在规范中创新 维护病犯权益——四川省成都病犯监狱实践大病统筹机制纪实

四川省监狱管理局2011年5月在成都召开全省监狱系统服刑人员大病统筹工作会议，下发了《四川监狱系统服刑人员大病统筹管理试行办法》，对四川省监狱系统启动实施服刑人员大病统筹工作进行了统一部署。     

生活指南

电脑病毒与手机病毒有何不同 电脑病毒和手机病毒的实现原理类似，但传播途径、威胁方式不同，如手机病毒以智能手机为攻击目标、以移动网络为传播平台，通过伪装应用软件、病毒短信、恶意链接、蓝牙红外等多种途径，对手机进行攻击。电脑病毒更多以恶意传播、破坏类为主，后期出现的网络木马则以欺诈、盗号为主。     

重大突发公共卫生事件中政府应急管理能力要素分析

近年来，传染性非典型肺炎、甲型H1N1流感（以下简称‘H1N1”）以及人感染H7N9禽流感（以下简称“H7N9”）等重大突发公共卫生事件引起了国内外社会各界的广泛关注。政府作为应对突发公共卫生事件的重要主体，其应急管理能力的强弱直接关系到是否能有效控制、减轻和消除突发公共卫生事件引起的严重社会危害，从而有力地保障公众身心健康与生命安全。     

盐池县:绘就脱贫富民新画卷

七月的盐州大地鲜花吐蕊,芬芳馥郁。在黄花种植基地,在滩羊养殖园区,在乡镇卫生所,在农家小院,所到之处,都能深切感受到盐池县脱贫富民的铿锵节奏,感受到盐池县委、县政府以百姓之心为心的有力行动。打造精准扶贫＂盐池模式＂,大力发展特色产业,推广扶贫保险,推进健康扶贫……为了如期脱贫摘帽,奔向全面小康,让老百姓的日子越来越好,盐池县干部群众正齐心协力,共同绘就一幅壮阔的脱贫富民新画卷。     

口蹄疫病毒O型和A型交互反应性单克隆抗体的筛选与鉴定

不同血清型口蹄疫病毒(FMDV)之间不能产生交叉免疫保护,但是血清学的交叉反应确实存在。本研究旨在建立一种筛选型间交互反应性抗体的方法,以期为解析FMDV血清型间保守的抗原结构奠定基础。本方法主要依据单个B细胞抗体技术,首先采用两种不同的荧光染料FluoProbes 647H和Pacific Blue分别标记O型与A型FMDV 146S灭活抗原,然后利用流式细胞分选技术,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出结合两种抗原的特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,并将可变区基因插入含有牛IgG抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建IgG抗体的重链与轻链表达质粒。将重链与轻链表达质粒共转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行完整抗体表达。结果显示,通过该方法获得了5株FMDV特异性单克隆抗体,其中4株(H64、R82、I16、R29)经间接免疫荧光(IFA)检测都可特异性识别O和A型FMDV;ELISA结果显示,H64、R82、I16与O、A型抗原均具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,I16可特异性结合O、A型FMDV结构蛋白VP2中的线性表位,说明在衣壳蛋白VP2上存在血清型间保守的抗原表位,通过本研究进一步加深了对FMDV抗原结构的认识。     

牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒,本研究建立了牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。通过设计特异性引物扩增病毒基因,将扩增的目的片段(119 bp)连接到pMD19-T载体中,构建重组质粒。将重组质粒作为阳性标准品,用于SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立。结果显示,特异性引物扩增的目的片段约为119 bp,符合预期的大小,经测序鉴定所扩增的目的片段正确。敏感性结果显示,用该方法检测阳性质粒标准品的最低限度为3.04 X101 copies/mL,是Nano-PCR的10倍。将牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型与牛传染性鼻气管炎病毒进行特异性检测。结果显示,只有牛传染性鼻气管炎病毒被检测到,其他病毒均未有特异性的扩增曲线,表明该方法的特异性良好。批内和批间重复变异系数均小于1%,显示该方法具有良好的重复性。用建立的方法对20份疑似IBRV的临床样品进行检测,并与Nano-PCR检测方法进行对比,结果显示本方法的阳性样晶率高于Nano-PCR检测方法。本研究建立的牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,可用于牛传染性鼻气管炎病毒的检测。     

适合鸭瘟病毒弱毒增殖的MHC单倍型鸭胚肝间充质干细胞的建立

为了建立适于鸭瘟病毒(DPV)弱毒增殖的细胞系,利用4个主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭品系,体外分离鸭胚肝细胞,在干细胞因子、白细胞抑制因子和成纤维细胞生长因子诱导下,获得鸭胚肝间充质干细胞(DuLMSC)。接种DPV疫苗株C-KCE后,结果显示:F1~F10代均能稳定出现CPE;将F10病毒接种细胞24 h后,通过扫描电镜在胞质、胞核及细胞间隙均能够观察到典型的疱疹病毒粒子;F1至F10代均能扩增出DPV UL2基因片段,序列测定结果表明F1、F5、F10代的扩增产物与NCBI中公布的DPV株(EU082088)的核苷酸同源性为100%;组织培养半数感染量和一步生长曲线结果表明,源自B4系单倍型鸭的DuLMSC细胞系增殖DPV的病毒含量明显高于B1、B2和B3系。本研究为稳定培养鸭瘟病毒提供了优良稳定的实验材料。     

牛冠状病毒牛肠病毒牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法的建立与应用

为建立一种可以快速检测牛冠状病毒（BCoV）、牛肠病毒（BEV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的实时荧光PCR方法并应用于临床检测,根据BCoV N基因、BEV 5′-UTR基因、BVDV 5′-UTR基因设计3对特异性引物和探针,通过对引物、探针的浓度以及反应条件的优化,建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法,并对该三重PCR方法的敏感性、重复性、特异性和临床样本检测结果进行了评价。结果显示,该方法灵敏度高,对BCoV、BEV和BVDV的最低检测限为10 copies/μL;重复性稳定,批内和批间变异系数（CV）均在2%以下;特异性强,对常见腹泻类病原无交叉反应。应用此方法检测河南省445份牛腹泻粪便样本,BCoV、BEV和BVDV的阳性率分别为6.5%(29/445)、17.5%(78/445)、12.1%(54/445)。上述结果表明,本研究建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒一步法三重实时荧光PCR方法,为疫病的快速检测及预防提供了有效的技术手段。     

Rab18调控禽偏肺病毒C型复制的研究

为探究Rab18调控禽偏肺病毒C型（aMPV/C）复制的分子机制,将aMPV/C感染A549细胞后进行激光共聚焦显微镜观察并用Image J软件分析共定位系数。结果显示,Rab18与aMPV/C N蛋白均在细胞质中表达并存在共定位,而未接毒组无明显的N蛋白荧光信号,接毒组共定位系数极显著高于未接毒组（P<0.01）。将pCMV-Flag-Rab18、pCMV-Flag、siRab18以及siNC分别转染A549细胞,接种aMPV/C后收集细胞和细胞上清,分别用qPCR、Western-blot以及TCID50检测aMPV/C N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价。结果显示,过表达Rab18后aMPV/C N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均极显著升高（P<0.01）,而干扰Rab18表达后N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均极显著降低（P<0.01）。将pCMV-mcherry-Rab18分别与可融合表达GFP蛋白的aMPV/C各基因的质粒共转染A549细胞后进行激光共聚焦显微镜观察。结果显示,Rab18均可与aMPV/C各蛋白在细胞...     

牛结节性皮肤病病毒ORF006蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为探究牛结节性皮肤病病毒（LSDV）ORF006蛋白的生物学功能,制备了ORF006基因的多克隆抗体,用PCR技术获得LSDV ORF006的基因片段克隆至pET-28a原核表达载体,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,将纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果显示,LSDV ORF006基因全长约696 bp;pET-28a-ORF006重组质粒在大肠杆菌中于37℃经1 mmol/L的IPTG诱导12 h,成功表达约28.0 ku目的蛋白;ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶102 400;Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别ORF006蛋白;间接免疫荧光试验表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别LSDV感染MDBK细胞表达的ORF006蛋白。本研究为进一步探究LSDV ORF006蛋白生物学功能奠定了基础。