应用酶组化技术研究肝脏组织细胞内酶活性与死亡时间的关系

应用酶组化技术研究肝脏组织细胞内酶活性与死亡时间的关系曾泽民，涂彬厦门市人民检察院；厦门３６１０１２上海医科大学法医学系，上海２０００３２酶组化技术（Ｅｎｚｙｍｅｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）是通过显色反应来检测组织细胞中内源性酶存在...     

鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定

为了探明醛缩酶在支原体中的定位,根据已发表的鸡毒支原体醛缩酶(fba)基因序列设计特异性的引物,以鸡毒支原体Rlow株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增鸡毒支原体醛缩酶fba基因,将fba克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析。结果表明,fba基因全长873bp,编码290个氨基酸。将构建的重组表达质粒pET28a-fba转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白rMGfba,大小约为33ku。纯化蛋白并对蛋白进行酶活性检测,结果显示该酶在体外具有与阳性对照醛缩酶相同的催化功能。用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,提取鸡毒支原体膜蛋白,Western-blot分析结果显示FBA多抗可与疏水性膜蛋白特异性结合,说明FBA位于鸡毒支原体膜表面。     

chTERT mRNA表达及端粒酶活性在氯化镧诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用

为探讨chTERT mRNA表达及端粒酶活性在LaCl3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用.将肿瘤细胞常规培养于RPMI 1640培养液中,加入终浓度为3 mmol/L的LaCl3共培养,分别于培养第12、24、36和48 h,用透射电镜观察LaCl3致MDCC-MSB1细胞的形态学变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,以TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性,以实时荧光定量PCR法检测chTERT基因mRNA的表达量变化.结果显示,3 mmol/L的LaCl3作用第12、24、36和48 h,透射电镜和流式细胞仪法均检测到明显的细胞凋亡变化,端粒酶活性下降,chTERT mRNA的表达量下降,并呈时间一效应关系.证实,LaCl3可通过降低chTERT mRNA的表达量抑制MDCC-MSBl细胞的端粒酶活性而诱导其发生凋亡.     

益智灵胶囊对小鼠学习记忆能力和胆碱酯酶活性影响

目的：采用经典学习记忆实验观察益智灵胶囊对小鼠学习记忆能力和胆碱酯酶活性的影响。方法：用东莨菪碱模型、乙醇模型和氯霉素模型测小鼠学习记忆能力，微量羟胺法测定脑内碍碱酯酶活性。结果：益智灵胶囊明显改善上述3种模型小鼠的学习记忆能力，并能降低脑内胆碱酯酶的活性。结论：益智灵胶囊对胆碱能系统功能减退有改善或保护作用。     

猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Tsserpin570的克隆表达与酶活性分析

为阐明猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin570)对蛋白酶的抑制作用,通过RT-PCR从猪带绦虫成虫cDNA扩增获得Tsserpin570(TsM_000807300)的完整CDS序列,并构建了 pCold-Tsserpin570原核表达载体,利用发色底物法检测可溶性重组蛋白Tss...     

吃水果的最佳时间

正吃水果现在已成为了很多人每天的"必修课",但吃得多不如吃得巧,吃水果也得按时间来。水果是女性养生的必备品,不仅补充身体多种元素,而且能美容养颜。但是、你知道水果也要挑时间吃吗?根据不同的功效在适合的时间吃,会让营养加倍。下面是一天中吃水果的时间选择和一些水果的药理作用。早上最宜:苹果、梨、葡萄早上吃水果,可帮助消化吸收,有利通便,而且水果的酸甜滋味可让人一天都感觉神清气爽。人的胃肠经过一夜的休息之后,功能尚在激活中,消化功能不强。因此酸性不太强、涩味不太浓的水果,比如苹果、梨、葡萄等就非常适合。     

日本血吸虫SjPP基因原核表达蛋白的酶活性

分别以磷酸苏氨酸多肽(K-R-pT-I-R-R)和4-硝基苯基磷基二钠盐(pNPP)为底物,研究原核表达的日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性,检测二价金属阳离子(Mn2+、Ni2+、Mg2+、Ca2+)、温度、pH值对rSjPP酶活性的影响.结果显示,rSiPP重组蛋白可以有效地水解磷酸苏氨酸多肽,具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶活性.rSjPP酶活性的最适温度为60℃,最适pH值为8.0.1～4 mmol/L Ni2+对rSjPP酶活力有促进作用,但Mn2+、Mg2+、Ca2+等阳离子对rSjPP的酶活力影响不大.     

牛支原体recA基因的克隆表达及重组recA的DNA重组酶活性分析

为了确定牛支原体recA是否也具有介导DNA重组的活性,从牛支原体PG45菌株基因组中克隆recA基因片段,构建至原核表达质粒pET-28a中,摸索表达条件,采用Ni-NTA树脂纯化而获得纯度较高的重组recA蛋白,并进行DNA重组酶活性试验.结果表明,重组蛋白以可溶性表达的最优条件为16℃、800 μmol/L IP...     

家兔玻璃体液HBDH、LDH活性变化与PMI相关性的研究

目的 寻找一种推断PMI的新方法。方法 应用全自动生化检测仪(用比色法)检测家兔死后0-54小时玻璃体液内羟丁酸脱氢酶(HBDH)、乳酸脱氢酶(LDH)在两组温度下(25-30℃:10-15℃)的失活情况。结果 两种酶的活性在死后一定时间内各出现一个平台期,平台期后两酶的活性迅速下降,低温组在死亡54小时后活性几乎为零,高温组在死亡48小时后活性几乎为零。经统计学分析得知死后两种酶活性与PMI之间有显著的负相关性(P<0.05)。结论 在0-54小时内依据其各自的回归方程将可以大致地推断PMI,依据两种酶活性的多元回归方程可以较准确地推断PMI。     

亳菊花中β-葡萄糖苷酶的提取和酶学性质研究

目的 测定亳菊花中β-葡萄糖苷酶的活性,研究亳菊花中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质。方法 采用对硝基苯酚-β-D葡萄糖苷（4-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,pNPG）法考察亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件及其酶学性质。结果 当0.2 mL酶液、20 mmol/L pNPG 0.2 mL、0.6 mL pH值为4.0的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液在温度为50 ℃的水浴中反应45 min时,酶活性最高。在此条件下对亳菊花的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质进行初步研究,结果表明该酶在30～50 ℃时,随着温度升高,酶活力有上升趋势,其热稳定性较好;pH值在3.2～5.4之间时,相对酶活性均在80%以上;酶在4 ℃下的保存稳定性较好。结论 本研究所测定的亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件及酶学性质可为亳菊花炮制原理研究奠定基础。