猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA检测方法的建立与应用

本研究基于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S2截短蛋白,建立了特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,用于临床PEDV特异性抗体水平的监测.前期筛选了富含中和表位的S2截短基因,体外表达后作为ELISA包被抗原,用于捕获PEDV IgG抗体,以山羊抗猪HR...     

姜黄素抑制PEDV感染Vero细胞的作用研究

为探究姜黄素是否具有抑制猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染的作用,本研究以Vero细胞为实验对象,分别设置阴性（空白）对照组、PEDV感染组、姜黄素处理组、姜黄素预处理后感染PEDV组,在PEDV感染后观察细胞病变,利用RT-qPCR、Western-blot、IFA技术和病毒滴度测定法检测PEDV在Vero细胞中的增殖情况。结果显示,与阴性对照组相比,PEDV感染Vero细胞后有明显细胞病变,即细胞拉丝、细胞核固缩并空泡化。与PEDV感染组相比,姜黄素预处理后显著抑制了病毒在细胞内的增殖（P<0.05）,降低了病毒感染后的滴度（P<0.05）,显著上调了Vero细胞抗病毒细胞因子IFN-α、IFN-β的分泌水平及MX1、ISG15、ZAP的转录水平（P<0.05）。与阴性（空白）对照组相比,PEDV感染后抗病毒细胞因子IFN-α、IFN-β的分泌水平明显上调（P<0.05）,但MX1、ISG15、ZAP的转录水平无显著变化（P>0.05）;姜黄素处理后除IFN-α分泌水平无明显变化外,IFN-β分泌水平及MX1、ISG15、ZAP转录水平均显著上调（P&l...     

牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测BVDV218bp片段的RT-PCR方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,结果显示,该方法从BVDV标准毒株OregonC24V中扩增出了218bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、蓝舌病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、MDBK正常细胞的扩增结果均为阴性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10-1TCID50。不同人员用该方法进行检测,结果均一致,表明其重复性好。应用该方法对70份临床疑似发病猪样品进行检测,结果检出11份阳性,阳性检出率约为15.7%。在对5份细胞培养用犊牛血清的检测中,亦检出2份阳性。表明,建立的RT-PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的临床检测及流行病学监测。     

推拿治疗小儿伤食泻30例

目的观察推拿治疗小儿伤食泻的临床疗效。方法将60例伤食泻患儿随机分为治疗组(推拿治疗)和对照组(蒙脱石散和酪酸梭菌活菌胶囊治疗),每组30例,治疗1个疗程(3d)后统计疗效。结果治疗组临床疗效明显优于对照组(P0.05);两组治疗后大便次数、质地、性状积分,以及主症积分和总积分均显著降低(P0.05);治疗组治疗前后大便质地、性状积分,以及主症积分和总积分差值显著大于对照组(P0.05)。结论两种治疗方法均能明显改善小儿伤食泻的临床症状,但推拿疗法优于药物(蒙脱石散和酪酸梭菌活菌胶囊)疗法。     

表达猪流行性腹泻病毒中和抗原位点的重组干酪乳杆菌免疫小鼠诱导的免疫应答

为研究猪流行性腹泻病毒中和抗原位点(COE)基因在乳酸菌中的表达情况,进而探讨重组乳酸菌的免疫原性。将COE基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体pPG-1中,构建重组表达载体pPG-1-COE,并将其电转化入干酪乳杆菌Lactobacilluscasei393中,应用Western-blotting、间接免疫荧光染色和全细胞ELISA检测重组蛋白的表达情况,用重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠,测定免疫应答水平。结果表明,COE可在构建的重组干酪乳杆菌表达系统中表达,目的蛋白定位于细胞表面。在免疫组小鼠血清、粪便中检测到较高水平的特异性IgG、sIgA(P0.01);血清具有中和活性(1∶12);脾淋巴细胞增殖指数明显高于对照组,IL-4和IFN-γ水平显著提高(P0.01)。证实,该重组干酪乳杆菌表达系统可诱导小鼠产生对猪流行性腹泻病毒特异的黏膜免疫应答和系统免疫应答。     

穴位贴敷联合加味葛根芩连汤治疗腹泻型肠易激综合征脾胃湿热证临床疗效观察

目的 观察穴位贴敷联合加味葛根芩连汤治疗腹泻型肠易激综合征（diarrhea type irritable bowel syndrome,IBS-D）脾胃湿热证的临床疗效。方法 将60例IBS-D脾胃湿热证患者随机分为对照组和治疗组,每组30例。对照组予以加味葛根芩连汤治疗,治疗组采用穴位贴敷联合加味葛根芩连汤治疗,疗程均为2周。观察两组临床疗效及生活质量改善情况。结果 治疗组临床疗效优于对照组（P＜0.05）;与治疗前比较,两组治疗后腹泻、腹痛、口渴、小便短黄、肛门灼热积分和总积分均显著降低（P＜0.05）,治疗组腹泻积分和总积分降低程度显著大于对照组（P＜0.05）。两组生活质量评分（SF-12）总分均明显提高（P＜0.05）,但治疗组较对照组提高更为显著（P＜0.05）。结论 加味葛根芩连汤能改善IBS-D脾胃湿热证患者的临床症状,提高其生活质量,联合穴位贴敷治疗疗效更佳。     

牛病毒性腹泻病毒重组抗原对小鼠的免疫效果评价

为成功研制BVDV重组抗原蛋白（NS5A、E0、E2、mE2T）亚单位疫苗并对比分析其免疫效价,本研究对BVDV的4种不同功能蛋白进行原核表达后,与弗氏佐剂乳化进而研制成亚单位疫苗。然后,选择105只BALB/c小鼠为试验动物,将其随机分成7组进行3次免疫,以便从细胞免疫和体液免疫方面评估其免疫效果。在第3次免疫后第14天对小鼠进行攻毒,通过qRT-PCR方法测定小鼠体内BVDV病毒的拷贝量。结果,成功研制出BVDV重组亚单位疫苗。3次免疫后,与免疫前相比,各组小鼠白细胞数量显著上升（P<0.05）,其中联合疫苗组攻毒前、后白细胞数量最高,攻毒前为6.48±0.19,攻毒后为6.08±0.82。在3次免疫之后,联合疫苗组的抗体水平最高,在倍比稀释后为0.573±0.055,灭活疫苗为0.552±0.027;亚单位疫苗组中mE2T组的抗体水平最高,为0.535±0.028。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖时发现,联合疫苗组的SI值最高,为1.963。抗体中和试验证明,各个疫苗组的小鼠血清对病毒均有一定的中和能力,其中联合疫苗组的中和能力最强,达到了1∶18.2。qRT-PCR分析小鼠...     

牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒及牛支原体三重Nano-PCR方法的建立与初步应用

为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛支原体（MB）保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化,建立了三重Nano-PCR检测方法。结果显示,三重Nano-PCR检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒（1μL）最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg,灵敏度分别为常规PCR的10、10、100倍。临床结果显示,30份采集于临床呼吸道病牛样品中,BVDV、IBRV和MB的Nano-PCR的检测阳性率分别为33.33%、36.67%、33.33%,而普通PCR的检测阳性率分别为26.67%、30%、20%,提示BVDV和IBRV混合感染最多,阳性率可达26.67%。三重Nano-PCR方法特异性良好,检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性。本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重Nano-PCR检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查。     

秋季,又到预防腹泻时

秋季昼夜温差变大,让人很难适应,人们的抵抗力会出现一定程度下降,如不注意养生保健,很多疾病就会乘虚而入。又逢秋季是感染性腹泻的高发性季节,尤其对于老人和儿童来说,他们消化功能相对差,抵抗力较低,更需要提防各种原因引起的腹泻。