多头带绦虫TPx基因片段的克隆及原核表达

从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个氨基酸.对TmTPx基因片段进行限制性酶切后连接到表达载体pGEx-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-TmTPx,转化大肠杆菌DH5a后筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21,以IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物.结果显示,成功表达了大小约为43 ku的融合蛋白.对表达产物纯化后免疫家兔,采集血清用ELISA测定抗体效价,发现兔抗TmTPx重组蛋白的抗体能够与多头蚴原头节抗原发生特异性反应,说明该重组蛋白具有较好的免疫原性.     

应用TmAdh3重组蛋白建立绵羊脑多头蚴病间接ELISA诊断方法的研究

为评价多头带绦虫TmAdh3重组蛋白作为脑多头蚴病诊断抗原的潜力,根据多头带绦虫TmAdh3基因组序列,人工优化合成TmAdh3基因ORF序列并连接至表达载体pGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达,利用Western-blot分析纯化的重组蛋白的反应原性,优化检测条件,建立脑多头蚴病间接ELISA诊断方法并进行评价。结果显示,成功表达了分子质量大小为39.0 ku的重组蛋白rTmAdh3。间接ELISA检测的最适反应条件为：5.00μg/m L重组蛋白rTmAdh3在4℃包被过夜;1∶100稀释血清在37℃孵育30min;1∶10 000稀释的HRP标记的酶标二抗在37℃孵育45 min,底物避光显色10 min。应用建立的方法可检测到人工感染脑多头蚴后第3～8周的绵羊血清;对40份自然感染脑多头蚴的绵羊（剖检确认脑部有包囊）血清的阳性检出率为22.5%(9/40)。与细粒棘球蚴感染绵羊血清和细粒棘球蚴Eg95免疫绵羊血清交叉反应率为5%(4/80)。结果表明,本研究建立的以TmAdh3重组蛋白作为检测抗原的间接ELISA诊断方法可用于绵羊脑多头蚴感染早期的筛选。     

西藏那曲地区旋毛虫分离株的分子分类鉴定

从西藏那曲地区旋毛虫抗体阳性藏猪获取膈肌组织,显微镜检查后采用人工消化法收集旋毛虫肌幼虫。提取旋毛虫基因组,以旋毛虫(T.spiralis)和乡土旋毛虫(T.nativa)标准株为对照,应用线粒体核糖体小亚基及大亚基RNA特异引物进行PCR扩增,结果扩增产物为650bp,与T.spiralis一致。对西藏那曲旋毛虫分离株的5SRNA内转录间隔区基因进行PCR扩增及序列测定,与GenBank数据库中已知的旋毛虫序列进行比对分析,确定其分类地位。结果扩增到735bp的片段,与T.spiralis的相似性达到99%,仅有3个核苷酸不同,可以归为一类。结果表明,西藏那曲旋毛虫分离株应该属于T.spiralis。     

环境纠纷中非诉讼调解问题研究

非诉讼调解制度是社会主义法治建设中关于多元化纠纷解决机制的重要机制,是我国根据自身实际,结合古今的民间调解经验、实践得来的具有中国特色的法律制度。从古至今,我们一直在追求非讼的社会秩序,本文以环境纠纷为切入点,结合我国发展实际浅析民事诉讼调解制度与环境纠纷非诉讼调解制度存在的问题,并提出我国非诉讼调解制度完善的建议,找出环境纠纷调解的可行性设计,丰富多元化纠纷解决机制。     

强“魂”健“体” 让文化神形兼备

<正>读了《人民日报》10月26日第四版"人民论坛"栏目发表的署名永春的文章《文化"魂"与"体"辩证关系刍议》,很受教益和启发。可以说,厘清社会主义文化的精神价值(魂)与物质形态(体)的辩证关系,为我们深刻领会党的十七届六中全会的精神实质提供了一把金钥匙;也为我们深化文化体制改革,推进社会主义文化大发展大繁荣提供了方法论。     

新中国成立后毛泽东和黄炎培之间的书信交往

黄炎培（1878-1965）是中国近现代一位著名的爱国主义者和民主主义教育家（中国近代职业教育的创始人和理论家），同时也是一位著名的社会活动家．曾为中国的解放和进步事业作出过重要贡献。新中国成立后．黄炎培历任中央人民政府委员、政务院副总理兼轻工业部部长、全国人大常委会副委员长、全国政协副主席、中国民主建国会中央委员会主任委员等。     

参与过中共一大筹备的神秘女性丁宝林

在上海小组成立过程中的一系列会议上，都有一位不知名的女子在场 1920年5月，陈独秀南下上海组织马克思主义研究会，其核心是“三社”，即陈独秀的《新青年》编辑部、邵力子的民国日报社、沈玄庐与李汉俊等的星期评论社。据杨之华回忆，“这个社（指星期评论社）当时有陈望道、李汉俊、沈玄庐、戴季陶、邵力子、刘大白、沈仲九、俞秀松、丁宝林（女）”。     

旋毛虫组织蛋白酶B基因TsCB1的克隆与生物信息学分析

为了研究旋毛虫组织蛋白酶B的功能,对GenBank中旋毛虫基因组数据库和EST数据库进行检索,获得旋毛虫组织蛋白酶B的cDNA序列并设计引物。以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后测序并进行生物信息学分析。结果表明,成功克隆到旋毛虫组织蛋白酶B基因(TsCB1)的cDNA序列,TsCB1cDNA含有1个由1 449个核苷酸组成的完整的开放阅读框,编码482个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量理论值为55.1ku,理论等电点为7.66。TsCB1第1～35位氨基酸残基为信号肽序列,有2个潜在的N-糖基化位点,具有1个生长调节素B结构域和半胱氨酸蛋白酶结构域,半胱氨酸残基活性位点被丝氨酸残基所替换,同源性分析表明与其他线虫组织蛋白酶B的一致性在60%左右。     

一套房改房的N年纷争

吴平南老人今年78岁。1993年12月31日,他按照职工购买公房的政策购得原所在单位——镇江市某集团公司位于镇江市东吴路120号A幢B室房屋,此后该房屋登记的所有权人为吴平南。吴平南与和自己同龄的李青霞于1954年10月登记结婚。1955年8月生一子,取名李波轮;1957年3月生一女,取名吴海霞;1958年12月生一女,取名吴海藻;1961年明生一子,取名吴兴旺。1983年前后开始,吴、李两人夫妻关系逐步恶化,最终于2010年1月经法院调解离婚。离婚时,因吴平南称分割该房改房屋会涉及儿媳张伯智（李波轮的妻子,与李波轮1979年登记结婚）的权益,