牛G3BP1蛋白的原核表达及其对牛cGAS生物酶催化活性的影响

为了探究牛G3BP1(bG3BP1)对DNA识别受体cGAS生物酶催化活性的影响,本研究提取牛血液淋巴细胞中总的RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,克隆出bG3BP1基因全长;随后构建bG3BP1的原核表达载体pET-28a-SUMO-bG3BP1,将其转化至大肠杆菌中进行诱导表达,使用镍亲和层析柱对重组蛋白bG3BP1进行纯化,并切除His6-SUMO标签后再经镍柱纯化;最后将获得的bG3BP1蛋白用于牛cGAS(bcGAS)的体外酶促反应,采用ELISA方法检测酶促合成产率。结果显示,可溶性表达的bG3BP1蛋白促进了bcGAS的体外酶促反应,提高了第二信使分子2′3′-cGAMP的产率,这为2′3′-cGAMP的大规模生产及应用提供了研究思路和技术方法。     

合作猪TLR3及其剪接体的基因克隆与序列分析

为了研究猪Toll样受体3(pTLR3)基因的选择性剪切机制,应用反转录-聚合酶链反应扩增技术,从猪外周血淋巴细胞中克隆了pTLR3及其剪接体基因(pTLR3a,pTLR3b)。pTLR3基因序列分析表明,克隆的基因ORF为2 718bp,编码905个氨基酸;推导的氨基酸序列分析显示,在其胞外区具有LRRs结构域,胞内区含有TIR结构域,具有TLR家族的典型结构特征。剪接体分析显示,pTLR3a和pTLR3b基因缺失第3外显子,都没有可编码跨膜区、胞内区的部分。相似性分析显示,与牛、马、猫和人的相似性较高,与家兔、鼠的相似性次之。证实pTLR3可变剪接体的存在为进一步研究其功能奠定了基础。