青海牦牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

采集青海省泽库县某牧户疑似牦牛病毒性腹泻病牛的样品,将RT-PCR检测为阳性的样品处理后接种MDBK细胞,并盲传至第10代,检测每一代细胞中牛病毒性腹泻病毒的E0基因。通过分离株接种细胞后产生的病变效应观察、免疫荧光试验、电镜观察、RT-PCR扩增以及序列分析鉴定了该病毒。结果表明,盲传的每代细胞中均可检测到E0基因;接毒后的细胞在盲传至第7代时出现明显的细胞病变;免疫荧光试验中能观察到细胞内发出的特异性荧光;经浓缩、纯化的病毒在电镜下呈直径为40～60nm的病毒粒子,将其命名为QHZK株。对克隆的E0基因测序后提交至GenBank(登录号:JF927789),并将获得的序列与其他国内外分离株的E0序列比对,同源性为73.6%～98.2%;系统进化分析表明该分离株属于牛病毒性腹泻病毒1b亚型。     

双峰驼朊蛋白基因的克隆和序列分析

分别从4峰双峰驼全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物扩增了细胞型朊蛋白(PrP)基因,并克隆到pMD 18-T载体。序列分析表明,所克隆的4个双峰驼PrP基因片段大小分别为768、768、792和795 bp,包含了朊蛋白基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框,均与国外报道的同属单峰驼PrP序列基本相同。4个双峰驼PrP基因含5个或6个短而富含G-C的元件,可编码5个或6个八肽(九肽)重复序列Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln或Pro-Gln/His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln,其氨基酸序列含有24个氨基酸的N-端信号肽和22个氨基酸(除LT200302为23个氨基酸外)的C-端信号肽。4个双峰驼PrP基因之间相比较,其核苷酸和推导氨基酸序列的同源性为91.0%~100.0%和94.2%~100.0%。共发生133个碱基替换,其中107个为同义码替换,26个为异义突变。     

响应面法对啤酒酵母菌制剂培养条件的优化

为了优化啤酒酵母菌制剂的培养条件,以提高活啤酒酵母菌浓度,在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,以初始pH、培养温度和装液量为试验因素,活啤酒酵母菌浓度为响应值,采用三因素三水平的响应面法,进行回归模型分析。通过回归分析得出啤酒酵母菌制剂的最佳培养条件:初始pH为6.00,培养温度为22.30℃,装液量为100.00mL;在此条件下,活啤酒酵母菌浓度的预测值为2.89×108 CFU/mL,验证值为3.00×108 CFU/mL。结果表明,响应面法可用于啤酒酵母菌制剂培养的实际操作;优化啤酒酵母菌制剂的培养条件,可以增加活啤酒酵母菌浓度。     

青海高原产纤维素酶菌的选育

从 11株分离自青海省东部森林的产纤维素酶真菌中 ,筛选出产纤维素酶性能优良的0 14 3菌株 ,根据其形态学特征及培养特性 ,鉴定为康氏木霉 (Trichodermakoningii ) ,该菌湿固体发酵物的滤纸酶活力 (FPA)为 15 μmol/min。 0 14 3菌株经亚硝基胍诱变后 ,获得突变株 0 14 3p ,其湿固体发酵物FPA为 2 0 μmol/min ,是原菌株的 1.33倍。该菌无毒副作用 ,可应用于饲料中 ,作为饲料用酶源菌。     

武威驴PrP基因序列与结构特征的分析

以武威驴朊蛋白(PrP)基因序列与结构特征分析为基础,通过比对找到奇蹄动物与偶蹄动物之间PrP基因的差异,探究朊病毒病在奇蹄动物与偶蹄动物之间传播的种间屏障及其形成机制。分别从8头武威驴全血中提取基因组总DNA,用设计的特异性引物以聚合酶链反应扩增出细胞型朊蛋白基因(PrPC),并将其克隆到pGEM-T Easy载体。测序之后使用生物信息学方法与软件进行相关分析。序列测定分析表明,所克隆的武威驴PrP基因片段的大小为768bp,包含了驴PrP基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框。本次克隆的武威驴PrP基因含5个短而富含G-C的元件,可编码九肽/八肽PQGGGGWGQ/PHGGGWGQ重复子。8个驴PrP基因之间核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性分别介于99.2%~99.8%和98.4%~100%之间。武威驴与西吉驴、马之间PrP基因序列的同源性分别为99.2%和98.7%,与牛、绵羊、马之间PrP基因C端约100个残基区域的三级结构的相似性分别为91.84%、92.04%和97.35%。结果表明,奇蹄动物与偶蹄动物之间PrP基因存在明显的差异与进化分歧。     

牛朊蛋白单氨基酸变异体的原核表达

应用pGEX原核表达载体构建了牛朊蛋白的1个正常重组蛋白和3个单氨基酸变异体的原核表达质粒,即pGEX BoPrP(93~241)、pGEX BoPrP(93~241)(S154N)、pGEX BoPrP(93~241)(A129V)和pGEX BoPrP(93~241)(Q234R)。经转化E.coli BL21 (DE3),均表达了预期大小约为42.4 ku的融合蛋白。在优化的诱导表达条件下,各重组菌可产生表达量占细菌总蛋白量30%~45%的融合蛋白。经免疫印迹检查,所有融合蛋白均可与抗牛单克隆抗体4C11 反应。表明,单氨基酸突变并不影响单抗4C11的识别表位。     

空肠弯杆菌毒素的研究进展

空肠弯杆菌毒素的研究进展＠司宏伟＠吴润￥甘肃农业大学动物医学系空肠弯杆菌毒素的研究进展１）司宏伟吴润（审校）（甘肃农业大学动物医学系兰州７３００７０空肠弯杆菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ）是８０年代起受到国内外广泛重视的人畜共同感染的病原菌〔１...     

猪传染性胃肠炎病毒的分子生物学研究进展

猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine, TGEV)隶属于冠状病毒科冠状病毒属,是引起仔猪病毒性腹泻的重要病原[1].由其引起的猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of swine, TGE)是一种急性、高度接触性传染病,以呕吐、严重腹泻、脱水和对2周龄以内仔猪的高度致死率为特征.虽然不同年龄和不同品种的猪对本病都易感,但5周龄以上的猪很少死亡,多成僵猪,饲料报酬低,给养猪业造成了较大的损失.     

猪传染性胃肠炎病毒S基因的克隆及其结构特征

参照GenBank中登录的TGEVS基因序列设计了 3对特异引物 ,经RT PCR扩增获得了TS株S基因的SⅠ、SⅡ和SⅢ 3个片段 ,其大小分别约为 12 6 2、2 36 8和 12 6 6bp。SⅠ、SⅡ和SⅢ片段经剪接后 ,可知TS株的S基因全长为 4 347nt ,共编码 14 4 9个氨基酸。对TS株与其他毒株的S基因序列进行比较发现 ,TS株与Miller株、FS72 2 / 70株、TGEVH株、96 1933株、TFI株均在 112 4～112 9位有 5′ ATGATA 3′六个碱基 ,而在Purdue株、TH 98株、NEB72 RT株和PRCV HOL87株中缺失 ;TS株与Miller株、FS72 2 / 70株、TFI株、Purdue株、96 1933株、TGEVH株、TH 98株、NEB72 RT株和PRCV HOL87株的核苷酸序列同源性分别为 99.6 %、98.9%、98.0 %、98.3%、95 .7%、99.3%、97.7%、98.3%和 97.5 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 99.2 %、98.4 %、97.7%、97.8%、94 .8%、98.6 %、97.2 %、97.7%和 97.0 % ;TS株S蛋白的推导氨基酸序列较Purdue株、TH 98株和NEB72 RT株多出 2个潜在的糖基化位点 ,共 34个。与不同毒株比较后 ,推测在TGEV的S蛋白中第 71位的Asp(D)与呼吸道嗜性有关 ,第 2 19位的Ala(A)与肠道嗜性有关     

论中国农业产业化龙头企业

一、什么是龙头企业所谓“龙头企业”是指专门从事农产品生产、加工、销售、服务的企业,一般具有三个特点：一是在生产形式上实行专业化;二是在经营体制上实行贸工农一体化;三是具有一定的联系和带动作用。为了追求规模化经营与利润最大化,他们把周边的农民组织起来,成为企业的生产者。这样便将分散经营的、小规模生产的农户与千变万化的市场联结起来,形成包括生产、加工和流通在内的完整的产业链条,使农民成为产加销整个产业链条上平均利润的分享者。农民和企业的利益紧密相联,从而促进农业产业化发展,提高农业经济效益,增加农民…