膈下逐瘀汤加减合丹参注射液治疗淤胆型肝炎22例

1996年1月至2001年1月,笔者运用膈下逐瘀汤加减合丹参注射液静脉滴注治疗淤胆型肝炎22例,并与西药治疗的20例进行对照,现报道如下. 1 临床资料     

鸡传染性支气管炎病毒四川分离株N基因DNA免疫质粒的构建

采用SDS 蛋白酶K法抽提鸡传染性支气管炎病毒(IBV)四川分离株SAIBWJ的基因组RNA,参照基因库中的N基因序列设计了1对引物,扩增出了单一的DNA产物。将该产物插入pUC18载体的HindⅢ和BamHⅠ酶切位点,构建了pUC NWJ质粒。序列测定结果表明,获得的克隆质粒包含了全部N基因。再将N基因亚克隆到pcDNA3.1( )载体的HindⅢ和XhoⅠ酶切位点,构建了IBVSAIBWJN基因的DNA免疫质粒pcDNA NWJ。     

CELO病毒fiber1基因部分片段的原核表达及抗原性鉴定

根据鸡胚致死孤儿(CELO)病毒Phelps株的fiber1基因(GenBank序列号U46933)序列设计了1对引物,采用PCR扩增CELO病毒fiber1基因C端(包含Knobs区)的部分片段,并将其克隆到质粒表达载体pGEX6p1,获得的阳性克隆命名为pGEXAF807。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列与CELO病毒Phelps株的fiber1基因序列完全一致。将pGEXAF807转化大肠埃希氏菌DH5α,经37℃、0.6mmol/LIPTG诱导表达5h,SDSPAGE分析超声裂解后的上清和沉淀。结果显示,目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.6ku,目的蛋白量占菌体总蛋白的35.7%。用CELO病毒多克隆血清做Westernblotting试验,结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。     

猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒三重PCR检测方法的建立

针对猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2、猪伪狂犬病病毒(PRV)gD和猪细小病毒(PPV)VP2基因保守区域,设计了特异性引物,在分别建立单一病毒基因PCR检测方法的基础上,通过对3组引物的比例和浓度、dNTPs和Mg2 浓度、退火温度等条件的优化,建立了针对上述3种病毒的三重PCR检测方法。敏感性试验表明,应用该方法最低可检测到4×10-4ng/μL的PRV双链DNA模板和2×10-5ng/μL的PCV2和PPV单链DNA模板。对21份自然感染病猪样品的检测结果表明,该三重PCR检测结果与单一PCR检测的结果完全符合。试验结果显示,建立的三重PCR方法可用于3种DNA病毒的同时检测,具有快速、准确的特点,有临床应用前景。     

牛结节性皮肤病病毒ORF006蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为探究牛结节性皮肤病病毒（LSDV）ORF006蛋白的生物学功能,制备了ORF006基因的多克隆抗体,用PCR技术获得LSDV ORF006的基因片段克隆至pET-28a原核表达载体,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,将纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果显示,LSDV ORF006基因全长约696 bp;pET-28a-ORF006重组质粒在大肠杆菌中于37℃经1 mmol/L的IPTG诱导12 h,成功表达约28.0 ku目的蛋白;ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶102 400;Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别ORF006蛋白;间接免疫荧光试验表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别LSDV感染MDBK细胞表达的ORF006蛋白。本研究为进一步探究LSDV ORF006蛋白生物学功能奠定了基础。     

广西猪瘟流行现状的调查分析

据对广西 13个发病猪场 (疫点 )猪瘟 (CSF)的流行病学调查分析 ,发现当地CSF流行以非典型为主 ,典型CSF同时存在 ,发病猪多在 3月龄以下且病程较长。母猪存在隐性感染 ,部分表现为繁殖障碍 ,一些临床健康猪存在着带毒问题。此外 ,从疑似CSF病料中扩增出牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) ,表明广西猪群中存在着BVDV的感染。分子流行病学调查结果表明 ,猪瘟病毒 (CSFV )广西流行株的基因型较复杂 ,分布 2个基因群的 4个亚群 ,其亲缘关系与 2个传统毒株石门株 (Shimen)和兔化弱毒株 (HCLV)相距甚远 ,最高可达 2 0 .0 %,说明广西CSFV流行株存在着遗传多样性。     

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的扩增及酶切分析

以从内蒙古区分离的 2株传染性喉气管炎病毒 (ILTV)株的DNA为模板 ,用设计好的 1对引物对这 2株毒株的 gB基因进行了PCR扩增 ,并对扩增产物分别用BglⅡ、PstⅠ、HindⅢ限制性内切酶酶切分析。结果表明 ,2个分离株均能特异性地扩增出该病毒 gB基因片段 ,片段大小完全一致 ,为 2 .6kb ;扩增产物的酶切图谱与参考株完全一致。     

一例因输血感染艾滋病病毒损害赔偿案评析

一、基本案情1 996年 2月 1 7日 ,李某在楼上玩耍时不慎坠地受伤 ,被送入 A医院抢救治疗。在该院住院抢救治疗期间 ,输 C血站供全血 40 0 ml(为三名献血员血液 )。因治疗效果不佳 ,后转入其他医院治疗 ,同年 3月 1 2日出院。同年 3月 2 8日 ,李某以“发热 5天 ,皮肤黄染 3天”为由再次到 A医院就诊 ,儿科以“黄疸肝炎”收住院 ,3月 2 9日、30日 ,其父为其输血两次 ,共计 2 0 0 ml。3月 31日转 B医院传染科。4月 2日在给李某作血液检验时 ,发现李某艾滋病毒抗体初筛呈阳性 ,4月 3日 B医院对李某父母血液进行艾滋病毒抗体检测 ,结果均呈阴性…     

鹿流行性出血热病毒核心样颗粒的制备与鉴定

为制备鹿流行性出血热病毒(EHDV)的核心样颗粒(CLPs),本研究将鹿流行性出血热病毒(EHDV)L3与S7基因片段插入至昆虫杆状病毒穿梭载体pFastBac-Dual中,构建重组质粒pFastBac-Dual-vp3-vp7,并通过转座获得重组杆状病毒质粒Bacmid-vp3-vp7,随后转染Sf9细胞获得重组杆状...     

靶向脑心肌炎病毒VP1基因的shRNA对脑心肌炎病毒复制的抑制作用

选择脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因,探讨了shRNA对EMCV复制的影响。设计合成4对编码siRNA的VP1基因的DNA序列,分别构建pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR干扰载体X109-1、X109-2、X109-3和X109-4,脂质体介导转染至BHK21细胞,接种EMCV。病毒TCID50和实时荧光定量PCR结果表明,4种重组EMCV VP1shRNA对EMCV的复制均有抑制作用,其中X109-2的抑制作用最显著。X109-2转染BHK21细胞后分别接种EMCV、口蹄疫病毒(FMDV)、乙型脑炎病毒(JEV),EMCV的lgTCID50为3.5,FMDV和JEV的lgTCID50均在7.0以上,说明重组shRNA质粒对EMCV复制的抑制具有明确的特异性和干扰的靶向性。X109-2和pEGFP-VP1真核表达载体共转染CHO-K1细胞后,RT-PCR和Western-blot检测结果表明,VP1shRNA可抑制pEGFP-VP1在细胞中的蛋白表达,进一步证明了干扰载体的靶向性。上述结果为进一步研究EMCV的感染和复制机制奠定了基础。