副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。     

猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族基因的克隆与序列分析

为了研究猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的结构特征及编码蛋白的功能,根据GeneDB中获得的2条cDNA序列设计引物,以猪囊尾蚴总RNA为模板进行RT-PCR,获得猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族(TsoStefin和TsoCystatin)基因的完整开放阅读框序列,并进行生物信息学分析。结果表明,所获得的2条序列均含有半胱氨酸蛋白酶抑制剂特征性的结构域。TsoStefin由98个氨基酸残基组成,不含二硫键和糖基化位点,为细胞内蛋白;TsoCystatin由274个氨基酸残基构成,含有1个糖基化位点和2个相似的结构域,第1~18位氨基酸残基组成信号肽,属分泌型蛋白。系统发育树显示,TsoStefin是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族1的成员,TsoCystatin属家族2的成员,与部分绦虫的亲缘关系较近。从上述结果推测,所获得的2条基因均属于猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族基因。     

猪IFN-γ基因的融合表达及其表达产物的生物学特性

依照猪IFN-γ(pIFN-γ)成熟蛋白基因序列设计引物,将已扩增的pIFN-γ基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了GST-pIFN-γ融合表达载体,该载体转化宿主菌BL21后用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了筛选和优化,筛选出最佳诱导表达条件后大量诱导表达,可溶性的表达产物经GST琼脂糖凝胶亲和纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化.经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实得到了高纯度的融合蛋白,该蛋白的分子质量为42ku.选择FMDV和PRV两种不同的病毒(RNA病毒和DNA病毒)进行GST-pIFN-γ抗病毒活性测定.结果表明,GST-pIFN-γ融合蛋白可有效抑制这两种病毒引起的细胞病变,其对FMDV的抑制作用远远大于对PRV的抑制.对GST-pIFN-γ融合蛋白的稳定性及机体毒副作用的研究表明,该pIFN-γ的稳定性有较大提高,而毒副作用大大降低.     

后基因组时代的分子生物学技术

20 0 0年 6月 2 6日 ,人类基因组计划 (ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ,ＨＧＰ)与Ｃｅｌｅｒａ公司的负责人共同宣布了人类基因组工作框架图的完成 ,2 0 0 1年 2月分别将自己测定的框架图发表在“Ｎａｔｕｒｅ”和“Ｓｃｉ ｅｎｃｅ”向大众公布。同时 ,模式生物基因组计划(ｍｏｄｅｌｏｒｇａｎｉｓｍ ｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ ,ＭＯＧＰ)已完成了大肠埃希氏菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)、流感嗜血杆菌(Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ)、酿酒酵母 (Ｓａｃｃｈａ ｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ)、秀丽…     

改革开放新时期邓小平党的领导核心观研究

邓小平党的领导核心观是在新的时代条件下最终形成的。该思想的形成是马克思主义经典作家关于党的领导核心论述的理论逻辑、中国共产党关于领导核心问题的经验教训的历史逻辑、新时期中国共产党需要处理更加复杂的风险和挑战的现实逻辑与邓小平切身感受的主观条件的统一。邓小平党的领导核心观由领导核心的三个层次、领导核心的活动原则、正确认识和评价领导核心三个方面构成,丰富和发展了马克思主义政党领导核心理论,促进了新时期党的领导的加强、党内领导核心的形成以及安定团结政治局面的实现,对新时代树立和维护领导核心具有积极借鉴和指导意义。     

重组蛋白P60与LLO对单核细胞增多性李斯特菌灭活疫苗的免疫增强效果

为增强单核细胞增多性李斯特菌(简称单增李斯特菌)灭活疫苗的免疫效果,对单增李斯特菌入侵相关蛋白(P60)基因进行了克隆、表达及纯化,分别与低剂量李斯特菌溶血素O(LLO)、单增李斯特菌灭活菌混合,以MontanideISA206为佐剂制成疫苗,皮下接种家兔,并设灭活疫苗免疫组和PBS对照组,定期检测3组家兔的血清抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化;二免后第21d每只家兔腹腔注射2×108CFU单增李斯特活菌攻毒,观察各组家兔的发病情况,每隔24h检测一次细菌在各组家兔体内的繁殖率。结果表明,添加P60和低剂量LLO重组蛋白的单增李斯特菌灭活疫苗免疫组家兔二免后抗体水平明显高于其他各组,且能诱导Th细胞向Th1型分化,抑制Th2型细胞的分化,调节抗原特异性免疫应答,能有效抵抗单增李斯特菌的感染,使细菌在家兔体内(外周血、脾)的几何增长率从64.69%降到24.06%,免疫效果明显优于灭活疫苗单独免疫组。证明P60和低剂量LLO能增强灭活疫苗的免疫保护效果。     

小反刍兽疫病毒致病性的研究进展

综述了不同毒株小反刍兽疫病毒引起的临床症状和病理变化,其中宏观性损伤、微观性病变和病毒的组织分布方面均有特征性表现。推测小反刍兽疫病毒与麻疹病毒属其他成员的致病机理相似,并分析了小反刍兽疫研究中存在的问题和未来发展趋势。     

小反刍兽疫病毒F基因真核载体的构建与表达

根据GenBank中小反刍兽疫病毒(Nigeria 75/I株)F基因序列设计了引物,应用RT-PCR方法获得了目的基因,纯化回收后将其连接到克隆载体pMD18-T上.将鉴定与序列测定后的目的基因再克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,经过鉴定,成功构建了含有小反刍兽疫病毒F基因的真核细胞表达栽体pEGFP-N1-F.利用脂质体介导阳性pEGFP-N1-F质粒转染了BHK-21细胞.Western-blotting证实,表达的pEGFP-N1-F融合蛋白(90 ku)具有免疫活性.     

完善我国公务员激励机制的思考

公务员激励机制是我国公务员制度的重要组成部分,随着我国市场经济体制的完善和政府人事管理制度改革的不断发展,对公务员管理体制进行创新,完善激励机制,提高行政效率,成为我国行政改革的重要内容.     

规范我国专利代理服务的法律思考

专利代理服务作为知识产权服务业的重要组成部分,对保障专利制度的有效运转,推动我国知识产权强国和创新型国家建设具有重要作用.我国现行专利代理服务无论是在主体资质、服务能力、市场监管,还是在服务质量方面都存在许多不足.较之域外相关立法和经验,我国专利代理服务制度有必要从服务标准层面对服务机构、服务人员、服务行为、服务管理、服务评价等方面予以完善,最大限度地发挥专利代理服务在我国经济建设过程中的功能和价值.