显微分光光度计测量肝糖原、肝葡萄糖—6—磷酸酶的含量变化与死亡时间关系的研究

肝糖原是肝脏重要的内含物之一,正常情况下其含量相对稳定,约占肝重量的5～6％。据研究,机体死亡后,其分介代谢过程是与死亡的时间密切相关的。但是,死亡后肝糖原如何分解代谢?其分解速度如何?量的变化如何?与死亡时间有何相     

BAT在非离子型造影剂过敏反应中的诊断价值

目的通过测定免疫正常人、β-内酰胺类药物过敏者以及非离子型造影剂过敏者血液中CD63、肥大细胞羧肽酶A3(MC-CPA3)、人末端补体复合物SC5b-9,探讨嗜碱性粒细胞活化试验(basophil activation test,BAT)在非离子型造影剂过敏反应中的诊断价值。方法采用流式细胞术测定全血中嗜碱性粒细胞CD63表达率。采用ELISA法测定血清中MC-CPA3、血浆中SC5b-9含量。结果非离子型造影剂和β-内酰胺类药物过敏者血液中嗜碱性粒细胞CD63表达率、MC-CPA3以及SC5b-9含量均较免疫正常人升高(P0.05)。结论非离子型造影剂过敏者血液中嗜碱性粒细胞和肥大细胞发生活化,补体系统的激活也参与了非离子型造影剂过敏反应的发生。流式细胞术分析BAT可作为非离子型造影剂过敏反应的诊断方法。     

长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA的克隆与原核表达及其表达产物的酶活性分析

通过对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,得到了长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA序列。利用生物信息学方法对该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析,同时构建了系统发育树。采用PCR方法扩增目的基因完整的开放阅读框,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Wes-tern-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性,同时进行体外酶活性分析。结果表明,成功获得了长角血蜱酸性磷酸酶全长序列,体外高效诱导表达了约67.0 ku的重组蛋白。Western-blot表明该蛋白具有很强的反应原性,且在pH5.0时,该酶水解对硝基苯磷酸二钠的能力最强。     

日本血吸虫钙调神经磷酸酶B基因的克隆表达及表达产物的免疫保护效果的评估

为掌握日本血吸虫钙调神经磷酸酶B亚基(CNB)特性并评估其作为候选疫苗分子的潜力,采用PCR方法扩增日本血吸虫CNB基因,构建重组质粒pET-28a(+)-CNB,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用His-Bind亲和层析纯化获得重组蛋白rCNB。Western-blot结果显示,rCNB能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有较好的免疫原性。免疫组织化学分析表明,CNB主要分布在日本血吸虫虫体的睾丸、卵巢等生殖器官中,在表膜中也有少量分布。用重组蛋白rCNB结合ISA206佐剂免疫BALB/c小鼠,结果 rCNB诱导小鼠产生了27.93%(P0.05)的减虫率和42.93%(P0.01)的肝减卵率。结果表明,日本血吸虫CNB具有一定的免疫保护效果,为深入研究日本血吸虫钙调神经磷酸酶的生物学功能奠定了基础。     

芪归糖痛宁颗粒对大鼠糖尿病周围神经病变的影响

目的 观察芪归糖痛宁颗粒对大鼠糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)的疗效，并探讨其作用机制。方法 以链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)一次性腹腔注射复制DPN大鼠模型。于模型复制第3天起，各治疗组分别灌胃给予相应的受试药物，正常组和模型组灌胃给予等容量溶媒，疗程8周。实验结束后，测定大鼠热痛阈值、血液流变学指标、血清神经生长因子(nerve growth factor, NGF)、髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein, MBP)的含量，同时取固定部位坐骨神经，用苏木精 伊红染色观察坐骨神经组织病理学变化。结果 与模型组比较，芪归糖痛宁颗粒组能明显改善DPN大鼠坐骨神经病理组织学损伤程度，同时降低大鼠热痛阈（P＜0.05），降低大鼠全血黏度低切、中切、高切，血浆黏度，红细胞聚集指数及MBP含量（P＜0.05，或P＜0.01），升高血清NGF含量（P<0.05）。结论 芪归糖痛宁颗粒对大鼠DPN具有一定的治疗作用。     

60例强直性脊柱炎患者血清骨钙蛋白和抗酒石酸酸性磷酸酶变化及其相关性分析

［摘要］目的 观察60例强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)患者血清骨钙蛋白（bone gla protein, BGP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase, TRACP）的变化并进行相关性分析。方法 将60例强直性脊柱炎患者列为实验组,另设30例正常健康人为对照组,观察两组BGP、TRACP的变化,并分析其与年龄、病程、视觉模拟评分（visual analog scale，VAS）、Bath强直性脊柱炎活动指数（Bath ankylosing spondylitis disease active index，BASDAI）、Bath强直性脊柱炎功能指数（Bath ankylosing spondylitis functional index，BASFI）、Bath强直性脊柱炎整体指数（Bath ankylosing spondylitis global index，BAS-G）、情绪和血沉（erythrocyte sedimentation rate, ESR）、超敏C反应蛋白（high sensitivity C-reactive protein, hs CRP）、α酸性糖蛋白（α-AGP）、调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）、中医证候积分的相关性；同时观察实验组在不同疾病活动状态下BGP、TRACP的变化情况。结果 ①与对照组比较,实验组TRACP水平显著升高,BGP水平显著降低（P<0.05，或P<0.01）；②按病情活动性分组,BASDAI>4组的TRACP水平显著高于BASDAI≤4组,而BGP水平显著低于BASDAI≤4组（P<0.01）。③pearson相关性分析表明,AS患者血清BGP水平与年龄、病程、VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G、ESR、CRP和中医证候积分呈负相关性（P<0.05，或P<0.01）,与CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+CD127-Treg百分比呈正相关性（P<0.05，或P<0.01）；AS患者血清TRACP水平与年龄、病程、VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G、ESR、CRP和中医证候积分呈正相关性（P<0.05，或P<0.01）,与CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+CD127-Treg百分比呈负相关性（P<0.05，或P<0.01）。结论 AS患者BGP显著降低，TRACP显著升高，并与其年龄、病程、临床症状体征、疾病活动、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+CD127-Treg百分比密切相关，提示AS患者骨代谢表现为骨形成减少、骨吸收增加，且受到年龄、病程、免疫炎症反应、疾病活动影响，从而出现一系列临床症状和体征。     

芪丹通脉片对犬慢性心肌缺血预防作用及其机制

目的 观察芪丹通脉片对犬慢性心肌缺血的预防作用,探讨其作用机制.方法 将20只犬随机分为正常对照组,模型组,芪丹通脉片低、高剂量组,以注射异丙肾上腺素诱导心肌缺血模型;观察并比较各组犬心电图ST段变化(△ST),及心肌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达水平.结果 正常对照组未见ST段抬高及VEGF和bFGF表达;模型组可见ST段抬高及VEGF和bFGF表达;与模型组比较,芪丹通脉片低、高剂量组AST值显著降低(P<0.05),VEGF、bFGF表达水平显著升高(P<0.05);与芪丹通脉片低剂量组比较,芪丹通脉片高剂量组△ST值有下降趋势,及VEGF、bFGF表达水平有升高趋势,但差异无显著性(P>0.05).结论 芪丹通脉片能够预防慢性心肌缺血,促进心肌VEGF、bFGF表达可能是其作用机制.