猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞产生Ⅰ型干扰素mRNA转录水平的影响

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)对其产生Ⅰ型干扰素mRNA转录水平的影响,从猪繁殖与呼吸综合征阴性的健康仔猪肺中分离和培养PAMs,随机将其分为正常对照组、PRRSV感染组和poly(I:C)处理组。于感染后第12、24、36、48、60小时分别收集细胞,运用半定量RT-PCR法检测PAMs产生Ⅰ型干扰素的mRNA转录情况。结果显示,与正常对照组和poly(I:C)处理组相比,PRRSV感染组中IFN-α/βmRNA转录水平在各时间段均显著下调。其中,PRRSV感染组中IFN-αmRNA的转录在感染后第12~36小时呈先升高后降低的趋势,在第48小时有所上调,但在感染后第60小时IFN-αmRNA的转录显著下调;而IFN-βmRNA的转录在感染后第12~24小时基本没有变化,在第36小时最低,在感染后第48小时有所上调,但在感染后第60小时IFN-βmRNA的转录显著下调。结果表明,PRRSV可导致PAMs产生Ⅰ型干扰素的mRNA转录水平降低,从而使宿主细胞及机体非特异性免疫功能受到抑制。     

猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞生物学活性的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集猪肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象,通过EA花环试验测定Fc受体数目,通过吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,分析PCV2感染对PAM生物学活性的影响。结果显示,在整个试验期内2种方法均没有检测到PAM凋亡,表明PCV2感染不会诱发PAM凋亡。PAM的Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后第3 d明显下降,第7 d有所回升,之后基本恢复,表明PCV2感染后PAM吞噬和清除病原的功能出现短暂下降。     

平喘宁对哮喘豚鼠GM-CSF和PAF的影响

目的:探讨平喘宁治疗哮喘的作用机制.方法:采用卵蛋白法诱导豚鼠哮喘模型,诱导哮喘同时用平喘宁对模型豚鼠进行预防,实验结束后用酶联免疫吸附法测定各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中粒-巨细胞集落刺激因子(granule macrophage-colony stimulating factor, GM-CSF)、血清血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)含量.结果:平喘宁能显著降低BALF中GM-CSF、血清PAF含量.结论:平喘宁可通过降低BALF中GM-CSF、血清PAF含量而发挥治疗哮喘的作用.     

单核增生李斯特菌的随机扩增多态DNA分型研究

通过优化反应条件和筛选随机引物，建立了单核增生李斯特菌的随机扩增的多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析方法。在１０条长为１０ｂｐ的随机组合引物介导下，经过低温（３５℃）扩增收集到的８株不同血清型的单核增生李斯特菌可产生稳定、复杂的ＰＣＲ指纹图。图谱经过ＰＨＹＬＩＰＳ软件分析，绘制出菌株的遗传聚类树图。８株单核增生李斯特菌可分成３个聚类群，其中两株血清型相同但遗传距离较远。试验结果表明，ＲＡＰＤ可作为微生物的基因分型方法。     

家兔肺冲洗的巨噬细胞吞噬作用与死亡时间的关系

应用流式细胞仪对不同死亡时间家兔肺冲洗的巨噬细胞吞噬荧光微球的功能进行定量测定。结果显示:随着死亡时间的推移,吞噬细胞的吞噬功能均有显著下降,各时间点吞噬细胞吞噬荧光微球的百分率和在每个吞噬细胞中的荧光微球的数目也是逐渐减少,这种巨噬细胞吞噬功能规律性的下降,有助于估计死亡时间。     

高氧环境下大鼠肺白细胞毒素的免疫组化研究

目的研究白细胞毒素在高氧环境下大鼠肺的组织学分布及与肺部疾病之间的关系。方法将大鼠分组后分别置于高氧环境和正常空气中24h、48h、72h和96h,制作石蜡标本切片,用特异的抗白细胞毒素抗体进行免疫组化染色。结果 置于高氧环境下大鼠肺中的中性粒细胞对白细胞毒素呈阳性反应,且随置入高氧环境时间的延长而明显增强。此外,巨噬细胞也呈现阳性反应。结论 用免疫组化方法证明了中性粒细胞产生白细胞毒素,提示白细胞毒素是导致高氧环境下肺损伤的重要化学介质之一。     

甘草甜素甘草多糖和光甘草定对小鼠巨噬细胞的毒性与免疫功能的调节

为探讨甘草的3种主要成分甘草甜素、甘草多糖和光甘草定对小鼠腹腔巨噬细胞的毒性与免疫功能的调节作用,将3种药物均设6个质量浓度(0.1、1、5、20、100和400μg/mL),分别与巨噬细胞作用12、24和36h后,利用CCK-8细胞活性检测试剂盒检测药物对巨噬细胞的毒性作用;荧光显微镜观察无细胞毒性浓度下对巨噬细胞吞噬大肠杆菌的影响,用ELISA试剂盒检测3种药物对巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果显示,400μg/mL甘草甜素和光甘草定对细胞有一定毒性;所有试验浓度的甘草甜素和甘草多糖均能显著增强巨噬细胞的吞噬能力(P0.01),而仅5、20和100μg/mL光甘草定有这种作用(P0.01);所有试验浓度的3种药物均能显著增强巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α的能力(P0.01),高剂量抑制IL-4、IL-10和TGF-β的分泌(P0.01),而低剂量没有明显变化。结果表明,甘草的3种主要成分甘草甜素、甘草多糖和光甘草定对小鼠腹腔巨噬细胞基本无毒性,呈剂量依赖性地增强巨噬细胞吞噬能力和分泌促炎性细胞因子以及降低抑炎性细胞因子的分泌。     

布氏锥虫伊氏亚种体外培养的研究——布氏锥虫伊氏亚种的纯净培养

用无细胞培养系统培养我国3株水牛源布氏锥虫伊氏亚种取得成功。从开始培养的第7天起,向虫数已很少且不增殖的培养物中逐日补种少量滋养层细胞系统培养的培养日龄相同的同株锥虫,于10～17天间逐步建立了适应于无细胞系统的锥虫群体。整个适应过程可分为4个阶段——一过性生长期、生长停滞期、初步适应期和完全适应期。至今已连续培养9个月,虫密度一般保持在1×10~6/ml左右,最高可达1.9×10~6/ml。锥虫在培养物内有规律地呈现岛屿状密集分布。长期培养的锥虫仍保持单一细长形态,具表面被膜、对小白鼠有致病力。对已适应于无细胞系统的锥虫,成功地进行了克隆、冻存、复苏后可直接继续培养。实验表明,培养液中2-ME和马血清的适宜浓度分别为0.3mmol和20％,添加0.1mmol次黄嘌呤可使虫密度增加约1倍。用烛罐可取代CO_2-培养箱。基础培养基贮存于-20℃,至少可使用76天。     

大鼠骨骼肌损伤后不同时间中性粒细胞及巨噬细胞比率的变化

目的观察大鼠骨骼肌损伤后不同时间点中性粒细胞和巨噬细胞比率的变化情况,探讨其在损伤时间推断上的应用价值。方法健康SD大鼠随机分为伤后6h、12h、1d、3d、7d、10d、14d及正常对照组,建立大鼠骨骼肌损伤动物模型,取损伤区肌肉组织制作切片,应用免疫组织化学染色和图像分析法,观察并计数伤后不同时间点中性粒细胞及巨噬细胞数量和占总细胞数量的比率。结果伤后6~12h,损伤区内可见大量中性粒细胞浸润,其比率达到高峰;伤后1d,损伤区内主要以巨噬细胞浸润为主,其比率达到高峰,中性粒细胞比率则开始下降;伤后3~14d,两种细胞比率均逐渐下降。伤后12h所有样本中性粒细胞的比率均大于75%,而其他各组比率均低于75%;伤后1d所有样本巨噬细胞比率均大于50%,而其他各组比率则明显低于50%。结论大鼠骨骼肌损伤区中性粒细胞和巨噬细胞比率在伤后6h至伤后14d呈现规律性变化。中性粒细胞和巨噬细胞比率分别大于75%、50%时,可分别提示损伤时间为12h、1d。     

PCV2感染对猪MCP-1和IL-8 mRNA表达的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,于接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用竞争PCR技术测定趋化性细胞因子IL-8和 MCP-1 mRNA水平,分析PCV2感染对其mRNA表达的影响。结果显示,与对照组相比,在 PCV2感染后第7 d,IL-8 mRNA水平下降至最低,随后迅速上升,至第14 d时达到高峰,而后快速下降,但仍维持较高水平;MCP-1 mRNA水平在攻毒后第3 d下降至最低,之后逐渐上升,至第14 d时达到高峰,而后下降,第21 d以后恢复正常。结果表明,PCV2感染初期可导致PAM趋化性细胞因子IL-8和MCP-1基因的转录明显下调。