猪巨细胞病毒gB基因优势抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立

扩增了猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因的优势抗原表位区,将构建成功的gB基因优势抗原表位区原核表达重组质粒(pET32a-gB)转化入表达菌Rosetta(DE3)中进行表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了一种检测PCMV抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA检测方法进行了优化。结果显示,最佳抗原包被浓度为1.9μg/mL,最佳血清稀释度为1∶160,二抗最佳稀释度为1∶10 000;当样品D450nm≥0.26时判为阳性,当样品D450nm<0.215时判为阴性,介于两者之间时判为可疑。用该间接ELISA方法对138份PCMV阴性血清与240份PCMV阳性血清进行检测的结果显示,它的特异性为97.83%,敏感性为97.9%,变异系数均小于10%。用该ELISA方法和Western-blot对184份临床样品进行检测,结果二者的符合率为92.4%。结果表明,该间接ELISA方法简便快捷,具有良好的特异性、敏感性及重复性,适用于对PCMV抗体的大规模检测。     

禽流感病毒M2e多拷贝重组蛋白的原核表达及其免疫原性分析

为了获得流感病毒M2e多拷贝重组蛋白并分析其免疫原性,通过比对GenBank中H5和H9亚型流感病毒的M2基因,选择其N端由23个氨基酸组成的胞外域(M2e)序列进行合成,并将4个M2e序列与3个位于HA246~260T/B细胞表位交叉串联,在其末端添加酵母转录因子,然后克隆到pGEX-6P-1载体中,表达重组蛋白。SDS-PAGE和蛋白免疫印迹试验分析表明,重组蛋白成功表达,而后纯化获得高纯度产物。经纯化的重组蛋白与弗氏佐剂混合后肌肉注射BALB/c小鼠,二免2周后采集小鼠血清并用ELISA检测M2e抗体水平;同时分离脾细胞并用ELISPOT检测特异性T细胞的数量。ELISA结果表明重组蛋白能诱导免疫组小鼠产生高水平的M2e特异性抗体;ELISPOT分析显示,在M2e肽段的刺激下,免疫组小鼠每1×106个脾淋巴细胞中的斑点形成数达150个。结果表明,成功表达的重组蛋白具有良好免疫原性,为广谱型流感病毒亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

猪环曲病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank中猪环曲病毒(porcine torovirus,PToV)N基因的保守序列,设计合成1对针对PToV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PToV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能很好地将PToV与猪伪狂犬病病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、沙门菌和大肠杆菌区分开来,特异性强。检测PToV的N基因在8.65×101~8.65×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.998 9,扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰。所建立的实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.29%~1.30%,组间变异系数为0.45%~1.80%,重复性较好。利用该方法对采集自四川部分地区的43份临床样品进行检测,实时荧光定量RTPCR检出13份阳性样品,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结果表明建立的实时荧光定量RT-PCR方法特异性较强、灵敏度高,可用于该病的临床检测和流行病学调查。     

论“环境治理公平”

如何完善中国环境治理体系,健全地区环境治理结构,是我国当前亟待解决的重要问题。本文提出"环境治理公平"的思想,试图建构适用于中国的环境公平理论。本文还分析了中国环境治理的现状和特点,探讨了中国环境治理的制度安排与执行绩效等方面存在的不公平问题,并基于此对中国环境治理公平提出若干政策建议。     

互联网金融对传统金融模式影响研究

随着互联网信息技术和移动通讯业务的飞快进步,互联网金融模式在中国兴起并迅速发展。互联网金融是由电子商务企业提供的网络支付结算、网络融资、网络保险、网络理财等金融服务。与传统金融服务相比,互联网金融在产品设计、服务模式和参与主体三方面实现了创新。互联网金融将改变传统金融机构经营方式、竞争理念,进而重塑传统金融生态模式。本文探讨了互联网金融模式给传统金融模式带来的种种机遇及挑战,并提出互联网金融的发展趋势及其建议。     

谈高职英语语篇教学方法的优化——基于语篇分析理论

语篇分析就是从具有完整思想内容的篇章的结构分析入手,从微观和宏观两个方面展开对语篇内容的研究。语篇分析教学是对传统的语法分析教学的否定,可以帮助我们解决传统英语教学中"单纯教语言"的问题。依据语篇分析理论,教师应充分重视非语言信息在语篇学习中的积极作用,改革创新语篇教学方法,从而使学生提高阅读水平,提高阅读课的教学质量。     

高校微课研究现状及相关问题探究

微课作为一种新的学习理念,以其＂小、实、新、快＂的特点,迅速成为高校教育教学改革的新路径。目前,国内对微课的研究主要集中在微课的概念与特征、微课的设计与开发,以及微课的应用研究等问题,尚处于起步阶段,在学科视野、研究视角、研究内容、研究对象以及研究方法等方面还存在不足。下一阶段,关于微课的研究应重视和加强对其基础理论、教学模式、教师专业发展与学生学习,以及新技术在微课中的应用等宏观性、潜在性问题的探讨。     

公安院校大学生的职业认同与学业情绪研究

公安大学生职业认同在入学动机上表现为职业预期和学习生活适应性上的差异,对公安大学生学业情绪的影响主要有对警察的职业认知、职业情感和职业行为等三个方面的因素。公安大学生职业认同感的构建,需要培养大学生的警察意识、警务技能和警务行为素养,从而激发大学生积极向上的学业情绪。     

完善基层公安机关巡逻勤务的策略研究——以上海城市巡逻警务机制升级为例

城市治安巡逻工作是公安派出所日常的主要勤务工作,也是公安机关有效防范和打击犯罪的重要措施。为适应动态环境的治安需要,加强城市社会治安的动态管理,变革原有的城市治安工作机制成为了必然。为更好地适应上海城市现代警务机制的发展要求,有必要以上海公安派出所综合指挥室建设为契机,对基层公安机关目前的动态巡逻勤务机制进行升级与改良,以实施更加科学、合理、可操作的动态勤务模式。实践证明,要实现"实兵巡逻"与"视频巡逻"的完美结合和无缝互动,建立派出所综合指挥室是最直接、最有效的手段。