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101.
猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立及临床应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立直接检测可疑病料中胸膜肺炎放线杆菌(APP)的PCR诊断方法,对用以扩增apxⅣA毒力基因3′端长约442 bp的核苷酸片段的引物、模板、TaqDNA聚合酶、dNTPs的最适剂量及退火温度进行了优化筛选,并进行了特异性及重复性试验;以筛选出的优化条件,对临床可疑病料进行了PCR检测。结果,在25μL体系中,以5 pmol/μL引物、0.25μLTaqDNA聚合酶、2 mmol/L dNTPs、56℃退火温度对APP标准菌株apxⅣA毒力基因的扩增效果最好,重复性和稳定性高;而对类症菌株的扩增结果则为阴性,表明其特异性强。对分离到APP的病料PCR阳性率为100%(5/5);未分离到APP的纤维渗出性病料中,新鲜与陈旧病料PCR阳性率分别为70.59%(12/17)、50.00%(4/8),而非纤维渗出性病料的PCR结果均为阴性(0/45、0/9)。结果表明,建立的PCR方法特异、快速、稳定、敏感,优于细菌学方法,它可作为APP可疑病料的理想诊断方法。 相似文献
102.
《中共乐山市委党校学报》2006,(5):F0002-F0002
金口大峡谷西起乌斯河,东至金口河,长26km,峡谷出口处河谷最低海拔约600m,峡谷北岸大瓦山海拔3222m,最大谷深达2600m,极其雄伟壮观;与长江三峡比较,大渡河金口大峡谷的深度要大将近一倍,而且连续完整的峡谷长度和险峻壮丽程度均超过三峡。两岸奇峰突起,绝壁千仞,形如飞禽走兽,千姿百态,栩栩如生,山间分布着不同层次的植物、森林,林中奔跑着各类野生动物,构成一幅山环水绕、山水同天的迷人景象。除大渡河主峡谷外,大渡河两侧还有丁木沟、白熊沟、老昌沟、深溪沟等一系列支沟峡谷,呈现深不见底、窄如刀缝、绝壁深涧一线天的奇景,这些支沟内已发现多处产优质观赏水晶的水晶洞,是寻奇探幽的胜地。在海拔3222米的大瓦山,四周被绝壁围绕,形成山顶平坦四周凌空的平顶高山。远远望去大瓦山更象一座空中楼阁或者是航行于茫茫林海的巨轮。它四周绝壁高差达到1200米,山顶平台面积达到1.6平方公里,源于山顶的两条小河从东南面的悬崖上飞泻而下,形成落差达1000米瀑布。大瓦山由二叠纪火山喷发的玄武岩构成,地质结构与蛾眉山、瓦屋山相同,因而被称为“蜀中三绝”。但大瓦山与峨眉山、瓦屋山相比在地貌景观上更为奇特。在大瓦山顶,南可俯瞰气象万千、雄险如削的金口大峡谷;北可遥望蛾眉山金顶,聆听那悠远的钟声;西可极目蜀山之王贡嘎山如玉的雪峰。朝晖落霞,云海雾涛,极尽天地自然之大观。五彩天池碧波轻舟如诗如画。 相似文献
103.
104.
将350只1日龄AA雏鸡随机分为对照组和A、B、C、D四个处理组,分别在常规全价饲料中添加10、20、30和40 g/kg的苦豆籽粕。分别于7、14、21、28、35、42和49日龄随机抽取各组鸡10只剖杀后,采用平板计数法测定鸡盲肠内的双歧杆菌数量。结果,在7、14、21、28、35、42和49日龄,处理B组每1 g盲肠内容物含双歧杆菌的对数值在5个组中均为最高,分别比对照组提高了18.10%、7.06%、10.40%、5.28%、4.95%、0.34%和7.75%,其中在7日龄时差异极显著(P<0.01),在21日龄时差异显著(P<0.05),而在其他日龄差异均不显著。表明在AA肉鸡基础日粮中,添加浓度为20 g/kg的苦豆籽粕可以增殖盲肠中的双歧杆菌数,改善肠道微生物菌群结构。 相似文献
105.
H5N1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达及其产物的免疫原性 总被引:3,自引:0,他引:3
将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)株的NA基因及LacZ报告基因克隆到禽痘病毒载体pSY681中,构建重组转移载体pSY(NA+LacZ),将其转染鸡胚成纤维细胞,经蓝白斑筛选,纯化表达NA基因的重组禽痘病毒rFPV-NA,用其免疫SPF鸡,检测该重组禽痘病毒的免疫原性。结果显示,该重组禽痘病毒能够在体外培养细胞内表达具有生物学活性的NA蛋白,表达产物的分子质量约为55 ku;用该重组禽痘病毒免疫SPF鸡后,能够使免疫鸡获得对H5N1和H7N1两种亚型HPAIV攻击的部分保护。表明,重组禽痘病毒rFPV-NA具有良好的免疫原性。 相似文献
106.
为探索多杀性巴氏杆菌的致病机理,采用PCR方法分别扩增了家兔源和禽源多杀性巴氏杆菌C51-17、Pm898、Pm8916、Pm901、Pm9616、PmZM、PmQin菌株的prfA基因,并对其进行序列分析。将C51-17株的prfA基因克隆到质粒pET30a中,将重组表达载体pET30a-prfA转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,这7株菌株与GenBank登录的3株多杀性巴氏杆菌之间prfA基因在核苷酸水平上的同源性为95.6%~100%,在氨基酸水平上的同源性为98.9%~100%。诱导表达的重组蛋白PrfA的分子质量约为45.6ku,与预期的大小一致,以可溶性形式表达。重组蛋白PrfA可与家兔抗多杀性巴氏杆菌阳性血清反应,具有良好的反应原性。 相似文献
107.
108.
为了修订行业标准《猪巴氏杆菌病诊断技术》(NY/T 564-2002),改进多杀性巴氏杆菌荚膜定群方法,制备了多杀性巴氏杆菌分群抗血清,并建立了多重PCR,对53株菌同时用血凝方法及多重PCR进行定群。经正向间接血凝试验测定,制备的各型血清仅与对应型抗原发生凝集反应,表明血清具有较高的特异性,可作为多杀性巴氏杆菌的荚膜定群抗血清。53株多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Carter氏间接血细胞凝集试验结果相一致。结果表明,可将多重PCR增添至行业标准中,用其代替原有血清学方法进行多杀性巴氏杆菌荚膜定群。 相似文献
109.
从2009-2012年多个奶牛场送检的5份以奶牛化脓性炎症为特征的病料中分离出5株细菌,根据其革兰氏染色的形态特征、培养特性、生化特性以及16SrRNA基因序列的BLAST分析,确定分离菌为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),并对分离菌的主要毒力因子基因进行了PCR鉴定和动物试验。结果显示,5株分离菌的16SrRNA基因序列与GenBank中收录的11株牛源化脓隐秘杆菌16SrRNA基因序列的同源性为99%以上。HLJ-1005株分离菌基因组中缺失胶原结合蛋白(CbpA)基因,但包含溶血素(PLO)基因、神经氨酸酶H(NanH)基因和神经氨酸酶P(NanP)基因,且HLJ-1005株分离菌的致病力明显弱于其他4株分离菌。证实,化脓隐秘杆菌的致病力与cbpA基因和nanP基因的存在相关。 相似文献
110.
根据GenBank中的鸭疫里氏杆菌(RA)外膜磷酸盐选择性微孔蛋白(Porin)基因序列设计特异性引物,以血清1、2、6、10、11、13、14和17型RA菌株的基因组DNA为模板均扩增出大小为1 212bp的目的片段,序列比对显示该基因在8种血清型菌株间同源性均大于99.6%。针对保守性最高的357bp片段设计特异性引物,建立了PCR检测方法,对鸭致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、鸭巴氏杆菌及鸭肝炎病毒均未扩增出目的条带,表明该方法具有较高的特异性;敏感性试验显示最小检出量为73.96pg的基因组。应用建立的PCR方法对分离自吉林、河北及北京的8个菌株进行扩增,均在357bp处扩增出清晰的目的条带,与细菌分离鉴定的符合率达100%。本研究为RA的鉴定提供了新方法,为RA外膜微孔蛋白的后续研究提供了理论依据。 相似文献