重组ApxⅡA对胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗免疫效果的影响

将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构基因ApxⅡA克隆到原核表达载体 pGEX-6P-1,并在大肠埃希氏菌中进行了表达,表达产物rApxⅡA以包涵体形式存在。为了检测 rApxⅡA的免疫原性,分别用rApxⅡA、灭活疫苗以及灭活疫苗添加rApxⅡA对比利时白兔进行了免疫。免疫后进行攻毒,所用菌株分别为同型菌株(APP7型L25-4株)和异型菌株(APP1型 4074株)。结果,免疫动物对相同血清型菌株的攻击获得完全保护,且对异型菌的攻击也获得一定保护作用。表明,rApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性,作为抗原成分添加到灭活疫苗中后可提高灭活疫苗的免疫效果。     

人工感染鸭疫里氏杆菌雏鸭的病理学变化

用鸭疫里氏杆菌 (Riemerellaanatipestifer)人工感染 7日龄雏鸭 ,对其进行了临床症状、病理剖检和病理组织学观察。试验结果表明 ,人工感染鸭疫里氏杆菌 2 4h后 ,感染鸭开始出现死亡 ,且在 4 8h内全部死亡。剖检可见典型的纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎。病理组织学检查表明 ,在感染鸭的心、肝、脾、肺组织出现纤维素性炎症 ,脑和肾组织分别出现脑膜炎和坏死性肾炎等变化。     

口蹄疫病毒O/China/99株VP1基因植物种子特异性表达载体的构建及农杆菌的导入

根据植物组成型表达质粒pBin438的限制性酶切位点及FMDVVP1的核苷酸序列设计并合成引物,从种子特异性启动子7S质粒pU82质粒中扩增7S启动子,经HindⅢ和BamHⅠ酶切,与经同样双酶切的植物组成型表达载体pBin438大片段连接,经酶切、PCR鉴定及序列分析,种子特异性表达载体p7SBin438构建完成。从FMDVVP1基因的pGEMVP1质粒中扩增VP1基因,经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后,与p7SBin438质粒酶切后的大片段连接,经酶切、PCR及测序鉴定,FMDVVP1基因已置于种子特异性启动子7S下游,成功构建了FMDVVP1基因的种子特异性表达载体p7SBin438VP1。通过三亲交配法,将表达载体p7SBin438VP1导入根癌农杆菌,为研究FMD可饲疫苗奠定了基础。     

副鸡嗜血杆菌B型分离株免疫原性的比较和疫苗株的筛选

利用分离自我国不同地区的3株B型副鸡嗜血杆菌菌株及0222标准株分别制作油乳剂灭活疫苗免疫无鸡传染性鼻炎病史的鸡群,通过攻毒保护试验和HI抗体测定,分析比较了其免疫原性,以筛选适用于制备疫苗的菌株。结果表明:不同地区的分离株在致病性和免疫原性上存在一定的差异,TJ-1株疫苗免疫鸡对TJ-1和DL-1株的保护作用可达90%和91.7%,对BJ-1株的保护率为63.6%,具有相对较好的保护作用,目前可以作为疫苗株使用。在各免疫组试验鸡中,0222株和BJ-1株免疫鸡群的血清抗体水平较高,但这可能与血凝抑制试验所采用的抗原是由0222株制备的及BJ-1株在抗原性上可能更接近于0222株有关。DL-1和TJ-1株疫苗免疫鸡的抗体水平都很低,但其免疫保护却要强于0222和BJ-1株疫苗免疫鸡。由此说明B型株因菌株之间免疫原性的差异使得HI抗原的选择难度增加。     

禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索

应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C48 1成熟外膜蛋白H基因(ompmH),将ompmH片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得了重组表达质粒pGEX ompmH。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),当转化菌的D600nm值达到0.6～0.8时,对异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GST ompmH表达的最适条件。结果,当细菌的D600nm值为0.6～0.8时,IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol L,最佳诱导时间为4h,最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测,结果显示表达的融合蛋白GST ompmH能与C48 1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应,证明pGEX 6p 1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。     

土霉素降解菌的筛选及其降解特性研究

为了获得对土霉素具有降解活性的细菌,在建立无机盐培养基中土霉素含量的高效液相色谱(HPLC)检测方法的基础上,从某土霉素生产厂污水池底泥中分离能够高效降解土霉素的菌株,建立了土霉素高效降解菌的筛选模型,并进行了降解菌株降解特性的研究。结果表明,分离到的1株能高效降解土霉素的菌株(Oxy2),经初步鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。该菌株最高可降解200 mg/L土霉素,对土霉素降解的最适条件为温度35℃,pH 7.0,土霉素浓度50 mg/L,装液量80 mL。此外,添加不同的碳源或氮源均有利于细菌对土霉素的降解,其中加入5 g/L可溶性淀粉或酵母浸液影响更显著。金属离子对菌株降解土霉素的速率亦有影响,其中添加1 g/L的Fe3+和Zn2+时可提高Oxy2菌株对土霉素的降解率,而Co3+,Pb2+,Cr3+可明显抑制细菌对土霉素的降解率。     

枯草芽孢杆菌pgsA与猪传染性胃肠炎病毒Sa融合基因的原核表达

为利用原核表达方法使猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Sa蛋白表达在细菌的外表面,对克隆载体pMD18-T-pgsA进行KpnⅠ+BamHⅠ双酶切,将所得片段插入表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-pgsA,对克隆载体pMD18-T-Sa和重组质粒pET-pgsA分别进行BamHⅠ+HindⅢ双酶切,将Sa片段插入pET-pgsA中,构建重组质粒pET-pgsA-Sa。重组质粒pET-pgsA-Sa经PCR和序列鉴定为阳性后,转化入宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,在70ku处出现了与预期大小相符的目的条带。Western-blot试验证实,融合基因pgsA-Sa获得了正确表达,具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验证实融合蛋白在大肠杆菌表面获得了表达。结果表明,成功实现了TGEV Sa蛋白在细菌外表面的正确表达,初步鉴定其具有良好的反应原性。本研究为跨膜表达体系的建立和新型口服基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

禽霍乱双型原生质体融合株的筛选及其免疫原性研究

以抗链霉素、对卡那霉素敏感的禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９株（血清型为８Ａ）和抗卡那霉素、对链霉素敏感的Ｃ４８－１株（血清型为５Ａ）为亲本，在脱氧核糖核酸酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）始终存在的条件下，以聚乙二醇（ＰＥＧ，分子量６０００）为助融剂，进行原生质体融合，然后在高渗琼脂平板上再生细胞壁，再转种于含卡那霉素和链霉素的双抗培养基上检出融合株。对筛选获得的２个融合株（简称为Ｆ２和Ｆ６）进一步研究表明，其在形态、染色特性、生化反应和毒力等方面均符合禽源多杀性巴氏杆菌的特性。通过血清型鉴定和双抗药性试验证明两亲本株菌细胞确已发生了原生质体融合和染色体重组，经反复继代培养证明融合株表型稳定。用Ｆ２制备的灭能苗免疫小白鼠，１４ｄ后攻毒，对两型标准强毒菌混合培养物１个ＭＬＤ保护率为１００％，１０个ＭＬＤ保护率为８０％。     

山羊干酪样淋巴结炎的调查及病原鉴定

云南省保山地区的山羊普遍流行以体表淋巴结肿胀、化脓为主要特征的传染病。经对该地区４县１市的３３群山羊调查，感染率为７％～４０％，且有日益增多的趋势；从采集的病料中共分得１３株伪结核棒状杆菌，并对病原菌的形态、培养、生化特性进行了鉴定；用纯培养的菌株进行了药敏及致病力试验。     

小鸭传染性浆膜炎的流行病学调查

确诊了近年来在琼海县雏鸭中流行的一种以气喘、拉稀、足软并伴发神经症状为特征的疫病为小鸭传染性浆膜炎,其病原为鸭疫巴氏杆菌。本病传染快,死亡率为3％～65％。选用庆大霉素、红霉素治疗控制了疫情。