大鼠脑挫伤后caspase-3和HAX-1的表达

目的观察大鼠脑挫伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)和造血干细胞特异性相关结合蛋白-1(HCLS1-associated protein X-1,HAX-1)在损伤后不同时段的表达规律,探索损伤时间推断的新方法。方法建立成年SD雄性大鼠脑挫伤模型,随机分为脑挫伤后2 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d组,假手术组和正常组。采用Western印迹法检测大鼠脑挫伤后caspase-3和HAX-1的蛋白表达。采用激光共聚焦显微镜检测技术对脑挫伤后HAX-1阳性细胞数和TUNEL染色细胞数进行观察。结果脑挫伤后,随着损伤时间的延长,caspase-3表达逐渐增强,3 d达到峰值,以后逐渐下降,7 d仍高水平表达(P<0.05)。HAX-1阳性细胞表达在伤后开始升高,6 h表达强度最高(P<0.05),12 h后逐渐下降,伤后3 d几乎测不到。TUNEL染色细胞数在伤后2 h明显增加,伤后3 d数量最多,此后逐渐减少,7 d仍维持较高水平(P<0.05)。结论大鼠脑挫伤后caspase-3、HAX-1的表达有时序性变化,可能成为脑损伤时间推断的新依据。     

鹅源新城疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank上鹅源新城疫病毒NA-1株M基因的序列,在保守区域设计并合成了1对引物,采用荧光嵌合法(SYBR Green Ⅰ)建立了检测鹅源新城疫病毒的实时荧光定量PCR(real-time PCR).以鹅源新城疫病毒NA-1株反转录产物cDNA为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线,并进行了融解曲线分析.结果,标准曲线的Ct值检测范围为23～36,相关系数(r2)为0.992;无引物二聚体及非特异性产物,且Tm=(83±0)℃.结果表明,建立的检测鹅源新城疫病毒实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏性高,能为以后快速诊断鹅源新城疫病毒提供有效保障.     

警犬细小病毒肠炎的诊断和治疗

犬细小病毒肠炎（CPV）是20世纪70年代末发现的一种犬类急性接触性传染病,对警犬的危害性很大。但如果能做到及时、正确地诊断和合理地治疗,同时加强护理,还是可以大大降低警犬死亡率的。     

“STR荧光检测试剂盒研制”获重大成果

从2000年起,司法部司法鉴定科学技术研究所与上海申友生物技术有限公司合作开展了国产STR荧光检测试剂盒的研制工作。通过攻关,项目组现已取得可喜成果,研制出适合于亲子鉴定和个体识别的18个DNA位点的扩增检测试剂盒,并于2004年12月21日通过专家鉴定。专家一致认为,课题组研制的试剂盒在灵敏度、特异性和适用性等方面达到了进口商品化试剂盒的水平,课题组所取得的成果在国内是领先的。在合作研究的基础上,上海申友生物技术有限公司利用其在PCR基因检测诊断试剂生产上的优势,已实现     

用等电聚焦法同步检测血浆类粘蛋白ORM_1亚型和Gc亚型

作者应用等电聚焦加免疫印迹技术，样品经过神经氨酸酶的预处理，首次建立了同步检测血浆ORM1亚型和Gc亚型的分型方法。本法累计个人识别机率为0．8063，累计非父排除率为0．4837。是同步电泳分型中鉴别机率较高的一种。     

在Gc电泳图谱上读Hp表型

前言血型特异性成分(Gc)和结合珠蛋白(Hp)是两种血清球蛋白,分别具有三种遗传表型Gc1—1,Gc2-1,Gc 2—2,和Hp1-1,Hp2-1,Hp2-2,按孟德尔遗传定律遗传,是法医学个人识别及亲权鉴定的两个重要遗传标记。一般情况下,检测血清Gc和Hp需要分别配制凝胶、凝胶缓冲     

法医器官组织特异性circRNAs的筛选及确证

目的 筛选并确证器官组织特异性circRNAs分子标记物,应用于法医器官组织溯源.方法 从TSCD数据库及文献中,筛选出器官组织特异性circRNAs,设计并验证引物.收集心脏、大脑、肝脏、皮肤、骨骼肌、肺脏等人体组织样本,经总RNA提取、RT-qPCR、琼脂糖凝胶电泳等步骤对候选circRNAs进行组织表达水平分析,...     

奶牛乳腺特异性表达人溶菌酶基因载体的构建与表达

为探讨应用转基因动物技术降低奶牛乳腺炎发病的可行性,参照人溶菌酶(human lysozyme,hLZ)基因序列(NM_000239.2)设计引物,采用RT-PCR方法从人胎盘组织中成功扩增克隆了406bp的hLZ基因成熟肽片段。应用娟姗牛酪蛋白乳腺特异表达调控元件,经过多步酶切、连接、转化、筛选、鉴定,构建成奶牛乳腺表达hLZ的载体pBCN5.2-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(13.6kb)和pBCN-3.8-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(12.2kb)。将构建的2个载体瞬时转染Bcap细胞,24h后可观察到EGFP的表达;通过实时定量PCR检测比较2个载体hLZ的表达丰度,结果,相对表达量分别为0.89±0.04和0.62±0.05。将线性化的pB-CN5.2-hLZ-1.1pA-EGFP-neo载体转染Bcap细胞,筛选后获得阳性细胞克隆,纯化阳性细胞总蛋白进行SDS-PAGE分析,与空白对照相比,检测到14ku的新蛋白条带。Western-blot分析中亦出现14ku的特异性条带。证实构建的载体能够正常表达hLZ基因,这为进一步研究获得自然抵抗乳腺炎的转基因奶牛奠定了工作基础。     

人类岩藻糖基转移酶5特异性分布及其在精细胞的表达与定位

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、阴道液、唾液及血清中的表达量,采用免疫荧光技术检测FUT5在精细胞中的表达与定位。结果免疫印迹方法结果显示FUT5在精细胞膜及血清中有较高表达,但在精浆、阴道液及唾液中未被检测到。免疫荧光实验结果显示FUT5主要存在于精细胞头部。表明人类精细胞膜存在一定表达量的特异性FUT5,可采用抗原-抗体反应分离精液和阴道液混合斑中的精细胞。结论人类FUT5表现出分布特异性,可应用到法医学性犯罪案件中混合斑的鉴定。