肠出血性大肠杆菌VT1B亚单位的重组表达及其单克隆抗体的制备

为制备抗肠出血性大肠杆菌(EHEC)VT1B亚单位的单克隆抗体(McAb),以大肠杆菌EDL933的基因组DNA为模板扩增VT1B基因,纯化后经BamHⅠ和XhoⅠ酶切,连入表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-VT1B,转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,实现了融合蛋白的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的27%。重组蛋白纯化后,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,获得3株融合细胞1G11、2H8、1B10,Western-blotting表明,此3株单抗能与VT1B蛋白特异性结合而与载体蛋白不反应。Ig亚类分别为IgG1、IgG2a和IgG2b,染色体数均大于100,腹水单抗ELISA抗体效价大于1∶256000,亲和常数分别为0.54×108M-1、0.95×108M-1、0.33×107M-1,间接ELISA叠加试验初步鉴定结果表明,这3株单抗针对的是同一抗原表位。此3株特异性单抗的获得为VT1毒素的检测奠定了基础。     

Asia 1型口蹄疫病毒多表位基因的原核表达及ELISA 检测方法的建立

根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMDl8-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VPlAsia).然后,将VP1Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VPlAsia,接着将其转入BL21茵中进行原核表达.以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清.结果显示,VPIAsia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VPIAsia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法.以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29).本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础.     

Asia 1 型口蹄疫病毒多表位基因的设计及其在毕赤酵母中的表达

为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)特异性诊断抗原,根据国内Asia 1型FMDV流行毒株的序列,合成了2个FMDV流行毒株VPl基因的5个抗原表位.采用Insight Ⅱ软件进行蛋白空间构象模拟,证实设计的多表位分子结构符合要求.将合成的多表位基因按设计的酶切位点进行酶切连接,构建了Asia 1型FMDV VP1双拷贝基因重组质粒(pMD18-dVP1Asia).从该重组质粒获得dVP1Asia基因,与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-dVP1Asia.用BglⅡ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌.经筛选、鉴定,成功获得了表达FMDV多表位VP1蛋白的阳性重组酵母茵.该阳性重组酵母茵经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白.Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别Asia 1型FMDV抗体,且具有很好的反应原性.     

法国不当得利法律制度研究

一、法国不当得利法律制度概述 不当得利,指无法律上的原因而受益,致他人受损害的事实.其法律性质属于自然事实中的事件,为债的发生原因之一.①不当得利发端于罗马法上的"返还诉权",该诉权以请求给付特定债之标的物为内容,属于准契约的一种.经过漫长的演变,返还诉权于近代发展为概括性的不当得利请求权,并得到各国法律的普遍承认.     

新时代岭南文化的创新发展

岭南文化是生长在中华文化百花园的艳丽花朵,具有开放兼容、务实进取、敢为人先的独特品格。在近现代,岭南文化不断推动中国社会的变革和发展,在改革开放中更是发挥了重要的"火车头"的作用,引领我国改革开放不断前行。在新时代,为了使广东更好实现"四个走在全国前列",极大地满足人民群众对精神文化的需要,推进粤港澳大湾区文化融合发展,岭南文化应着重在五个方面创新发展:一是创新岭南文化精神,二是加强历史文化遗产保护,三是深化文化体制改革,四是文化产业发展提速,五是推动文化对外合作。     

我国儿童早期照顾政策框架构建——基于资源平等理论视角

我国儿童早期照顾领域存在照顾责任公私分担失衡、照顾资源分布不均、照顾劳动性别分工和代际分工不合理等现象,亟待公共政策干预。立足我国现实,以德沃金的资源平等理论作为伦理基础,可提出儿童早期照顾政策的伦理依据,即以保障儿童与母亲权利为核心原则,以保障父母工作-家庭平衡、祖辈老年权益为辅助原则。在政策分析中,首先基于政策网络模型,阐述政策行动者的网络定位及他们在网络间的互动关系,厘清不同行动者之间的资源与权力交换机制;然后利用图尔敏结构模型,提出具有开放性和包容性的政策方案,并最终形成旨在保障儿童和照顾者权利、促进家庭和社会发展的我国儿童早期照顾政策框架。     

phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建

直接以黑曲霉菌株F2 4 6基因组为模板 ,对植酸酶基因phyA的成熟肽 (分子长度为1347bp)进行了PCR扩增 ,再将PCR产物克隆入 pMD 18 T质粒 ,经DNA测序鉴定正确后 ,亚克隆入表达载体 pET30a 和 pMG36e ,成功构建了phyA基因 2种新型表达载体。植酸酶 phyA基因2种新型表达载体的构建 ,为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础。     

基层党组织标准化建设:逻辑理路、实践局限与应然取向

基层党组织标准化建设是新时代党的建设总体布局的重要内容,是新时代推进党的建设伟大工程新的战略部署。基层党组织标准化建设为规范党在基层政权的组织形态、激活党在基层社会的政治资源、完善党在基层法规的评估指标提供了理论源泉。同时,基层党组织标准化建设为全方位构建基层社会治理的标准体系、多层次推进全面从严治党向基层延伸提供了实践动力。实践中,基层党组织标准化建设存在诸多认知限度,如计划思维、单位形态、行政本位、单向参与、激进策略等,这些观念或者行为阻碍了基层党建工作的有序开展。因此,基层党组织建设要树立标准化的理念、空间、时间、资源和保障等主体要素的应然取向,以建构科学规范的标准化体系。     

More on the Art of Bricks and Tile

THOUGH bricks and tiles are ordinary building materials judged by today＇s standards,centuries ago commoners mostly built their houses with sun-dried adobes and thatch. Back then, bricks and tiles implied wealth and dignity, in much the same way as marble, steel and glass do today. This was particularly true of bricks and tiles featuring ornamental designs for imperial use. The most representative of these aristocratic building blocks were the bricks and tiles of the Qin and Hart dynasties. These were later followed by other ornamental brick carving techniques.     

The Story of Stones

THE history ol humankind started hundreds of millennia ago when our ancestors learned to shape stones into working tools, thus distinguishing themselves from other anthropoid apes who knew only how to use stones to crack nuts.