咪唑苯脲缓释剂的研制及对双芽巴贝斯虫病防治效果的评价

采用缓释剂制备技术研制了咪唑苯脲（Ｉｍｉｄｏｃａｒｂ）缓释注射液，该制剂药物包裹量大，析出量少，粒度均匀，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ不分层，且粘度小，便于肌肉注射使用。用该制剂对２头试验发病牛进行治疗，结果全部治愈。对实验牛双芽巴贝斯虫感染的预防试验表明，缓释剂的有效预防期至少为４个月，而咪唑苯脲水剂的有效预防期仅为３个月。在湖北省、江苏省进行了小规模区域试验，药物预防牛的发病率由原来的３．５％和１３．２％降至０。     

环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的亚细胞定位分析

为研究微线体-棒状体蛋白在环形泰勒虫裂殖体及其在感染环形泰勒虫裂殖体的淋巴细胞中表达情况及亚细胞定位,应用Western-blot验证了该蛋白多克隆抗体的特异性;通过条件摸索找出最佳比例的固定剂和最佳一抗、二抗的工作浓度;利用优化好的条件对微线体-棒状体蛋白进行间接免疫荧光试验,用激光共聚焦技术确定该蛋白在环形泰勒虫裂殖体和其在感染的淋巴细胞中表达及亚细胞定位。结果表明,微线体-棒状体蛋白主要定位于环形泰勒虫裂殖体的表面,而在宿主淋巴细胞细胞质中分布较少。     

咪唑苯脲缓释剂在黄牛体内的药代动力学及组织残留量测定

用紫外分光光度计测定了咪唑苯脲缓释剂在黄牛体内不同时间的血浆药物浓度及组织药物残留量.结果为该药药代动力学符合一室吸收模型、动力学方程为C=2.7885(e-0.0032t-e-0.4229t).药代动力学参数为达峰时间Tmax为11.320 h±0.2955 h,峰浓度为2.804μg/mL±0.0029 μg/mL,吸收相半衰期t(1/2)α为1.643 h±0.9960 h,消除相半衰期t(1/2)β为215.061 h±22.2836 h,与肌肉注射咪唑苯脲注射液相比,半衰期延长了210.383 h.组织含量检测结果为注射后3月时脑、肝、脾、肾、心肌、肌肉中药物残留量分别为0.134 μg/g±0.0302μg/g、0.976 μg/g±1.2432μg/g、0.743μg/g±0.1864 μg/g、0.527 μg/g±0.2243μg/g、0.313μg/g±0.1723 μg/g和0.373 μg/g±0.0420 μg/g;4月时肝、脾、肾分别为0.276 μg/g±0.0437μg/g、0.113μg/g±0.0252 μg/g和0.182 μg/g±0.0337 μg/g.结果表明,咪唑苯脲缓释剂优于其他咪唑苯脲剂型.     

环形泰勒虫SPAG蛋白的原核表达及反应原性分析

根据GenBank中公布的环形泰勒虫子孢子表面抗原(SPAG)基因序列,结合生物信息学分析,对SPAG蛋白跨膜区和抗原表位进行分析。选取基因片段设计表达引物,从环形泰勒虫不同虫株的SPAG基因的保守区扩增目的片段,并构建SPAG-pET-30a重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)表达系统中进行表达,并对SPAG重组蛋白的反应原性进行分析。结果显示,获得的SPAG基因片段长度为882 bp,重组蛋白分子质量约为42 ku。反应原性分析显示,该重组蛋白可与环形泰勒虫阳性血清发生特异性反应,与中华泰勒虫、瑟氏泰勒虫、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫的阳性血清无交叉反应。本研究结果表明,SPAG蛋白有较好的反应原性和种特异性,可作为检测环形泰勒虫的候选抗原建立相应血清学诊断方法。     

西藏当雄牦牛皮蝇蛆病病原的分子分类鉴定

2011年在西藏当雄县感染皮蝇蛆牦牛的背部皮下收集到三期幼虫113个,首先进行了形态学鉴定,之后提取DNA,用特异性引物扩增COⅠ基因,并进行测序,与GenBank中的相关序列进行了同源性比较,建立了系统发育树。结果表明,西藏当雄县感染牦牛的皮蝇蛆为牛皮蝇蛆和中华皮蝇蛆。前者(85条)占样本总数(113)的75.22%,为西藏当雄牦牛皮蝇蛆病病原的优势虫种;COⅠ基因序列显示牛皮蝇和中华皮蝇的种间差异为10.8%～11.3%,同源性为88.7%～89.2%;牛皮蝇的株间差异为0.1%～0.6%,同源性为99.4%～99.9%,中华皮蝇的株间差异为0.1%～0.4%,同源性为99.6%～99.9%。说明COⅠ基因是牦牛皮蝇蛆病病原种类分子分类鉴定的可靠靶基因。     

磷酸伯氨喹和贝尼尔对人工感染羊泰勒虫病例的治疗试验

用感染羊泰勒虫的青海血蜱叮咬健康羊人工复制羊泰勒虫病病例6只,用贝尼尔和磷酸伯氨喹各治疗2只.结果,磷酸伯氨喹以1.5 mg/kg体重剂量连续肌肉注射3 d,2只羊的染虫率分别从15.0%和10.0%下降到0.5%,临床症状基本消失;贝尼尔以5.0 mg/kg体重剂量连续肌肉注射3 d,仅1只羊的染虫率由12.0%下降到1.5%,临床症状基本消失,1只羊的染虫率由12.0%上升到15.0%,临床症状加重.     

芽胞杆菌的分离鉴定

为了确定实验室筛选的6株芽胞杆菌(Bacillus spp.)的种名,利用形态学、DNA促旋酶A亚单位基因(DNA Gyrase Subunit A,gyrA)和DNA 促旋酶B 亚单位基因(DNA Gyrase Subunit B,gyrB)序列的单基因系统发育分析和PCR相结合的方法进行鉴定.结果表明,6株芽胞杆菌...     

羊泰勒虫不同虫株的分离及致病性观察

羊泰勒虫病是由媒介蜱传播的绵羊和山羊的一种血液原虫病，我国四川、青海、宁夏、陕西、甘肃、内蒙古等省（区）均曾有该病发生的报道。发病率为１８．８％～６５．０％，病死率为１７．８％～７５．３％。可见不同地区羊泰勒虫病的发病率、病死率有很大差异。这种差异是...     

牛羊蜱传性血液原虫超微结构研究——双芽巴贝斯虫的超微结构观察

双芽巴贝斯虫电镜观察显示，红细胞内的虫体可分为裂殖子、正在分裂的裂殖子及滋养体三个阶段。典型的裂殖子为双梨子形，环绕着一层外膜和一层内膜，细胞质内可看到前后极地环、微丝体、线粒体、内质网和一个大的核及一个独特的球形体。球形体大小与核一样，位于核与前极环之间。滋养体多形，膜为单层，虫体内有线粒体、微丝体     

甘肃省羊泰勒虫病的调查及分布特征研究

利用病原检查、蜱感染试验和除脾激发试验相结合的方法，在甘肃省１３个地区（州、市）４５个县对２１６８只绵羊和山羊的泰勒虫病进行了调查。结果表明，甘肃省酒泉、张掖、金昌、武威、兰州、定西、天水、陇南、临夏、甘南、庆阳和平凉１２个地区３５个县均有羊泰勒虫病的分布，其传播媒介为青海血蜱，它主要孳生于阴湿灌丛草原，具有代表性的陇南和天水两地区羊泰勒虫的感染率高达４７．０％～８６．６％。