抗狂犬病病毒核蛋白单链抗体的表达及活性鉴定

为了获得抗狂犬病病毒(RV)核蛋白(N)的单链抗体,从分泌抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D9中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到抗体的轻链可变区基因和重链可变区基因,利用重叠引物延伸法将轻链可变区基因和重链可变区基因连接,同时引入连接肽编码序列,成功扩增得到单链抗体(ScFv)基因,将ScFv基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后得到融合蛋白。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,融合蛋白大小约为32ku,主要以包涵体的形式存在,能被抗His标签的单克隆抗体特异性识别。间接竞争ELISA检测结果表明,该单链抗体能够与RV-His-N重组蛋白和RV结合。抗RV核蛋白单链抗体的成功表达,为单链抗体在狂犬病的诊断和治疗中的进一步研究奠定了基础。     

小亚璃眼蜱4D8基因的克隆与原核表达

根据GenBank上登录的边缘革蜱4D8基因序列设计1对引物,采用PCR技术自半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺cDNA表达文库中扩增获得了4D8基因;将其连入pMD18-T载体,构建重组克隆载体pMD18-Hyaa4D8.测序分析表明,克隆的小亚璃眼蜱4D8基因与边缘革蜱4D8基因的核苷酸序列的同源性为89.2%.将此片段定向亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Hyaa4D8,表达并纯化重组蛋白,通过免疫印迹试验鉴定该重组蛋白的生物学活性.结果显示,该重组蛋白是分子质量为45ku的融合蛋白,且表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别.     

三七活性蛋白的分离及浸提液的筛选

在 32种高原药源性植物中筛选出血凝活性较强的三七 ,用不同pH值和不同盐浓度的缓冲溶液浸泡制备浸提液 ,测定了其血凝活性 ,并进行了糖专一性抑制试验、硫酸铵分级沉淀、活性蛋白含量和分子质量的测定。试验表明 ,高原药源性植物三七浸提液具有活性蛋白的血凝活性 ,在1mol/LNaCl的甘氨酸缓冲溶液中活性最强 ,能被半乳糖所抑制 ,硫酸铵分级沉淀在 4 0 %和 6 0 %时蛋白含量最多 ,血凝活性最高 ,活性蛋白含量为 2 9%。     

内含肽和麦芽糖结合蛋白介导具有抗病毒活性牛α干扰素的表达

为了在大肠杆菌表达系统中高效表达具有抗病毒活性的重组牛α干扰素(BoIFN-α)蛋白,在BoIFN-α基因的上游无缝连接内含肽Ssp DnaB intein(SDI)序列,然后克隆至pMAL-c2X载体中,构建含有内含肽和麦芽糖结合蛋白基因的表达载体pMAL-SDI-BoIFN-α,将重组载体转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达。结果表明,融合基因获得高效表达,且产物主要以可溶形式存在。经直链淀粉树脂纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经MDBK-BVDV(牛病毒性腹泻病毒)干扰素活性系统检测,证实干扰素融合蛋白具有抗病毒活性。     

5-MeO-MiPT对斑马鱼毒性及生物转化途径研究

目的 为评价色胺类新精神活性物质N,N-甲基异丙基-5-甲氧基色胺(N-methyl,N-isopropyl-5-methoxytryptamine,5-MeO-MiPT)的毒性效应及生物转化途径.方法 以斑马鱼为模式生物,进行自发活动行为测试及镜像反射行为模型测试,分析5-MeO-MiPT对斑马鱼的毒性效应;并通过超...     

RPC200混凝土在抗弯试验中的工作性能

文章对不同钢纤维含量的200MPa级活性粉末混凝土(RPC200)的抗弯性能进行了试验研究。根据对试验得到的荷载—挠度全曲线,分析了钢纤维在RPC200梁中的抗弯工作机理,给出了钢纤维含量对抗折强度的影响规律。     

鹅IFN-α基因的高效表达

通过对鹅IFN-α成熟蛋白基因的分析,利用在线软件,将序列中稀有密码子改为优势密码子,优化了密码子适应性指数,更多地采用了利于表达的密码子对,优化了表达的起始区域和终止区域mRNA的二级结构及自由能.然后,将人工合成的鹅IFN-α基因与表达载体pWL连接后诱导表达.SDS-PAGE分析表明,所表达蛋白的分子质量为18.83 ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的35.3%.表达产物以包涵体形式存在.复性、纯化后的鹅IFN-α重组蛋白的纯度达98%,活性达1.28×107U/mL.     

油樟叶乙醇提取物抗炎活性的研究

为探讨油樟叶乙醇提取物的抗炎活性,建立了用二甲苯诱导小鼠耳肿胀、醋酸诱导小鼠毛细血管通透性增加和角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的模型,并测定了角叉菜胶所致大鼠足炎性渗出液中前列腺素E2、组胺和5-羟色胺的含量。结果表明,油樟叶乙醇提取物能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀、醋酸诱导的小鼠毛细血管通透性增加和角叉菜胶所致的大鼠足肿胀,且呈剂量依赖性,并能显著降低角叉菜胶所致大鼠足炎性渗出液中前列腺素E2、组胺和5-羟色胺的含量。证实油樟叶乙醇提取物具有较好的抗炎活性。     

合成大麻素类新精神活性物质研究进展

合成大麻素类(SCs)新精神活性物质是指人工合成的内源性大麻素CB1和CB2受体激动剂.该类物质多以香料、花瓣、烟草和电子烟油等形态出现,吸食合成大麻素对人体具有较强的致幻、镇定和抑制作用,从而产生强烈的快感,但伴随着精神错乱、头昏眼花、嗜睡、躁动、烦躁、恶心以及呕吐等副作用,其对公众的健康和安全构成重大威胁.通过对合...     

选健康食用油需要关注哪三大前提?

食用油是我们每天饮食的必需品,它的健康与否直接关系到全家男女老少每一个人的健康。选择食用油一定要慎之又慎,千万不要因为选错了食用油给全家人都留下健康隐患。那么如何选择安全、健康又营养的食用油呢?带着这个问题我们采访了健康教育专家丁平权老师,她告诉记者: