表达破伤风毒素C片段的重组鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定

为构建表达破伤风毒素C片段基因的减毒鼠伤寒沙门菌,将编码破伤风毒素C片段的基因插入到asd 的组成型表达载体pYA3333,转化asd基因突变的E.coliX6212,获得重组质粒pYA3333-TetC,再将重组质粒通过电穿孔法转入宿主菌,构建成表达破伤风毒素C片段基因的平衡致死的鼠伤寒沙门菌X4550(pYA3333-TetC)。免疫印迹试验证实,该重组菌表达的蛋白与预期的目的蛋白一致。重组菌X4550(pYA3333-TetC)的稳定性试验表明,在体外培养100代后,随机挑选的重组菌落全部都能生长,重组菌X4550(pYA3333-TetC)的生长曲线测定表明,X4550(pYA3333-TetC)和X4550(pYA3333)的生长状态基本一致。动物试验证明,该重组菌是安全的,破伤风毒素攻击后能提供良好的保护作用。     

产毒素多杀巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌在猪萎缩性鼻炎中的流行病学研究

从发生临床型萎缩性鼻炎的7个猪场的319头猪的鼻腔分离多杀巴氏杆菌,其中获得A型20株,内有产毒素株5株,D型85株,内有产毒素株76株。产毒素菌株占总分离株的77.1％(81/105)。各年龄的猪均有产毒素株感染。另从临床型萎缩性鼻炎阴性的3个猪场共95头猪的鼻腔分得A型多杀巴氏杆菌1株和D型12株,后者仅1株产生毒素。从此10个猪场的不同年龄猪的鼻腔均分离到支气管败血波氏杆菌,此菌阳性检出率为47.8％(196/412),其感染率与萎缩性鼻炎的发生率无关。调查结果表明,产毒素多杀巴氏杆菌与临床型萎缩性鼻炎的发生有关,支气管败血波氏杆菌感染有助于产毒素多杀巴氏杆菌在猪鼻腔定居,二者混合感染导致猪发生严重的持续性萎缩性鼻炎。饲养管理不良可以促进产毒素多杀巴氏杆菌的传播,加重疫情的发展。     

携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定

为构建可有效抵抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,采用RTPCR方法扩增了PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1),插入pMD19-T载体,构建载体pMD19-T-S1,再将S1基因片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建了pVAXD-S1表达载体。经免疫荧光法鉴定S1基因可在COS-7细胞中正常表达后,将pVAXD-S1电转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,构建了携带S1基因的重组减毒沙门菌SL7207(pVAXD-S1),并对该重组菌株的生长曲线、携带质粒的稳定性、口服小鼠的安全性及目的基因在体内转录等特性进行了鉴定。结果显示,SL7207(pVAXD-S1)在含卡那霉素(100μg/mL)的培养环境中稳定性良好,以每只1×109 CFU口服免疫BALB/c小鼠具有良好的安全性,携带的S1基因能在小鼠回肠末端组织内正常转录及表达。本研究为深入开展减毒沙门菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫评价及构建PEDV与其他抗原基因联合免疫DNA疫苗奠定了基础。     

应用Dot-ELISA检测牛胴体沙门菌

应用Dot ELISA法对西宁市某屠宰点 71份牛胴体淋巴结进行了沙门菌检测 ,同时与常规分离培养鉴定技术比较。结果 ,在 71份牛胴体样本中 ,用Dot ELISA法检出沙门菌阳性 33份 ,阳性率为 4 6 .4 8% (33/71) ;而用常规分离培养鉴定技术检出沙门菌阳性 31份 ,阳性率为 4 3.6 6 %(31/71) ;2种方法的阳性符合率为 81.82 % ,阳性检出率差异不显著 (P >0 .0 5 )。     

猪喘气病病原的研究

四川省乐山市某猪场的猪发生以咳嗽、气喘为主要症状的呼吸道疾病,取病猪新鲜肺组织进行分离培养检出了猪肺炎霉形体(Mycoplasma hyopneunloniae)XY-1株及支气管败血波氏杆菌(Boidatella bronchisepticai)JYZ3株;利用分离的2株病原菌制成灭活苗,对猪进行免疫,预防效果达80%以上.     

产毒素多杀巴氏杆菌在猪萎缩性鼻炎病因中的作用研究——支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀巴氏杆菌混合感染方式对猪萎缩性鼻炎发生的影响

本试验结果证明,仔猪实验感染支气管败血波氏杆菌(Bb)后再接触感染产毒素多杀巴氏杆菌(Pm);或自然感染Bb后再实验感染产毒素Pm;或实验感染产毒素Pm后再接触感染Bb,均可产生严重的鼻甲骨萎缩和临床症状。     

我国部分地区猪传染性萎缩性鼻炎病原的调查

从我国部分地区２１个养猪场１０８１头份猪鼻腔分泌物和病死猪肺脏材料分离猪支气管败血波氏杆菌（Ｂｂ）６６１株，平均阳性检出率为６１．１％，个别猪场最高检出率为９３．３％。分离产毒素多杀性巴氏杆菌（Ｐｍ）９９株（Ｄ型９５株，Ａ型４株），总平均阳性检出率为９．２％。９９株是在３省１０个养猪场２６４头份病料中分离到的，阳性率为３７．５％。调查结果表明，Ｂｂ污染甚广，本菌感染的猪场多为非临床型猪场。产毒素Ｐｍ虽然仅在３省、市１０个猪场分离到，但其中有９个猪场是猪萎缩性鼻炎临床型猪场。说明临床型猪萎缩性鼻炎与产毒素Ｐｍ混合感染有关。Ｂｂ感染和不良的饲养管理、地理环境都有助于产毒素Ｐｍ在猪鼻腔中定居繁殖及传播，从而使病情发展加速。     

江苏安徽两省鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查研究

1996年1月至2001年6月,对江苏、安徽两省86个鸭场的发病鸭从日龄、品种、流行季节、流行菌株的血清型以及血清流行病学等方面进行了鸭疫里默氏杆菌病的调查.结果,在57个鸭场的樱桃谷鸭、番鸭及野鸭体内分离到鸭疫里默氏杆菌92株,而从麻鸭的病料中未分离到该茵;分离到病原的鸭最小为12日龄,最大为41日龄,主要集中在12-30日龄;这些地区鸭疫里默氏杆菌病的流行无明显季节性;这些地区鸭场疫里默氏杆菌流行菌株的血清型至少有5个,其中1、2和10是流行株的主型.     

牛源支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

从2008年黑龙江省某奶牛场犊牛中暴发的一种以呼吸道病变为主疾病的患病牛中分离出3株细菌,根据其形态特征、培养特性、生化特性等将分离菌鉴定为支气管败血波氏杆菌.对分离菌进行药敏试验、皮肤坏死试验及16 S rRNA基因的克隆和序列分析.结果显示,该菌对氟哌酸、丁胺卡那霉素、庆大霉素、氯霉素敏感,可导致豚鼠皮肤坏死;其16 S rRNA基因序列与GenBank中收录的标准菌株Bb RB50株(BX640449)同源性为100%.证实,引起该病的病原是支气管败血波氏杆菌.     

鸭疫里默氏杆菌RiaR基因缺失株的构建及其生物学特性分析

全基因组测序及生物信息学分析表明,鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株中存在1对新的双组分调控系统（two-component regulatory systems,TCS）RiaR/RiaS,且在黄杆菌目中高度保守。为探讨RiaR/RiaS在鸭疫里默氏杆菌中的作用,采用同源重组和结合转移的方法构建反应调节器RiaR的基因缺失株RAΔRia R和回补株RAcΔRia R,并比较了它们与亲本株RA-LZ01在生长、抗生素敏感性和毒力方面的生物学特性差异;通过RA-LZ01和RAΔRia R的原核转录组测序,进一步分析RiaR所发挥的生物学功能。结果显示,与亲本株相比,RAΔRia R在其生长、抗生素敏感性和毒力方面并无明显差异。转录组分析表明,从RAΔRia R中筛选到203个差异基因[lb(FC)值的差异倍数≥2且P<0.05]均为显著上调的基因,提示RiaR/RiaS是1对负调控下游基因表达的TCS。COG分析结果显示,富集程度最高的差异基因为功能未知的基因（50个,19%）,其次为氨基酸运输和代谢相关基因（29个,11%）。KEGG的分析结果显示,差异基因主要富集于代谢相关的通路（...