牛分枝杆菌ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中的融合表达

以牛分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得了ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)将ESAT-6基因和CFP-10基因通过(Gly4Ser)3接头连接,得到了融合基因.将融合基因片段先克隆于pMDl8-T载体,再亚克隆到表达载体pET32a(+)中,通过限制性内切酶消化、菌液PCR鉴定、序列分析证实得到含预期序列的重组质粒pET-ESAT-6-CFP-10;该质粒转化BL21(DE3);经IPTG诱导,表达出了40 ku的融合蛋白;用Ni螯合层析方法纯化该蛋白,经SDS-PAGE检测,出现了清晰的单一条带;Western-blotting试验结果显示,该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应.结果表明,ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中融合表达成功并具有良好的反应原性.     

计算机网络教学探讨

随着计算机网络的迅猛发展,尤其是Internet的普及和推广,计算机网络已成为当今最热门的学科之一,掌握必要计算机网络知识和技术已经成为当代大学生的一项基本技能,但<计算机网络>课程内容丰富、知识量大,实践性又很强,难教也难学,从课程特点出发,结合教学实践体会,总结出一些切实可行的的教学方法与教学手段,尤其是针对计算机专业(包括网络监察专业)学生教学,以促进该课程教学水平的提高.     

阿维菌素对体外培养王鸽神经细胞内游离钙离子浓度及CaM mRNA表达的影响

提取美国王鸽8～9日龄鸽胚脑神经细胞进行体外培养,按照阿维菌素(AVM)染毒的剂量分成4组,分别为0ìg/L(Ⅰ组)、2.5 ìg/L(Ⅱ组)、5 ìg/L(Ⅲ组)和10 ìg/L(Ⅳ组),染毒24 h后,用MTT法进行细胞活性检测,应用荧光探针法检测细胞内游离Ca2+浓度,应用半定量RT-PCR法检测细胞内CaM mRNA的表达水平.结果显示,AVM能够引起王鸽神经细胞内游离Ca2+浓度升高,CaM mRNA表达水平下降.表明AVM能影响王鸽体外培养神经细胞内的钙稳态.     

青年社会化的文化参与——基于大众文化的研究视角

随着时代的变迁,大众文化日益成为参与青年社会化的主要文化因子.然而由于其内在不能调和的价值冲突,致使其在参与青年社会化的过程中呈现出催生与颠覆的双重面相:社会性的建构与解构共生共存;个性的凸显与隐匿此消彼长;理想的世俗与低俗双重交织.加强对大众文化的引导以及青年自身的思想政治教育,帮助青年顺利实现社会化,是当前形势下时代之需要.     

哈尔滨市发展创新型产业集群问题研究

哈尔滨作为黑龙江省的经济龙头,要充分发挥区域的带头与辐射作用,必须发展创新型产业集群.通过建立支持性体系,形成完全自我强化与发展的产业能力,建立区域创新网络系统,实现产业集群的竞争优势.     

我国物权立法所有权类型模式探析

我国的物权立法应充分考虑到不动产和动产的划分在物权保护中的作用、意义,借鉴资本主义国家民法典中所有权类型的经验,采用区分动产和不动产的所有权立法类型,以适应市场经济的内在规律。     

贯彻落实科学发展观 深化贫困县改革与发展

学习贯彻落实科学发展观,关键在于用它来统领工作,促进改革发展。作为一个典型的农业大县和国家级贫困县,沿河自治县必须加快农业产业化、山区工业化、城镇化和民营经济发展步伐,实现跨越式发展。     

加强基层文化馆建设丰富人民的精神文化生活

丰富人民的精神文化生活，满足人民的精神文化需求是时代赋予文化馆的使命。     

保证金刍议

在法律对于保证金缺乏明确规范的背景下,探讨保证金的类型,对于备用金类型的保证金、预付款类型的保证金、租赁保证金、装修保证金、定金类型的保证金、保有返还请求权的保证金、无双倍返还效力的保证金分别界定,确定各自的法律效力,十分必要。     

新时期我国人民陪审员制度的完善

人民陪审员制度是我国一项基本司法制度，是人民群众当家作主、行使国家权力和体现司法民主的重要手段。2004年国家以法律的形式从制度层面上完善了人民陪审员制度，赋予了它新时期的生命力。但人民陪审员制度实施过程中，无论在制度上还是实践操作上仍存在一定问题，需要进一步地完善。