土霉素降解菌的筛选及其降解特性研究

为了获得对土霉素具有降解活性的细菌,在建立无机盐培养基中土霉素含量的高效液相色谱(HPLC)检测方法的基础上,从某土霉素生产厂污水池底泥中分离能够高效降解土霉素的菌株,建立了土霉素高效降解菌的筛选模型,并进行了降解菌株降解特性的研究。结果表明,分离到的1株能高效降解土霉素的菌株(Oxy2),经初步鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。该菌株最高可降解200 mg/L土霉素,对土霉素降解的最适条件为温度35℃,pH 7.0,土霉素浓度50 mg/L,装液量80 mL。此外,添加不同的碳源或氮源均有利于细菌对土霉素的降解,其中加入5 g/L可溶性淀粉或酵母浸液影响更显著。金属离子对菌株降解土霉素的速率亦有影响,其中添加1 g/L的Fe3+和Zn2+时可提高Oxy2菌株对土霉素的降解率,而Co3+,Pb2+,Cr3+可明显抑制细菌对土霉素的降解率。     

枯草芽孢杆菌pgsA与猪传染性胃肠炎病毒Sa融合基因的原核表达

为利用原核表达方法使猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Sa蛋白表达在细菌的外表面,对克隆载体pMD18-T-pgsA进行KpnⅠ+BamHⅠ双酶切,将所得片段插入表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-pgsA,对克隆载体pMD18-T-Sa和重组质粒pET-pgsA分别进行BamHⅠ+HindⅢ双酶切,将Sa片段插入pET-pgsA中,构建重组质粒pET-pgsA-Sa。重组质粒pET-pgsA-Sa经PCR和序列鉴定为阳性后,转化入宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,在70ku处出现了与预期大小相符的目的条带。Western-blot试验证实,融合基因pgsA-Sa获得了正确表达,具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验证实融合蛋白在大肠杆菌表面获得了表达。结果表明,成功实现了TGEV Sa蛋白在细菌外表面的正确表达,初步鉴定其具有良好的反应原性。本研究为跨膜表达体系的建立和新型口服基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

禽霍乱双型原生质体融合株的筛选及其免疫原性研究

以抗链霉素、对卡那霉素敏感的禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９株（血清型为８Ａ）和抗卡那霉素、对链霉素敏感的Ｃ４８－１株（血清型为５Ａ）为亲本，在脱氧核糖核酸酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）始终存在的条件下，以聚乙二醇（ＰＥＧ，分子量６０００）为助融剂，进行原生质体融合，然后在高渗琼脂平板上再生细胞壁，再转种于含卡那霉素和链霉素的双抗培养基上检出融合株。对筛选获得的２个融合株（简称为Ｆ２和Ｆ６）进一步研究表明，其在形态、染色特性、生化反应和毒力等方面均符合禽源多杀性巴氏杆菌的特性。通过血清型鉴定和双抗药性试验证明两亲本株菌细胞确已发生了原生质体融合和染色体重组，经反复继代培养证明融合株表型稳定。用Ｆ２制备的灭能苗免疫小白鼠，１４ｄ后攻毒，对两型标准强毒菌混合培养物１个ＭＬＤ保护率为１００％，１０个ＭＬＤ保护率为８０％。     

山羊干酪样淋巴结炎的调查及病原鉴定

云南省保山地区的山羊普遍流行以体表淋巴结肿胀、化脓为主要特征的传染病。经对该地区４县１市的３３群山羊调查，感染率为７％～４０％，且有日益增多的趋势；从采集的病料中共分得１３株伪结核棒状杆菌，并对病原菌的形态、培养、生化特性进行了鉴定；用纯培养的菌株进行了药敏及致病力试验。     

小鸭传染性浆膜炎的流行病学调查

确诊了近年来在琼海县雏鸭中流行的一种以气喘、拉稀、足软并伴发神经症状为特征的疫病为小鸭传染性浆膜炎,其病原为鸭疫巴氏杆菌。本病传染快,死亡率为3％～65％。选用庆大霉素、红霉素治疗控制了疫情。     

兔瘟巴氏杆菌波氏杆菌三联苗的研制

介绍了兔瘟（ＲＨＤ）、巴氏杆菌（Ｐｍ）、波氏杆菌（Ｂｂ）三联苗的生产工艺和免疫效果。试验兔用该苗１ｍＬ免疫后，在５，７，１２０，１９５ｄ均能抵抗致死量兔瘟强毒的攻击，保护率为１００％；对巴氏杆菌和波氏杆菌，免疫后１０ｄ能产生较强的免疫力，近期保护率分别为８３．３％和８７．９％，免疫后１９５ｄ保护率分别为７２．７％和７６．９％。该苗有效保存期在宁夏银川的室温阴凉处（６～２２℃）为１８０ｄ，在０～８℃冰箱为３６５ｄ。经野外免疫３０００多只家兔表明，该苗安全可靠，在免疫后７～１８０ｄ内能有效控制这３种传染病。     

从病死猪肺中检出1株有致病力的放线杆菌

从1例由猪链球菌Ⅱ型引起的人、猪共患传染性疾病病死猪肺中,同时分离出1株液化明胶的猪放线杆菌.经动物试验证明,该菌亦具有一定的毒力,在猪的混合感染试验中使猪死亡加速,椎测该菌在此次猪的疾病发生过程中起协同作用.     

炭疽信件的物证检验

作者对炭疽信件恐怖袭击有关物证鉴定问题进行了探讨,包括炭疽信件上的微生物物证检验和传统物证检验,污染的消除和人员防护等重要问题.     

胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选

利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了初步筛选.将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合,分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21(DE3)的全菌及全菌裂解物进行吸附,用ELISA方法检测吸附效果,经吸附后血清D450nm分别由原来的0.927和0.239降低为0.196和0.078.同时,将APP1基因组DNA以Bsp143 Ⅰ进行酶切,回收500～2000 bp的片段,与pET30a/b/c载体连接,构建了APP1基因组质粒表达文库,库容量(CFU)为2.0×105.用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库,从3 000个菌落中获得了12个阳性克隆.     

亚成体大熊猫细菌性败血病病因及病性研究

对１只死亡的亚成体大熊猫的临床剖检、病理组织学观察及微生物学检验，表明该大熊猫是因大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏杆菌混合感染致死。２种菌对小白鼠的半数致死量分别为２．７６×１０８和４．０５×１０８个菌。其中大肠埃希氏菌的免疫原性较低。死亡大熊猫甲状腺功能低下。