禽呼肠孤病毒σB基因在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白。首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB。随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB。通过脂质体介导法转化sf9细胞,获得重组杆状病毒rBac-σB。将重组病毒感染sf9细胞,表达重组蛋白。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光(IFA)检测表明,ARVσB蛋白在sf9细胞中成功表达,分子量约为41 ku,并具有良好的生物学活性,为进一步研究ARVσB基因的功能及其基因工程亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

银行是飞禽还是走兽？

近来，不少地方的银行相继调高同城ATM跨行取款手续费，每笔由2元调到4元。 银行真是会打算盘的，转眼就可以让收费翻番。     

中国哲学关于人生之局限性的理论

中国哲学以天人关系的思想模型解释人的生存状态。其中天人＂合一＂的理想状态,以及如何实现这一终极理境成为思想关注的焦点,然而,人的精神发展途径的起点——现实人性的局限性更应该成为研究的对象。以天道为终极标准反显出人的局限性,儒道佛三家各有其独特的标准和系统,通过人性和动物性（儒家道德性修养标准）、道心和人心（道家艺术性超越标准）、明和无明（佛家宗教性解脱标准）指点了人生的局限性。人的动物性是人的自然性存在天然具有的,应该对之有一合理的认识。在礼仪等观念性规范中安排现实生存的途径,指向终极理境,才是真正的精神发展途径。     

民国时期地方政府处理突发事件的应对机制探析——以1930年代陕西霍乱疫情防控为例

20世纪30年代,陕西爆发霍乱疫情。面对此严重突发事件,陕西地方政府采取了一系列措施,包括应急机制,同时还尝试建立有效疾病防控机制,并强对百姓传染病防治和日常生活卫生的宣传等,力图建立防治突发事件的长期机制。从1932年陕西省当局处理霍乱疫情可以看出,地方政府处理突发事件有下列特点：第一,应急措施和长期的防控措施相结合,有效地防止了疫情继续蔓延;第二,全民参与,实行军地联动机制,反应迅速,效率高;第三,卫生医疗条件差、设备落后、资金困难等,导致死亡率高;第四,由于地方政府没有建立突发事件的预警机制,缺乏必要的预见性,则是这场灾难留下的教训。     

张兆江：“益禽”合作社远名扬

在河北唐山遵化112国道党峪西侧有个九沟十八峪的地方，这里方圆几十里山连山，岭连岭，由于景色优美，空气新鲜，加上这里得天独厚的地理位置，当地村民都以发展特种动物养殖为主。     

鹅副粘病毒的分类地位初探

对从病鹅体分离的禽副粘病毒(GPV)YG97株,经红细胞凝集(HA)和红细胞凝集抑制(HI)试验证明,与新城疫病毒(NDV)存在着极大的相关性.参考NDV的3个毒力指标--最小致死量致病鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数(IVPI),对YG97株进行测定,表明其具有与NDV速发型类似的毒力,属强毒力的毒株.应用RT-PCR技术对F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定,并与多株已报道的NDV相应片段进行序列比较,经遗传进化树分析后,初步判定其为禽副粘病毒-Ⅰ型,属基因Ⅶ型NDV.     

副鸡禽杆菌抗原表位的筛选与鉴定

用C型副鸡禽杆菌(Apg)单克隆抗体作为靶标,筛选噬菌体展示随机12肽库,从中获得与之特异性结合的噬菌体克隆,建立了一种筛选副鸡禽杆菌表位的方法.测序结果显示,第3轮筛选后,80%的噬菌体克隆具有氨基酸共同序列Y-P-Q(A)WW,舍有上述共有序列的噬菌体克隆不仅可以与靶抗体特异结合,还可与C型Apg细菌竞争结合靶抗体;将编码YSPHQWWLSGAV的DNA片段插入质粒pFliTrx的多克隆位点,转化E.coli G1826并在鞭毛成功展示;该重组菌能与靶抗体特异结合;用重组菌免疫试验鸡能产生C型Apg细菌的特异性抗体;用C型668株Apg攻毒,免疫接种鸡获得37.5%保护.提示该表位肽用于研制鸡传染性鼻炎疫苗具有广阔的应用前景.     

二重微滴式数字PCR定量检测禽呼肠孤病毒和鸡滑液囊支原体方法的建立

为绝对定量检测禽呼肠孤病毒（avian reovirus,ARV）和鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）,本研究建立了二重微滴式数字PCR(ddPCR)。根据已发表的ARV S1基因和MS的VlhA基因序列保守序列,分别设计了针对S1和VlhA基因的特异引物和探针,通过优化引物和探针的浓度及反应条件后,建立了二重ddPCR定量检测ARV和MS方法,并对建立方法的特异性、敏感性和重复性进行测试。结果显示,优化后最佳的引物和探针浓度分别为1.2和0.35μmol/L,最佳退火温度为55℃。特异性检测结果只检出ARV和MS,没有检出其他对照的禽病病原。敏感性检测结果显示,该方法检测ARV及MS重组质粒DNA的检出限分别为微滴数6.3和5.4 copies/μL,检测方法的检出限与单重ddPCR最低检出限相同,敏感性比荧光定量PCR方法高10倍。对3个连续稀释的ARV和MS重组质粒DNA检测结果的变异系数均小于5%,重复性好。对92份病鸡关节囊、喉拭子及肺样品进行检测,二重ddPCR方法检出12份样品呈ARV阳性,9份样品呈MS阳性,其中2份样品呈ARV和MS阳性,A...     

禽霍乱双型原生质体融合株的筛选及其免疫原性研究

以抗链霉素、对卡那霉素敏感的禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９株（血清型为８Ａ）和抗卡那霉素、对链霉素敏感的Ｃ４８－１株（血清型为５Ａ）为亲本，在脱氧核糖核酸酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）始终存在的条件下，以聚乙二醇（ＰＥＧ，分子量６０００）为助融剂，进行原生质体融合，然后在高渗琼脂平板上再生细胞壁，再转种于含卡那霉素和链霉素的双抗培养基上检出融合株。对筛选获得的２个融合株（简称为Ｆ２和Ｆ６）进一步研究表明，其在形态、染色特性、生化反应和毒力等方面均符合禽源多杀性巴氏杆菌的特性。通过血清型鉴定和双抗药性试验证明两亲本株菌细胞确已发生了原生质体融合和染色体重组，经反复继代培养证明融合株表型稳定。用Ｆ２制备的灭能苗免疫小白鼠，１４ｄ后攻毒，对两型标准强毒菌混合培养物１个ＭＬＤ保护率为１００％，１０个ＭＬＤ保护率为８０％。     

禽脑脊髓炎病毒的提纯和电镜观察

将禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）ＶａｎＲｏｅｋｅｌ株、１１４３株和ＮＨ９３７株分别经卵黄囊接种于６日龄ＳＰＦ鸡胚，接毒１０日后解剖鸡胚，收集尿囊液，采集脑、消化道和胰腺，用玻璃匀浆器制备２０％的组织悬液。组织悬液经３次冻融充分破坏细胞，释放病毒，然后以４００Ｏｒ／ｍｉｎ离心２０分钟，１００００ｒ／ｍｉｎ离心４０分钟。上清液经浓缩后轻轻加入已含２ｍｌＣｓＣｌ不连续密度梯度的５ｍｌ离心管内，再以４５０００ｒ／ｍｉｎｌ２℃离心２小时，在ＣｓＣｌ连续密度梯度内取出含ＡＥＶ的组分后经对蒸馏水透析除去ＣｓＣｌ，对聚乙二醇－６０００透析浓缩。病毒样本经１％磷钨酸负染后用透射电镜观察见到典型的ＡＥＶ粒子。