鸭疫里默氏杆菌RiaR基因缺失株的构建及其生物学特性分析

全基因组测序及生物信息学分析表明,鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株中存在1对新的双组分调控系统（two-component regulatory systems,TCS）RiaR/RiaS,且在黄杆菌目中高度保守。为探讨RiaR/RiaS在鸭疫里默氏杆菌中的作用,采用同源重组和结合转移的方法构建反应调节器RiaR的基因缺失株RAΔRia R和回补株RAcΔRia R,并比较了它们与亲本株RA-LZ01在生长、抗生素敏感性和毒力方面的生物学特性差异;通过RA-LZ01和RAΔRia R的原核转录组测序,进一步分析RiaR所发挥的生物学功能。结果显示,与亲本株相比,RAΔRia R在其生长、抗生素敏感性和毒力方面并无明显差异。转录组分析表明,从RAΔRia R中筛选到203个差异基因[lb(FC)值的差异倍数≥2且P<0.05]均为显著上调的基因,提示RiaR/RiaS是1对负调控下游基因表达的TCS。COG分析结果显示,富集程度最高的差异基因为功能未知的基因（50个,19%）,其次为氨基酸运输和代谢相关基因（29个,11%）。KEGG的分析结果显示,差异基因主要富集于代谢相关的通路（...     

tolB和tolR基因缺失对鼠伤寒沙门菌生物学功能的影响

Tol-Pal系统是一种由TolQ、TolR、TolA、TolB和Pal五种包膜蛋白组成的多蛋白复合体,在维持革兰氏阴性菌外膜完整性方面发挥关键作用。这些蛋白质首先在大肠杆菌中被发现,随后在很多其他细菌属中被鉴定到,但Tol-Pal系统在鼠伤寒沙门菌（Salm onella Typhimurium）中的作用尚不十分清楚。本研究评估了Tol-Pal系统中的TolB和TolR蛋白在鼠伤寒沙门菌χ3761表型和生物学中的作用。结果显示,tol B和tolR缺失株显著降低了χ3761的运动能力,tolB和tolR缺失株菌体呈现球形和长链状,此外还发现菌体表面存在鞭毛缺失和囊泡凸起的微观变化,证实tolB和tolR的缺失对细胞壁造成了严重的破坏。结果表明,tolB和tolR缺失株均显著降低了鼠伤寒沙门菌在脱氧胆酸钠作用下的存活率,并对万古霉素表现出高度敏感性,这可能是由于包膜完整性受到破坏所致。进一步的研究表明,tolB和tolR基因均参与外膜囊泡（OMVs）的产生。综上所述,这项研究扩展了我们对鼠伤寒沙门菌Tol-Pal系统生物学功能的认识。     

某种鸡群沙门菌的分离鉴定、毒力基因检测及单宁酸抑菌作用分析

为了解宁夏某种鸡群孵化率及雏鸡存活率下降原因,随机采集血样进行鸡白痢、鸡伤寒抗体血清学检测,同时采集死胚及死雏肝进行病原菌分离。分离病原菌通过16S rRNA和生化试验,经多重PCR鉴定禽源沙门菌血清型并检测了14种毒力基因,测定分离株对单宁酸（TA）的最低抑菌浓度（MIC）。结果显示,鸡群鸡白痢、鸡伤寒抗体阳性率为20%;试验共分离病原菌39株,其中鸡源沙门菌29株,主要血清型为鸡白痢沙门菌26株、肠炎沙门菌2株、鼠伤寒沙门菌1株;鸡白痢沙门菌对单宁酸最为敏感,MIC为0.125～1 mg/m L。本研究揭示了该种鸡群内病原菌感染情况和携带的沙门菌毒力基因,检测了单宁酸对各分离株的MIC,为单宁酸净化沙门菌的临床应用提供了参考。     

溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用

本研究旨在建立溶血性曼氏杆菌与多杀性巴氏杆菌的双重PCR检测方法,从而为临床上同时检测这两种病原的感染提供一种更加方便、快捷、准确的工具。根据溶血性曼氏杆菌lkt基因和多杀性巴氏杆菌sp6基因分别设计引物,优化条件后进行特异性和敏感性的评价,并对180份临床样本进行了检测。结果显示,溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌引物的最佳终浓度分别为10和20pmol/L。该方法的特异性较好,对其他无关病原不检出。对溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的检测限分别为56和22pg,与独立PCR相同。该方法对临床样本的检测结果表明,溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的检出率分别为51.67%和47.78%。研究结果表明,本研究建立的双重PCR诊断技术具有特异性好、敏感度高等特点,为临床上溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的快速检测、鉴定以及混合感染的流行病学调查提供了有用的工具。     

鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA PCR快速检测方法的建立

根据GenBank中的鸭疫里默氏杆菌(RA)1～19型16 S rRNA基因序列,分别与大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的16 S rRNA基因序列对比,设计特异性引物,建立了基于鸭疫里默氏杆菌16 SrRNA的PCR检测方法.结果表明,用该方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌进行检测,只有鸭疫里默氏杆菌的DNA能扩增出680 bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;测序结果与GenBank中鸭疫里默氏杆菌相应序列完全一致;同时分别将鸭疫里默氏杆菌基因组DNA和菌液10倍稀释进行PCR扩增,对鸭疫里默氏杆菌DNA的最小检出量为1.907×10~(-5)g/L,对鸭疫里默氏杆菌菌液的最小检出量为1.5×10~4CFU/mL.证实,建立的基于鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA的PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定.     

介导鸭疫里默氏杆菌耐β-内酰胺类药物发生的研究

采用平板二倍稀释法检测了临床分离的54株耐β-内酰胺类药的鸭疫里默氏杆菌(RA)的最低抑菌浓度(MIC值),进一步开展了耐药泵表型检测、β-内酰胺酶表型和基因型检测以及脉冲电泳指纹图谱和耐药泵相关性研究.结果显示,54株RA临床分离株对苯唑西林、青霉素、头孢噻肟和头孢吡肟的耐药率分别为100%、100%、66.7%和98.15%;耐药泵抑制剂氰氯苯腙可使53株RA对β-内酰胺类药物MIC值显著下降(P＜0.01),MIC下降倍数最高达到2048倍,耐药率依次下降为88.89%、46.30%、22.22%和38.89%;54株RA的β-内酰胺酶表型和基因型检测结果均为阴性;54株RA基因组经Sma Ⅰ酶切后以82%相似性系数为界,可分为13个脉冲电泳群,同一群的不同菌株可以认为是同一菌株不同克隆亚体或突变体.Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅶ群、Ⅷ群、Ⅺ群和Ⅻ群对头孢吡肟和V群对头孢噻肟的耐药是由耐药泵介导的,而其他群的菌株则出现了其他机制.说明,耐药泵只是介导RA对β-内酰胺类药物耐药的主要因素之一.     

耐环丙沙星沙门菌marA、soxS和ramA基因以及外排泵基因acrA和acrB的表达水平分析

应用实时荧光定量PCR法对11株鸡源环丙沙星诱导耐药沙门菌和11株人源临床环丙沙星耐药沙门菌的调控基因marA、soxS、ramA和外排泵基因acrA、acrB的mRNA表达水平进行了检测和分析.结果表明,11株诱导株与诱导母株相比,marA、soxS、acrA和acrB的mRNA表达量均显著增加(P＜0.05),ramA表达量未增加;11株人源临床耐药株与标准菌株相比,marA、acrA和acrB的表达量显著增加(P＜0.05),soxS和ramA的表达量未增加.提示,鸡源诱导株AcrAB过表达与marA和soxS过表达相关;人源临床株AcrAB过表达与marA过表达相关,而与soxS和ramA表达不相关.     

新疆羔羊腹泻中大肠埃希氏杆菌的研究

对新疆5个地区分离到的510株大肠埃希氏杆菌用126种O抗血清鉴定,定出O型57种。较集中的O型分别为O_(?)(26株),O_(101)(21株),O_(106)(19株),O_(93)(17株),O_(?)(16株),O_(?)(12株)。用K_(99)、F_(41)抗血清对9个地区的750株菌鉴定,定出K_(99)阳性菌31株,占4.1％;F_(41)阳性菌19,占2.5％。用羔羊肠环结扎和乳鼠灌胃方法测毒,仅K_(99)表达稳定的菌株呈阳性反应。用小白鼠测定不同地区、年份疫区分出的203株茵的毒力,致死率在41.3％～87.5％之间。把不同疫区分出的10株菌单独或混合接种初生羔7只,6只发病。用同一地区健康群分出的菌接 种小白鼠、回归羔羊,其毒力和致病性与疫群菌株基本相同。     

兔瘟巴氏杆菌波氏杆菌三联苗的研制

介绍了兔瘟（ＲＨＤ）、巴氏杆菌（Ｐｍ）、波氏杆菌（Ｂｂ）三联苗的生产工艺和免疫效果。试验兔用该苗１ｍＬ免疫后，在５，７，１２０，１９５ｄ均能抵抗致死量兔瘟强毒的攻击，保护率为１００％；对巴氏杆菌和波氏杆菌，免疫后１０ｄ能产生较强的免疫力，近期保护率分别为８３．３％和８７．９％，免疫后１９５ｄ保护率分别为７２．７％和７６．９％。该苗有效保存期在宁夏银川的室温阴凉处（６～２２℃）为１８０ｄ，在０～８℃冰箱为３６５ｄ。经野外免疫３０００多只家兔表明，该苗安全可靠，在免疫后７～１８０ｄ内能有效控制这３种传染病。     

鸭疫里默氏杆菌血清1型和2型的比较蛋白质组分析

应用双向电泳和质谱技术对鸭疫里默氏杆菌(RA)血清1型和2型的菌体蛋白进行了比较蛋白质组学研究,分析了血清1型和2型鸭疫里默氏杆菌的菌体蛋白表达特点,研究了差异表达蛋白与血清型及细菌毒力的关系。结果显示,质谱分析鉴定出17个差异蛋白,代表11种蛋白质,其中有7个是RA的外膜蛋白,5个是酶类,3个是热休克蛋白家族,另外2个蛋白参与蛋白质的合成过程。推测它们可能与RA的血清型及毒力密切相关。