猫细小病毒和猫疱疹病毒1型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立同时检测猫细小病毒（FPV）和猫疱疹病毒1型（FHV-1）的双重荧光定量PCR方法,针对FPV的VP2基因、FHV-1的UL21基因设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了双重荧光定量PCR方法,并绘制了标准曲线,其相关系数（R2）均为0.999,具有良好的线性关系。结果显示,FPV、FHV-1最低检测限分别为4.87和2.21 copies/μL;对猫的常见病毒及细菌均无非特异反应;批内、批间试验的变异系数均小于2%。证明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好。用建立的方法对178份样本进行检测,结果,FPV和FHV-1的阳性检出率分别为73.65%和16.85%,二者混感阳性率为15.73%,与临床确诊结果一致。上述结果表明,本研究建立的方法可用于FPV、FHV-1感染的早期诊断、定量检测和流行病学调查等。     

猪源牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定

从福建省某猪场疑似猪瘟的发病仔猪采集病料,处理后接种于牛肾细胞(MDBK),分离到1株病毒,并对其进行了系统鉴定.结果显示,病料接种MDBK细胞72 h后产生了明显的细胞病变;该分离毒株可以被牛病毒性腹泻病毒(BVDV)阳性血清中和,中和效价为1:106;该分离毒株对氯仿、乙醚、胰酶、酸敏感,不耐热,56℃30 min...     

鸭肠炎病毒感染鸭肝酵母双杂交cDNA文库的构建

为构建应用于酵母双杂交系统的鸭肠炎病毒(DEV)感染鸭肝cDNA文库,利用Trizol法提取接种DEV GZ株病毒液5 d的鸭肝总RNA,利用cDNA合成试剂盒反转录合成双链cDNA,与pGADT7酵母表达载体连接,转化酵母受体菌Y187,以未经稀释、1∶10和1∶100比例稀释的菌液无菌接种于SD/-Leu缺陷型固体培养基,置于30℃培养3 d,随机挑取生长良好的酵母菌落进行菌落PCR,检测插入片段的大小。结果显示,获得的原始文库克隆总数为1.0×106CFU,随机选取23个克隆进行PCR检测,插入片段长度集中在0.5～1 kb之间。结果表明,构建的cDNA文库有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。     

番鸭细小病毒MDPV YZ株VP2和VP3蛋白基因的克隆和序列测定

根据国外已发表的番鸭细小病毒(MDPV)FM株基因组核苷酸序列设计了1对引物,应用PCR技术扩增了MDPV YZ株的VP2和VP3蛋白基因片段.将扩增后的VP2和VP3蛋白基因克隆到pCR 3.1 T载体上,MDPV YZ株基因大小为1764 bp,编码528个氨基酸,并对插入片段进行序列测定.测定结果表明,我国分离的MDPV YZ株蛋白基因序列与国外发表的序列的同源性为98.5%.     

藏獒源犬细小病毒的分离鉴定

为弄清犬细小病毒(CPV)在藏獒中的流行情况,将临床上经胶体金试纸检测为阳性的藏獒直肠棉拭子8份处理后接种猫肾传代细胞(F81细胞),分离到6株病毒,对其进行了血凝试验(HA)、半数组织培养物感染剂量(TCID50)的测定,理化性质鉴定,提取分离株DNA并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其一特异性片段和VP2全序列,并与GenBank上登录的CPV毒株进行比对。结果表明,接毒后第6～13天在F81细胞上出现了明显的细胞病变(CPE),表现为细胞融合、变圆或拉长;所得分离株能使猪红细胞发生凝集反应,血凝效价为27～211;能抗酸(pH3)、热(60℃)、200mL/L乙醚、480mL/L氯仿;从细胞培养物中分别扩增出与特异性片段825bp一致以及与VP2全基因1 755bp一致的条带。将扩增的VP2序列与GenBank上登录的HQ883267.1、FJ222823.1、FJ005214.1等10个国内外CPV分离株的VP2序列进行比对;结果显示,与北京地区一分离株(HQ883267.1)的同源性最高,为99.0%～99.6%。所得分离株为不同毒株,但均为CPV-2a型。     

鹅细小病毒在雏鹅体内分布的免疫组织化学检测

采用间接免疫酶组织化学染色法对14日龄雏鹅人工感染鹅细小病毒后不同时间段病毒抗原在体内的定位及分布情况进行了检测,同时应用图像分析软件对免疫组织化学图像中的抗原强度进行了定量分析。结果显示,感染后第1天到第21天,在心、肺、脾、肝、法氏囊、胸腺、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、食管12种组织器官中检测到了病毒抗原。其中感染后第5天的感染组织最广泛,抗原染色强度最高,在检测的组织中以空肠的检出率最高。病毒抗原广泛分布于肠道的上皮细胞、腺上皮细胞,肺泡壁细胞和肾小管的上皮细胞内。始终未能从大脑、胰腺和骨骼肌中检测到鹅细小病毒。可见该病毒感染雏鹅后存在于患病鹅的大部分组织器官内,进一步证实该病毒是一种泛嗜性病毒。     

康复新液保留灌肠预防宫颈癌放疗后放射性肠炎临床研究

目的 观察康复新液保留灌肠预防宫颈癌放射治疗后放射性肠炎的临床疗效。方法 将110例宫颈癌患者按随机数字表法分为对照组和治疗组,每组55例。对照组进行单纯放射治疗,治疗组在放射治疗的同时予康复新液保留灌肠治疗,随访1年,观察和比较两组患者放射性肠炎的发生时间、放射性肠炎分级、严重程度、药物毒性和不良反应。结果 两组放射性肠炎发生时间比较,差异有统计学意义（P<0.05）;两组放射性肠炎分级比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,治疗组放射性肠炎严重程度明显轻于对照组;治疗组毒性及不良反应无明显增加。结论 康复新液保留灌肠能明显推迟宫颈癌放疗后放射性肠炎的发生时间,降低其发生率及严重程度,不增加毒性及不良反应。     

荣心胶囊配合西药治疗急性病毒性心肌炎69例临床观察

目的:观察荣心胶囊配合西医常规综合治疗急性病毒性心肌炎的疗效。方法:将136例患者随机分为两组,治疗组69例,对照组67例。对照组给予以西医常规治疗,治疗组在西医常规治疗基础上加用荣心胶囊,观察两组临床疗效、超声心动检查指标的变化。结果:治疗组总有效率为94.21%,对照组总有效率为80.89%。两组总有效率比较,差异有显著性(P<0.05)。治疗组SV、EF、FS用药前后有明显改善(P<0.05,P<0.01),对照组上述3项指标也有改善(P<0.05),治疗组明显优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:荣心胶囊配合西医常规综合治疗能明显提高急性病毒性心肌炎的临床疗效,并能改善心功能。     

重症病毒性脑炎延误送医致死因果关系鉴定1例

1 案 例 方某,6岁女童,2013年6月26日,参加某夏令营活动。7月23日傍晚,方某因“发热”由夏令营管理人员采取“喝姜汤、捂被子”等措施后高热未退,并出现抽搐伴神志不清等表现．于7月26日凌晨送往某县第二人民医院,治疗数小时后效果不佳,     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白与MDBK细胞互作蛋白的筛选

为了筛选与鉴定牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E2蛋白与MDBK细胞的互作蛋白,以牛病毒性腹泻病毒BA株为模板,通过PCR扩增E2基因,构建重组质粒pFast-E2.将其转化至DH10Bac感受态细胞,再转染sf9昆虫细胞,获得P3代重组杆状病毒,在sf9细胞中表达E2蛋白,应用Western-blot进行鉴定,通过pu...