副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。     

猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族基因的克隆与序列分析

为了研究猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的结构特征及编码蛋白的功能,根据GeneDB中获得的2条cDNA序列设计引物,以猪囊尾蚴总RNA为模板进行RT-PCR,获得猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族(TsoStefin和TsoCystatin)基因的完整开放阅读框序列,并进行生物信息学分析。结果表明,所获得的2条序列均含有半胱氨酸蛋白酶抑制剂特征性的结构域。TsoStefin由98个氨基酸残基组成,不含二硫键和糖基化位点,为细胞内蛋白;TsoCystatin由274个氨基酸残基构成,含有1个糖基化位点和2个相似的结构域,第1~18位氨基酸残基组成信号肽,属分泌型蛋白。系统发育树显示,TsoStefin是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族1的成员,TsoCystatin属家族2的成员,与部分绦虫的亲缘关系较近。从上述结果推测,所获得的2条基因均属于猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族基因。     

后基因组时代的分子生物学技术

20 0 0年 6月 2 6日 ,人类基因组计划 (ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ,ＨＧＰ)与Ｃｅｌｅｒａ公司的负责人共同宣布了人类基因组工作框架图的完成 ,2 0 0 1年 2月分别将自己测定的框架图发表在“Ｎａｔｕｒｅ”和“Ｓｃｉ ｅｎｃｅ”向大众公布。同时 ,模式生物基因组计划(ｍｏｄｅｌｏｒｇａｎｉｓｍ ｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ ,ＭＯＧＰ)已完成了大肠埃希氏菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)、流感嗜血杆菌(Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ)、酿酒酵母 (Ｓａｃｃｈａ ｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ)、秀丽…     

野生胡子鲶"腹水病"病原分离和鉴定

从发生"腹水病"的野生胡子鲶体内分离出14株致病菌,经生化鉴定,有12株细菌(87%)定为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),1株定为大肠埃希氏菌(Escherichia coli).动物回归试验也证实了细菌的致病性.因此,本次野生胡子鲶发生"腹水病"主要病原是豚鼠气单胞菌.药敏试验结果对细菌有效的药物有头孢类抗生素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、新霉素、氯霉素、庆大霉素.     

猪IFN-γ基因的融合表达及其表达产物的生物学特性

依照猪IFN-γ(pIFN-γ)成熟蛋白基因序列设计引物,将已扩增的pIFN-γ基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了GST-pIFN-γ融合表达载体,该载体转化宿主菌BL21后用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了筛选和优化,筛选出最佳诱导表达条件后大量诱导表达,可溶性的表达产物经GST琼脂糖凝胶亲和纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化.经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实得到了高纯度的融合蛋白,该蛋白的分子质量为42ku.选择FMDV和PRV两种不同的病毒(RNA病毒和DNA病毒)进行GST-pIFN-γ抗病毒活性测定.结果表明,GST-pIFN-γ融合蛋白可有效抑制这两种病毒引起的细胞病变,其对FMDV的抑制作用远远大于对PRV的抑制.对GST-pIFN-γ融合蛋白的稳定性及机体毒副作用的研究表明,该pIFN-γ的稳定性有较大提高,而毒副作用大大降低.     

对非公有制企业实行民主管理的思考

一、非公有制企业中的民主是社会主义民主的重要组成部分 ,同时 ,非公有制企业职工的民主管理权利是一种法定权利。《中华人民共和国国民经济和社会发展第十个五年计划纲要》中 ,把坚持和完善以职工代表大会为基本形式的企业民主管理制度 ,进一步扩大基层民主 ,实行厂务公开 ,作为加强民主政治建设 ,发展社会主义民主的一项重要任务提了出来。要落实我们的奋斗目标 ,实现中华民族的伟大复兴 ,当然离不开包括非公有制企业职工在内的所有职工的共同努力。非公有制企业中的民主是社会主义民主的重要组成部分 ,其职工也是国家的主人。没有非公有…     

破陈规陋习 育文明乡风——河南省宁陵县着力打造全国婚俗改革新标杆

<正>红白喜事政府划“红线”、村规民约群众定“规矩”……作为2021年民政部确认的全国首批婚俗改革实验区之一,河南省宁陵县结合当地实际,坚持先改先试先行,创新实践“把好一个风向、依托两大平台、制定三层约束、建好四大阵地”工作总机制,勇于破旧立新,狠刹大操大办、铺张浪费、天价彩礼等不正之风,着力打造全国婚俗改革新标杆,让文明新风充盈乡村。     

浅谈警察心理健康教育的人本价值

警察心理健康教育具有重要的人本价值。从历史发展看,警察心理健康教育是沿着以人为本的方向演进。警察作为心理健康教育价值的承载者,其心理的复杂性是心理健康教育的人本向度,警察心理健康教育的人本价值则体现在从警察个体全面发展到警察群体素质的综合提高上。只有树立以人为本的警察心理健康教育观,方能真正实现其人本价值。     

论受贿犯罪推定规则的确立

受贿犯罪推定认定是解决司法实务中"一对一"问题的有效路径.受贿犯罪推定规则的内容至少应当包括适用范围的特定性、适用条件的限定性与适用结论的可反驳性三个方面.     

改革开放新时期邓小平党的领导核心观研究

邓小平党的领导核心观是在新的时代条件下最终形成的。该思想的形成是马克思主义经典作家关于党的领导核心论述的理论逻辑、中国共产党关于领导核心问题的经验教训的历史逻辑、新时期中国共产党需要处理更加复杂的风险和挑战的现实逻辑与邓小平切身感受的主观条件的统一。邓小平党的领导核心观由领导核心的三个层次、领导核心的活动原则、正确认识和评价领导核心三个方面构成,丰富和发展了马克思主义政党领导核心理论,促进了新时期党的领导的加强、党内领导核心的形成以及安定团结政治局面的实现,对新时代树立和维护领导核心具有积极借鉴和指导意义。