遗传工程及其在法庭科学中的应用

遗传工程分两大类,一是细胞水平的,一是分子水平的,分子水平的遗传工程技术应用于法庭科学的实践起自八十年代,主要是DNA(脱氧核糖核酸)指纹技术和PCR(聚合酸链扩增反应)技术.     

牦牛胎儿成纤维细胞的分离培养

采用30d胚龄左右的牦牛胚胎,用2种不同的消化液消化后,将所得的牦牛胎儿成纤维细胞(yak embryonic fibroblasts,YEF)培养于不同血清含量的RPMI1640培养液中,并接种于2种不同材质的培养瓶表面,对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清(FBS)添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明,含150 mL/L FBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长,可传代27次以上;经用RPMI1640和D-Hank’s液配制的2．5 g／L胰蛋白酶消化,所得的YEF的细胞活率差异不显著(P>0．05),其原代细胞在含100 mL／L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著(P<0．01);不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。     

不同体外培养条件对家兔早期囊胚贴壁行为的影响

采集家兔自然交配后96 h的早期囊胚,以低糖DMEM 150 mL／L胎牛血清 0．1 mmoI／L非必需氨基酸 100 IU／mL青霉素 100 IU／mL链霉素为基础培养基,比较了不同胚胎处理方法、不同饲养层以及培养液中添加不同成分对兔早期囊胚贴壁和增殖的影响,以完善免胚胎干细胞的建系方法。结果表明,以胚胎分割法和链霉蛋白酶-E(proteinase E)处理掉黏蛋白及部分透明带的胚胎容易贴壁和增殖;在小鼠成纤维细胞饲养层和兔胎儿成纤维细胞饲养层上,胚胎的脱带率差别不大,但在小鼠成纤维细胞饲养层上贴壁率明显提高,且贴壁后内细胞团增殖较快;添加胰岛素、白血病抑制因子和β-巯基乙醇均利于抑制ES的分化和促进内细胞团的增殖。     

弓形虫病免疫的研究─—弓形虫GJS和QHO株在不同浓度血清培养条件下的生物学特性观测

在用低浓度犊牛血清（２．５％）和不含血清的１６４０培养液培养的ＢＨＫ－２１细胞中，接种毒力不同的弓形虫ＧＪＳ和ＱＨＪＯ株，于５％ＣＯ＿２３７℃培养。结果两虫株的生物学特性存在一定差异；在含２．５％血清培养液培养的细胞中，虫体繁殖显示两个高峰，在无血清条件下只有一个高峰值，ＢＨＫ－２１细胞在含虫、不含虫及含血清和不含血清条件下均只有一个高峰值；两虫株培养上清蛋白含量均以递增方式增加，至１９０小时蛋白含量牧最初２小时分别增加１．９３、２．５２倍，对照ＢＨＫ－２１细胞上清蛋白无明显变化；培养上清虫体分泌排泄抗原（Ｅ／ＳＡ）滴度随培养时间的延长而上升，ＢＨＫ－２１对照上清呈阴性。     

口蹄疫病毒Asia 1/JSWX株基因组全长感染性克隆的体外拯救与序列分析

通过反转录聚合酶链反应,获得了口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JSWX株基因组3′端长片段(长约7.5kb)和5′UTR中ploy(C)前后的2个短片段。5′UTR的2个短片段经融合PCR扩增得到长约710bp的片段。用引物在基因组5′末端引入AflⅡ酶切位点和T7启动子,在5′UTR内引入SpeⅠ酶切鉴定位点,在3′末端引入NotⅠ酶切位点,将融合片段和3′端长片段顺次连接到载体pSL1180。经T7体外转录系统获取的RNA转录本与脂质体共转染BHK21细胞。测序结果表明,构建的病毒基因组全长cDNA为8 197nt,分别包括1个长为1 095nt的5′UTR[含有1个17nt的ploy(C)];1个长6 990nt的ORF;1个长为93nt的3′UTR;之后是18nt的poly(A)尾巴。该全长cDNA克隆与Asia 1/Jiangsu/China/2005株基因组序列的同源性为98.4%。测序和酶切鉴定结果均表明,该口蹄疫病毒株全长cDNA克隆已构建成功,该方法极大地简化了获得FMDV全长cDNA克隆的过程。通过反转录聚合酶链反应、间接免疫荧光试验和蚀斑试验等鉴定,本试验获得了感染性分子克隆;体外拯救获得的基因工程病毒连续传代培养后,可致BHK21细胞产生病变。上述结果表明,构建的cDNA克隆可以作为基因操作的载体,为深入研究安全性好、稳定性高和免疫原性强的基因工程疫苗奠定了基础。     

肠道微环境重组技术对提高家禽抗病力的研究─—乳杆菌XF－9301体外拮抗试验

从健康成年母鸡肠道中分得乳杆菌若干株，选典型的一株（ＸＦ－９３０１）在试管内进行了对鸡白痢沙门氏菌的体外拮抗试验。结果表明，此株乳杆菌对鸡白痢沙门氏菌在体外有极强的拮抗作用，共同培养９小时内，即可完全抑制其生长繁殖。     

肝片形吸虫及其培养液内花生四烯酸代谢物水平和作用探讨

用体外培养的方法分析了肝片形吸虫及其培养液内花生四烯酸代谢物水平.结果表明,肝片形吸虫虫体匀浆中的PGE2、TBX2和6-keto-PGF1α水平分别为0.93pg/g±0.12 pg/g,0.26pg/g±0.02pg/g和0.43 pg/g±0.09 pg/g;培养液中分别为52.50 ng/L±2.14 ng/L,32.17ng/L±7.18 ng/L和124.81 ng/L±44.33 ng/L;均以PGE2和6-keto-PGF1α为高.提示肝片形吸虫成虫有PGE2、TBX2和6-keto-PGF1α等花生四烯酸代谢物存在,这类代谢物可能对宿主机体有作用.     

韭菜挥发油成分的气相色谱-质谱分析及抗常见病原菌活性研究

采用水蒸气蒸馏法提取韭菜挥发油,通过体外抑菌试验检测其抑菌活性,确定体外最小抑菌浓度(MIC);并采用气相色谱-质谱(GC-MS)法分离检测韭菜挥发油成分。结果显示,韭菜挥发油具有广谱的抑菌活性,且对不同细菌的MIC不同。在韭菜挥发油中鉴定出17个组分,主要为二丙烯基-双硫醚(39.308%)、甲基-丙烯基-双硫醚(32.763%)、甲基-丙烯基-三硫醚(12.157%)、二丙烯基-三硫醚(7.330%)。结果表明,韭菜挥发油具有研发成新型抗菌药物与食品防腐剂的潜力。     

甘草酸二钾体外抗鸡传染性法氏囊炎病毒的作用机制

利用鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养系统,通过观察细胞病变(CPE)和用MTT法测定细胞活力这两种方法来评价甘草酸二钾体外抑制鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)对CEF的感染作用,并通过甘草酸二钾对病毒复制、吸附的阻断作用测定试验及直接灭活病毒测定试验,初步探讨了甘草酸二钾的抗病毒机制。结果显示,甘草酸二钾在安全浓度范围内对病毒感染细胞的抑制率达到70%以上,EC50为663.2±268.4μg/mL,SI>4.52;在阻断病毒复制、直接灭活病毒的试验中,甘草酸二钾显示了较强的抗病毒能力,但在阻断病毒吸附试验中却没有作用,推测其抗病毒机制可能是干扰了病毒的复制和直接使病毒灭活。提示,甘草酸二钾能够作为预防及治疗传染性法氏囊炎的药物或先导化合物。