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为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩增淘洗,从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取20个单克隆噬菌斑,通过间接ELISA和竞争抑制ELISA检测,共选出13个单克隆噬菌斑,经噬菌体gⅢ部分基因的核苷酸序列测定,确定了8个15肽为IBDV抗原表位。这8个15肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与IBDV Gx(Gen-Bank登录号:AY444873)VP3的氨基酸序列相同,但二级结构上均以β折叠为主,并且与单抗的结合可被VP3蛋白有效地抑制。证实,筛选的是IBDV VP3的模拟表位。 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及其主要抗原表位区的分段表达 总被引:1,自引:0,他引:1
应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1~118)-(144~340)-(100~300)-(1~345),并将其克隆到pMD18-T Simple载体中;将重组质粒pMD-(1~118)、pMD-(144~340)、pMD-(100~300)、pMD-(1~345)的HindⅢ+Bam H Ⅰ双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1~118)、pET-(144~340)、pET-(100~300)、pET-(1~345).将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别. 相似文献
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关于对酒后当事人体内的酒精浓度和行为能力判定,目前我国尚无统一适用的鉴定标准与规范,故对当事人酒后遭性侵案件的司法鉴定,尚未曾见有报道,现将我们受理的2例酒后遭性侵对当事人行为能力判定案例报告如下.
1案例资料
[案例1]张某,女.2018年某日到当地派出所报案,称其在前日17时30分~18时45分与他人聚会喝了 50... 相似文献
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本研究使用纯化的His-EP0重组蛋白免疫BALB/c小鼠,在其血清效价达到要求后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,通过ELISA方法筛选获得了3株能够稳定分泌抗EP0蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5、4C6和3B5。经单抗亚型试验鉴定,发现2C5为Ig G2b/κ型,3B5和4C6均为Ig G1/κ型。叠加ELISA结果证明,2C5、4C6和3B5针对EP0蛋白不同的抗原表位。IFA结果表明,2C5和4C6能够与PRV感染的细胞发生特异性反应,而不与PRV-△EP0感染的细胞反应。综上所述,本研究成功制备了3株针对RPV EP0蛋白的单克隆抗体,为进一步研究EP0蛋白功能提供了重要的实验材料。 相似文献
89.
为提高口蹄疫(FMD)抗原和疫苗的稳定性,采用正交试验设计L18(37),以溶液pH值和氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钠、葡萄糖、精氨酸和氯化钙6种组分的质量浓度作为考察因素,以口蹄疫抗原或疫苗在37℃条件下146S抗原降解为0时保存的时间作为评价指标,以PBS(pH值8.0)作为对照,筛选对FMD146S抗原具有热稳定性作用的化学试剂。结果显示:在4℃条件下,用研制的缓冲液重悬的抗原和配制的疫苗可长期保存;在37℃条件下,与PBS比较,FMDV/OM抗原可保存63 d,FMDV/AF-72抗原可保存84 d,疫苗分别可以保存56和96 d,说明该缓冲液对FMDV抗原和疫苗具有很好的热稳定性。另外,该缓冲液配制方法简单,化学试剂易溶解,可用于大规模生产。研制的缓冲液能提高FMD抗原和疫苗在运输和保存过程中的稳定性,为保证FMD灭活疫苗质量提供了技术支撑。 相似文献
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用多头绦虫原头节、囊壁、囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌(ES)抗原对绵羊免疫及攻击感染多头绦虫虫卵后的血清进行ELISA检测,观察了血清抗体的消长规律。结果表明,绵羊在感染虫卵后第1周即可检测出血清抗体,感染后3~5周抗体效价达到峰值,一直持续到试验结束;免疫组绵羊在免疫3次后,血清抗体效价迅速升高,第3次免疫后1~2周达到峰值,且抗体水平明显高于虫卵感染组,在攻击虫卵后抗体效价开始下降,但直到试验结束时抗体效价仍维持在较高水平。原头节可溶性抗原免疫组和原头节ES抗原免疫组血清抗体总体水平要高于囊壁和囊液抗原免疫组,原头节ES抗原和原头节层析纯化抗原的敏感性、特异性要高于囊壁和囊液层析抗原。试验表明,以上4种抗原可用于ELISA检测绵羊免疫及感染后的抗体应答反应。 相似文献