水泡性口炎病毒N基因的克隆及其PCR检测方法的建立

根据国外发表的水泡性口炎病毒 (VSV)基因组核苷酸序列 ,设计了 2对特异性引物 ,通过RT PCR方法得到N基因。将此基因与 pGEM TEasyVector相连 ,通过蓝白斑筛选出阳性克隆 ,碱裂解法小剂量提取质粒。经测定 ,N基因与参考序列同源性高达 99%。同时根据克隆产物进行亚克隆 ,建立了VSV的PCR检测方法。     

鹅细小病毒NS2基因以及VP1与VP3非重叠序列基因的真核表达

采用pBlueBacHis2A系统筛选鹅细小病毒(GPV)的检测抗原,利用PCR扩增和双酶切方法分别构建了含有NS2基因和VP1与VP3非重复序列基因的重组质粒pBlueBacHis2A-GPV-NS2、pBlueBa-cHis2A-GPV-VP(1-3),分别转染sf9细胞,得到重组病毒,分别表达出了54 ku的NS2融合蛋白和24 ku的VP(1-3)融合蛋白。Western-blotting和Dot-ELISA检测结果证实,表达产物具有特异性;间接免疫荧光试验证实,重组蛋白在细胞中获得了表达。     

聚合酶链反应在猪伪狂犬病临床诊断中的应用

应用ＰＣＲ技术对２４个猪场送检的３１４头新生仔猪和断奶仔猪病料进行伪狂犬病病毒ＤＮＡ片段检测，检出阳性猪场２１个，占受检猪场的８８．０％；检出阳性病料１５２头份，阳性率为４８．４％。另对怀疑为伪狂犬病的１５９头猪鼻拭子样品进行检测，检出阳性猪１２０头，阳性率达７５．０％。     

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒（ＯｖＬＶ）的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散（ＡＧＩＤ）试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原（如ｐ２５）的抗体（外线）、出现对病毒包膜糖蛋白（ｇｐ１３５）的抗体（内线），同时出现对ｐ２５和ｇｐ１３５二者的抗体（双线）互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶＮＸＪ５５，ＮＸＪ７３和ＮＸＪ０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值依次为１×１０－５．６，１×１０－５．４和１×１０－４．５。剖检的６例均有淋巴细胞性乳腺炎，其中２例同时有淋巴滤泡形成，病变率为１００％。肺无淋巴细胞性间质性肺炎病变，２例肺内有淋巴滤泡形成。脑、滑膜无ＯｖＬＶ感染的特异性病变。所有试验羊未发生任何与ＯｖＬＶ感染有关的临床症状。结果表明，乳腺是对ＯｖＬＶ最敏感的靶器官，ＯｖＬＶ北疆株为弱毒株，新疆美利奴羊是对ＯｖＬＶ的低敏性品种。     

猪脑心肌炎病毒P1和P12A3C基因重组腺病毒的构建及其在小鼠体内的免疫应答

为研制脑心肌炎病毒(EMCV)新型活载体疫苗,首先将病毒核衣壳前体多肽P1与P12A3C串联基因分别插入穿梭质粒pDC316中,构建得到了重组穿梭质粒pDC316-P1和pDC316-P12A3C。将其分别与辅助质粒pBHGloxΔE1、3Cre共转染293细胞,成功包装出重组腺病毒Ad-P1和Ad-P12A3C。免疫过氧化物酶单层试验确证,重组腺病毒可表达目的蛋白。分1次和2次肌肉注射免疫小鼠,然后通过间接ELISA试验和中和试验评价其诱导的特异性体液免疫水平。结果,Ad-P1诱导的VP1特异总抗体IgG水平显著高于Ad-P12A3C,但不能检测到明显的中和抗体(<1∶8);Ad-P12A3C能诱导产生良好的中和抗体(1∶32~1∶128),用1×108TCID50剂量EMCV BJC3株攻毒,Ad-P12A3C免疫组能获得100%的保护,而Ad-P1免疫组仅能获得部分保护。以上结果表明,Ad-P12A3C可作为良好的EMCV腺病毒活载体疫苗。     

2007年广东婚姻登记面面观——猪年全省仍有近150万人结婚

广东人择日结婚趋向科学、理性 去年是猪年，受传统观念的影响，不少群众相信猪年没有春、“2007年是寡妇年、不宜结婚”的说法，一时令2006年底登记结婚人数暴增。然而，2007年，绝大多数适龄结婚的新人都十分理性，勇于冲破传统观念，挑选适合自己的心水日子结婚。据统计,猪年全省结婚登记人数近150万人，比2006年只减少4．7％。     

猪IFN-α1基因的原核表达及其蛋白质结构的预测

利用RT-PCR技术,从被诱导的猪外周血单核细胞中克隆出了猪α1干扰素(IFN-α1)基因.序列分析表明,克隆的猪IFN-α1基因序列与GenBank上登录的猪IFN-α1基因的同源性为97.8%.用克隆的猪IFN-α1基因构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-IFN-α1.探讨了猪IFN-α1.基因表达的最佳条件,并在大肠杆菌中对此基因进行了表达.结果表明,IPTG的最佳诱导浓度为0.5 mmol/L,最适诱导温度为42℃,诱导9h表达量最大,表达产物约占菌体总蛋白的30%.SDS-PAGE分析表明,表达产物的分子质量为45 ku,且目的蛋白主要以包涵体的形式存在.经预测,猪IFN-α1蛋白为一结构松散的球状蛋白.     

猪生殖与呼吸综合征病毒的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR检测

根据猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白基因核酸序列设计引物,经BLAST比较发现,该引物既可以扩增较早发现的PRRSV毒株,也可以扩增近期发现的在Nsp2基因上有较大变异的PRRSV毒株,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为标准品建立了检测PRRSV的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR方法.结果表明,该方法标准曲线的相关系数大于0.99,敏感性可以达到1×101拷贝/μL,约为普通PCR的100倍;用该方法检测人工感染PRRSV的猪全血,结果阳性检出率为100%.敏感性、特异性和稳定性试验表明,该方法具有很高的敏感性、特异性和稳定性,可以用来快速检测PRRSV.     

H5N1禽流感：SRAS后的恐惧

两年前“非典”疫情蔓延,夺命无数,令亚洲地区人民谈之色变。而今天,一场比“非典”威胁更大的疫情随时可能暴发,这就是被称为 H5N的禽流感病毒。自2003年该病毒首次现身亚洲以来,已经累计造成60多人死亡,160多人受到感染,1.4亿只家禽被杀死,范围波及亚州、欧洲和非洲在内的许多地区。如何预防禽流感1.要保持乐观科学的心态,注意锻炼身体,多     

猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列表达载体的构建及其转录水平的检测

构建猪肌生成抑制素 (MSTN)成熟蛋白编码序列的克隆与表达载体 ,并对mRNA进行转录水平的检测 ,为获得较好的猪肌生成抑制素抗原、制备抗体打下良好的基础。猪MSTN基因的cDNA去除信号肽后 ,用PCR扩增的 1.2kb目的片段与 pMD18 T载体连接 ,将克隆载体的质粒DNA与同样用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶酶解的表达载体 pET2 8a(+ )质粒定向连接 ,对筛选出的阳性克隆用酶切及测序法鉴定。对猪MSTN基因成熟蛋白编码序列进行反转录 ,对mRNANorthern杂交进行转录水平的检测。结果 ,所得到的序列与所设计的序列完全一致 ,表明成功地进行了猪MSTN基因编码序列的克隆及筛选 ;目的片段定向插入 ,阅读框架正确 ;RT PCR成功地反转录得到约 1.2kb的目的DNA片段 ,Northern杂交后对mRNA印迹放射自显影 ,见到清晰的 1.2kb特异带