绵羊肺炎支原体P130蛋白主要抗原域原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

为建立绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)快速检测方法,本试验以绵羊肺炎支原体膜蛋白P130为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。根据基因功能预测注释,绵羊肺炎支原体(Mo)P130蛋白显示编码大小约为130.5 ku,本试验以Mo全基因组为模板,使用PCR扩增Mo P130的基因片段,根据生物信息学软件分析,选取P130主要抗原域P130-3(693 bp),构建P130蛋白主要抗原域原核表达载体pET32a-P130-3,并转化至BL21菌,在0.8 mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以P130-3为诊断抗原,经过优化反应条件,建立检测Mo抗体的间接ELISA方法。结果表明,表达的P130-3蛋白经鉴定大小为43 ku,与预期值相符。P130-3-ELISA方法阴、阳判定临界值为:D_(450)值=0.238,该方法与口蹄疫等阳性血清均无交叉反应,具有极强的特异性。组内变异与组间变异均小于5%,具有很好的重复性,利用该方法与兰州兽医研究所推出的间接血凝法对200份临床样本进行检测,两者的符合率在90%以上。本研究建立的Mo间接ELISA方法可用于Mo的诊断和流行病学调查。     

无谬管理——总经理的启蒙书

在产品质量的管理中,人们已熟悉了“零缺点”、“无次品”的说法与标准。但是,总经理对企业的管理工作本身,能不能趋于至善呢?这一点对企业的发展更为关键。为此我们编选出一组短文,介绍无谬管理(No—Nonsense Management)的一些情况。理查·S·史罗马曾任国际电报电话公司(ITT)之分部总裁及六个多国公司总经理或董事职位,并兼任美国多家大学管理学院教授。     

论积极违反契约

1900年《德国民法典》仅规定迟延、不能两种给付障碍形态,以积极行为违反契约(瑕疵给付或违反不作为债务)时,并无明文,就其法律效果及其证成,学说上多有争议。通过对学说与判例之精细检讨,史韬伯认为,积极违反契约,应类推第286条发生损害赔偿义务,于双务契约中,应类推第326条发生解除权或主张不履行之损害赔偿;拒绝履行亦属积极违约之一种,债权人因此得进一步免于催告、备货之义务。     

公益诉讼与法律制度变革构想

公益诉讼是使穷人和社会弱势群体能够通过司法救济途径来维护和实现自己基本权利的一种新型诉讼形式。其主要作用在于使法院能为弱势群体合法权益提供充分的保护，对侵犯弱势群体合法权益的个人或组织进行制裁和惩戒，并使之停止侵犯行为。进一步实现彻底的公益诉讼仍需要在制度上进行创新，充分发挥社会团体的利益代表功能以及律师在公益诉讼中的作用；立法机关也应在适当时机，拓展公益诉讼立法的范围。     

环境法医“捉凶”记

原国家海洋局第一海洋研究所副所长高振会经常面对这样的“犯罪现场”:大片枯黄的稻田被浇灌了工厂排放的污水,可方圆五公里内的几家工厂谁才是肇事元凶?海上泄露的石油动辄漫延数十公里,捧着一兜死亡的虾蟹,渔民们也不知道该怪罪油轮还是油井.     

习近平对台工作重要论述的核心要义与时代价值

习近平对台工作的重要论述,是习近平新时代中国特色社会主义思想的重要组成部分,是我们党在解决台湾问题、推进祖国统一实践中形成的最新理论结晶,是新时代党解决台湾问题总体方略形成的根本依据,是做好新时代对台工作的根本遵循和行动指南。本文紧密联系党的十八大以来以习近平同志为核心的党中央矢志不渝推进祖国统一的创造性实践,从九个方面概述了习近平对台工作重要论述的主要观点与时代价值,全面立体地呈现了习近平对台工作重要论述的丰富内涵、形成过程、内在逻辑、独创性贡献及其现实指导意义。     

细粒棘球绦虫六钩蚴EG95抗原基因的克隆及原核表达

利用RT PCR从激活的细粒棘球绦虫六钩蚴中扩增了EG95 cDNA,并亚克隆至原核表达载体pGEX 4T 1上,转化至大肠埃希氏菌BL21,用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白质。结果表明,从六钩蚴中克隆到了EG95 cDNA,序列长度为481 bp,包括471 bp的开放阅读框,与新西兰株EG95抗原基因序列完全一致;SDS PAGE电泳结果显示,重组表达质粒产生了约42 ku的目的带,其中EG95蛋白质的分子质量约为15.2 ku,与预期结果一致;Western blotting试验检测表明,融合表达产物可与囊性包虫病人血清发生反应。试验结果提示,EG95 基因高度保守,所表达的EG95蛋白作为抗原疫苗具有广泛的适用性。     

“三农”问题要再抓紧

农业、农村、农民问题,在中国怎么强调也不过分。加入世贸组织后,我国农业如何应对?连日来,代表和委员们围绕和讨论审议政府工作报告,围绕农民的增收减负,围绕迎接加入世贸组织挑战,纷纷发表意见。他们认为,解决“三农”问题应抓紧再抓紧。     

浅析其他普遍行政行为

在行政法理论中,有关其它普遍行政行为的研究还是一个较为薄弱的领域,而在行政管理实践中,其地普遍行政行为的实施又十分广泛.为此,应加强对其他普遍行政行为的理论研究,从而为更好地规范其他普遍行政行为的实施提供理论上的指导.本文基于这一认识,将围绕其他普遍行政行为的概念、特点、种类、层级效力、地域效力等问题进行一些分析.一、其他普遍行政行为的概念目前,理论界多数人认为,其他普遍行政行为是指国家行政机关在依法行使国家行政权力过程中,针对不特定的行政相对人,发布     

成人教育学风建设初探

成人学员的特殊性决定了成人教育学风建设的重要性。学风形成由内部、外部两方面因素决定。应通过教育学员明确学习目的、端正学习态度等形成良好的内部环境,通过加强班风、教风建设等形成良好的外部环境,从而推动学风顺着良性轨道前行。