Asia 1型口蹄疫病毒多表位基因的原核表达及ELISA 检测方法的建立

根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMDl8-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VPlAsia).然后,将VP1Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VPlAsia,接着将其转入BL21茵中进行原核表达.以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清.结果显示,VPIAsia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VPIAsia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法.以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29).本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础.     

Asia 1 型口蹄疫病毒多表位基因的设计及其在毕赤酵母中的表达

为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)特异性诊断抗原,根据国内Asia 1型FMDV流行毒株的序列,合成了2个FMDV流行毒株VPl基因的5个抗原表位.采用Insight Ⅱ软件进行蛋白空间构象模拟,证实设计的多表位分子结构符合要求.将合成的多表位基因按设计的酶切位点进行酶切连接,构建了Asia 1型FMDV VP1双拷贝基因重组质粒(pMD18-dVP1Asia).从该重组质粒获得dVP1Asia基因,与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-dVP1Asia.用BglⅡ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌.经筛选、鉴定,成功获得了表达FMDV多表位VP1蛋白的阳性重组酵母茵.该阳性重组酵母茵经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白.Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别Asia 1型FMDV抗体,且具有很好的反应原性.     

法国不当得利法律制度研究

一、法国不当得利法律制度概述 不当得利,指无法律上的原因而受益,致他人受损害的事实.其法律性质属于自然事实中的事件,为债的发生原因之一.①不当得利发端于罗马法上的"返还诉权",该诉权以请求给付特定债之标的物为内容,属于准契约的一种.经过漫长的演变,返还诉权于近代发展为概括性的不当得利请求权,并得到各国法律的普遍承认.     

新时代岭南文化的创新发展

岭南文化是生长在中华文化百花园的艳丽花朵,具有开放兼容、务实进取、敢为人先的独特品格。在近现代,岭南文化不断推动中国社会的变革和发展,在改革开放中更是发挥了重要的"火车头"的作用,引领我国改革开放不断前行。在新时代,为了使广东更好实现"四个走在全国前列",极大地满足人民群众对精神文化的需要,推进粤港澳大湾区文化融合发展,岭南文化应着重在五个方面创新发展:一是创新岭南文化精神,二是加强历史文化遗产保护,三是深化文化体制改革,四是文化产业发展提速,五是推动文化对外合作。     

我国儿童早期照顾政策框架构建——基于资源平等理论视角

我国儿童早期照顾领域存在照顾责任公私分担失衡、照顾资源分布不均、照顾劳动性别分工和代际分工不合理等现象,亟待公共政策干预。立足我国现实,以德沃金的资源平等理论作为伦理基础,可提出儿童早期照顾政策的伦理依据,即以保障儿童与母亲权利为核心原则,以保障父母工作-家庭平衡、祖辈老年权益为辅助原则。在政策分析中,首先基于政策网络模型,阐述政策行动者的网络定位及他们在网络间的互动关系,厘清不同行动者之间的资源与权力交换机制;然后利用图尔敏结构模型,提出具有开放性和包容性的政策方案,并最终形成旨在保障儿童和照顾者权利、促进家庭和社会发展的我国儿童早期照顾政策框架。     

论亲友介入人质谈判的价值与方法

亲友介入人质谈判具有情感抚慰、情境切换、角色替代、诚意传递四个方面的独立价值,同时也可能产生威胁亲友人身安全,刺激劫持者,亲友无意间泄露案件信息和处置秘密,擅自采取夺取作案工具、制服劫持者的行动,“临阵倒戈”等诸多问题.为发挥优势,杜绝风险,在运用这一措施时,除需做好介入亲友的人员选择与心理建构工作之外,还须从介入时间、氛围营造、空间控制、情绪控制、信息控制、行为控制六个方面对亲友的规劝活动进行全程控制.     

试论《瀛奎律髓》“怀古类”律诗的思想内容

《瀛奎律髓》"怀古类"律诗的思想内容突出地体现为忧患意识和批判精神。领悟"怀古类"律诗的思想内容,不仅有利于对《瀛奎律髓》"怀古类"律诗的理解,也有利于对中国古代几千年来的怀古诗的理解,进而可以对怀古诗的鉴赏和研究创造出更好的条件,其意义和价值都是非常重要的。     

The Prehistoric Homestead at Zhoukoudian

THE earliest residents of Beijing dwelt in the mountain caves at Zhoukoudian to the southwest of down-town Beijing, 700,000 to 230,000 years ago. Their origins and where they moved on to are unknown. But cultural and anthropological arti-facts excavated from the Zhoukoudian caves testify to their existence.     

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验,并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示,用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品,第1周抗体阳性检出率为50%,从第2周起抗体阳性检出率均为100%,而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好,-20℃保存18个月稳定,与其他病毒参考血清无交叉反应,与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83.3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测,结果,4个猪场阳性率高达90%以上,仅有2个猪场为阴性,其余猪场阳性率为10%~57%。     

道路交通事故现场图绘制系统开发研究及应用

实现了计算机辅助交警绘制道路交通事故现场图，以此提高事故现场信息收集及以现场图记录内容的效率和精度。具有基本图形绘制，人体、道路、车辆、痕迹和道路交通设施绘制，标注和文档管理等四大功能。实践表明，该系统在交警部门实际交通事故勘查中具有一定的实用推广价值。