传染性支气管炎病毒S-ChIL-15融合基因真核表达质粒的构建及其体外表达

通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChlL15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒.将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体外瞬时表达情况进行检测.结果显示,成功构建了S-ChIL-15融合基因,转染24 h后能检测到IBVS-ChlL-15融合基因和该融合基因瞬时表达的产物.     

旋毛虫p46000抗原基因的转录及表达特性鉴定

根据旋毛虫p46000抗原基因和葡萄糖3一磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列设计特异引物,以不同发育时期旋毛虫总RNA为模板进行SYBR Green染料法实时定量RT-PCR检测p46000基因转录情况.制作不同发育时期旋毛虫虫体及感染组织石蜡切片,采用免疫荧光染色技术检测p46000抗原的表达及定位情况.结果显示,p46000抗原基因在旋毛虫不同发育时期均有转录,但转录水平有明显差异,转录高峰集中于成虫和肌幼虫期,新生幼虫期明显低于其他时期.天然p46000抗原蛋白定位于杆状体和虫体表面,表达高峰集中于成虫、肠道期及成囊期肌幼虫.表明,p46000抗原基因的转录与表达具有一定的时空特异性.该基因在旋毛虫的寄生过程中尤其在早期感染中具有重要作用且可能与旋毛虫的免疫逃避有关.     

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株VP1蛋白的原核表达及其反应原性

根据猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的基因组序列(GenBank登录号:DQ355222)设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了PTV的VP1基因片段,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-VP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达.结果表明,重组菌可表达分子质量为45 ku的融合蛋白,在1.0 mmol/L IPTG诱导6 h后,重组菌的表达效果最好,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的63.4%,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中.表达产物经Ni柱纯化后,薄层扫描显示,目的蛋白的纯度达到了97%.Western-blot结果显示,纯化后的VP1蛋白能与PTV Swine/CH/IMH/03株阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明,原核表达的VP1蛋白具有良好的反应原性.     

传染性腔上囊病病毒广西流行株免疫原性的研究

分别制备传染性腔上囊病病毒(IBDV)广西流行毒株040124、BH11、TSC-2(9)和YL052以及参考强毒株CJ801-BKF的灭活油乳荆疫苗(OEV)及其多价OEV,分别进行IBD商品疫苗毒株B87(in)和FW2512对4个广西流行毒株的攻毒免疫保护试验、流行毒株间的免疫交叉保护试验、多价OEV不同免疫剂量及其与CJ801-BKF株OEV的免疫保护对比试验.结果显示,2个IBD商品疫苗均不能对4个流行毒株提供完全的保护;4个流行毒株的OEV对同源毒株的攻毒均可产生100%保护,其中040124株OEV的交叉免疫保护性最好;在毒株免疫组与未免疫组免疫器官指数的比较中发现,TSC-2(9)株OEV免疫鸡的免疫器官受病毒的损伤程度最严重,而040124、BH11和YL052株OEV的免疫均能较好地保护鸡的免疫器官免受病毒的损伤;多价OEV 3个免疫剂量的免疫保护指数(IPI)为80%～100%,1mL免疫组的IPI显著高于0.25 mL免疫组(P＜0.05),而1 mL免疫组与0.5 mL免疫组差异不显著(P＞0.05);多价OEV的免疫效力显著高于毒株YL052、TSC-2(9)和CJ801-BKF的OEV(P＜0.05).结果表明,本研究制备的多价灭活疫苗适用于本地IBD的防制.     

猪圆环病毒2型对体外培养仔猪淋巴细胞转化能力及其活性的影响

采集5头PCV2和PRRSV血清抗体阴性的断奶仔猪血液,分离外周血淋巴细胞,分对照组、PHA组、LPS组、PCV2组、PCV2+PHA组、PCV2+LPS组进行体外培养,用MTT法检测PCV2作用2d后对仔猪外周血淋巴细胞转化能力的影响;无菌取脾制成单细胞悬液,分单独淋巴细胞(L)、淋巴细胞+PCV2(L+V)、淋巴细胞与巨噬细胞(L+M)和淋巴细胞与巨噬细胞+PCV2(L+M+V)4组进行体外培养.分别在培养后第0、6、12和24 h收获淋巴细胞,用RT-PCR法检测淋巴细胞IL-2R(α)mRNA的表达.结果显示,与对照组、PHA组和LPS组相比,PCV2组、PCV2+PHA组和PCV2+LPS组淋巴细胞的转化能力均极显著降低(P＜0.01);PCV2对单独培养的淋巴细胞IL-2R(α)表达的影响不显著(P＞0.05),而巨噬细胞能协同PCV2促进淋巴细胞IL-2R(α)的表达,尤其在攻毒后第12和第24 h极显著增加(P＜0.01).证实PCV2在攻毒后第2 d能抑制体外培养T、B淋巴细胞的转化能力,且巨噬细胞能协同PCV2促进T淋巴细胞的活化.     

牛趋化因子受体4基因的克隆表达及序列分析

采用RT-PCR技术,从被刺激诱导的牛外周血单个核细胞(PBMC)中克隆了牛趋化因子受体4(CXCR4)全长基因,并将CXCR4基因和CXCR4基因N端1～126 bp(CXCR4~(42aa))片段分别亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,命名为pGEX-4T-1-CXCR4、pGEX-4T-1-CXCR4~(42aa).获得重组菌株后,采用不同的IPTG浓度、不同诱导时间、不同温度和不同培养基等组合诱导表达这两种重组菌,其中pGEX-4T-1-CX-CR4~(42aa)重组菌获得了表达,并在37℃、IPTG浓度为0.8 mmol/L、诱导6 h时表达量最大,约占菌体总蛋白的45%,目的蛋白主要以包涵体的形式存在;而pGEX-4T-1-CXCR4重组菌未表达出目的蛋白.     

俄罗斯与东亚国家的原油贸易——价格分析的角度

近年,俄罗斯主要通过4条途径向东亚国家输送原油。由于这4条途径的油源地及输送方式不同,因此最终的交易价格也不相同。笔者选取2条途径——用铁路通过满洲里向中国输油和用油轮从萨哈林岛向日本和韩国输油——的贸易价格与俄罗斯对欧洲的离岸价格及中东原油对东亚国家的到岸价格进行比较分析,揭示俄罗斯原油在东亚石油市场的价格现状。本文还对通过东西伯利亚一太平洋管道的出口原油的价格作出预测,指出它的价格将高于目前中俄铁路原油贸易价格和同品质的中东原油价格。     

“养生”您找到正确的方式了吗？——访南宁市正元子平自然养生会所董事长郑永利

[人物介绍]郑永利,南宁市正元子平自然养生会所董事长、中国-东盟郑氏国际商会筹委会副主任、广西南宁领创商贸有限公司董事长、广西民营企业商会副会长、南宁市健康养生协会副会长。     

十年辛勤耕耘今日携手共庆

十年坚定携手,不惧风云骤变;风雨同舟共渡,合作信心弥坚。今年1月1日。在中国与东盟的共同努力和大力推动下,备受世界瞩目的涵盖19亿人口、生产总值近6万亿美元的世界第三大自由贸易区——中国-东盟自由贸易区如期建成。     

泛北部湾经济合作论坛历届回顾

2006年7月20日～21日,首届“环北部湾经济合作论坛”在广西南宁举行,论坛主题为：“共建中国-东盟新增长极”,论坛最主要的成果是提出了由泛北部湾经济合作、大湄公河次区域合作两个板块和“南宁-新加坡”经济走廊一个中轴构成的中国-东盟“一轴两翼”区域合作新格局的战略构想。