别的线性表位为707I-X-P-X-G-X-G-G714。该单抗对猪瘟病毒抗原多样性分析和致病机制研究有一定的应用价值。     

口蹄疫病毒Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型比较分析

为了明确口蹄疫病毒(FMDV)Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型差异,对采自不同宿主的4株FMDV进行了分子特征分析和蚀斑形态的比较。结果显示,来自不同宿主动物的分子特征差异主要表现为猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2与2个牛源毒株之间具有21个特异性的氨基酸置换位点,分散在ORF范围内。猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S1具有与牛源毒株大量相似的氨基酸位点,并且与2株牛源毒株一样,都显示为小斑的蚀斑显型,而猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2在蚀斑试验中显示为大小斑混合存在。结果表明,猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2的变异位点对病毒蚀斑显型的改变具有重要意义。     

鸭病毒性肝炎病毒RNA聚合酶在真核细胞中的表达及亚细胞定位

为研究鸭病毒性肝炎病毒RNA依赖性RNA聚合酶的分子生物学特性及其在细胞中的定位,构建了RNA依赖性RNA聚合酶与增强型绿色荧光蛋白融合表达的真核重组表达质粒;然后用脂质体介导转染MDCK细胞。分别使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜以及4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和蛋白免疫电泳试验等方法检测了RNA依赖性RNA聚合酶在细胞中的表达和亚细胞定位情况。结果表明,RNA依赖性RNA聚合酶能与增强型绿色荧光蛋白一起在MDCK细胞中良好表达,且主要分布于细胞核中,Western-blot分析结果显示,融合蛋白在80ku处出现阳性条带,说明表达的外源蛋白具有免疫活性。表明成功构建了RNA依赖性RNA聚合酶与增强型绿色荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞内实现了表达,通过检测荧光蛋白,发现RNA依赖性RNA聚合酶主要在细胞核中发挥复制酶的功能。     

提高高校思想政治教育实效性的方法探析

在高校思想政治教育中,实效性缺失成为亟待解决的问题。提高实效性应逐渐成为加强和改进大学生思想政治教育的关键。文章在对高校思想政治教育实效性缺失产生的原因进行分析的基础上,对改进高校思想政治教育方法,切实提高高校思想政治教育的实效性,提出了有针对性的建议。     

109例外伤性视损害的法医学分析

目的对外伤性视力损害的类型,机制及法医学鉴定进行分析。方法收集109例外伤性视损害案例,回顾性分析其两眼视差、屈光参差、受伤眼别、视力分布等项目。结果男女比例5.8:1,多见于30~59岁;单、双眼受伤的比例17.17:1,故意伤害案左、右眼受伤的比例1.39:1;受伤眼115目,83目达低视力或盲程度;两眼视力之差≥3行视标的95人(87.16%);屈光参差2.25D~6.00D的9人,6.00D的23人。结论两眼视差、屈光参差等问题在鉴定实践中并不少见,但我国鉴定标准尚未涉及,建议制定相关标准时关注双眼整体功能。     

美国“不首先使用核武器”政策建议：缘起与演进

“不首先使用核武器”政策是指有核国将核武器的作用严格限定在核威慑上,公开宣布放弃首先使用核武器,核武器仅用作核报复(核反击)。从冷战开始至今,美国国内一直在从理论上探讨“不首先使用核武器”问题。支持者与反对者从现实主义、自由主义和建构主义的角度提出各自的理由。美国政府内部也一直都有采取“不首先使用核武器”政策的建议,但美国却始终未能正式采纳并宣布这一政策。阻碍美国政府采纳这一政策建议的因素长期存在,包括思维方式的桎梏、政治工具的局限性、核作战战略准备的内在矛盾和盟国持续施加的压力等。鉴于目前的安全环境,在可预见的未来,美国都不大可能正式宣布采取“不首先使用核武器”政策。尽管如此,由于“不首先使用核武器”政策表达出大国避免核战争、保持战略稳定的意愿,同时有利于回应广大无核国的安全诉求,避免误判和危机,增进战略互信,维持全球和平与战略稳定,维护人类社会共同福祉,该政策建议仍会继续影响美国政府在相关领域的决策进程。     

对江西省省农村道路交通管理工作机制创新的思考

随着农村道路建设与农村机动化水平的不断加快和提升,江西省农村道路交通管理面临着严重问题,存在农村机动化水平的快速提升与交通工具的安全性能差、农村出行需求的急剧增长与农民交通安全意识的淡薄及＂村村通公路＂的全面实施与交通安全设施的缺失三个方面的矛盾。应从政府职能部门的层面上推动农村交通管理工作社会化进程,公安交警部门应创新工作方法,提高管理效能,创新农村交通管理工作机制,为加强农村交通管理工作提供坚强的组织保证,加强领导和部门协作,完善农村道路交通管理工作机制,从而开创农村交通管理工作新局面,实现农村交通安全形势的根本好转。     

试论刑事侦查语境下“形迹可疑型自首”的法律认定

形迹可疑型自首是对传统自首的发展,对于便利诉讼和提高诉讼效益具有很大的作用。但对形迹可疑型自首的理解运用学莽却存在分歧。只有将其纳入刑事侦查实践中审视思考。并相应运用刑事法学的相关知识才能对“形迹可疑”,“盘问”等概念做出全面深入的认识理解,以求在司法实践中时各种类型的自首做出准确的法律认定。