鹅细小病毒VP2基因原核及真核表达载体的构建

将鹅细小病毒VP2基因克隆到原核表达载体 pPROEX HTb及真核转移载体pFASTBAC HTb中 ,重组真核转移载体在DH10BAC 中经转座作用 ,成功构建了表达VP2基因的原核表达载体pPROEX HTb VP2和杆状病毒表达载体BAC VP2。经限制性内切酶酶切及PCR分析 ,确定为阳性重组子     

“诊疗缺陷”与女孩的“终生缺憾”

2012年6月,安徽省凤阳县人民法院的赵法官来到几年前审理的一起医疗事故案件的当事人家回访。赵法官已经记不清这是自己多少次来到小杨的家里了。病床上,已经恢复了部分行动和语言功能的小杨,静静地看着站在自己床边的法官,又转头看着在向法官诉说的妈妈,目光中,依然有着些许木讷和呆滞。"孩子好多了,真让你们费心了,官司打完了,你们这么些年还一直记挂着",院门外,小杨的父母拉着法官的     

牛病毒性腹泻病毒长春分离株P125基因的克隆与序列测定

以MDBK细胞培养致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NCD毒株,采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,并根据BVDV NADL参考株序列设计合成的1对引物(W1与W2),进行反转录PCR(RT-PCR),扩增出P125基因区约400bp的片段.经pGEM-T载体连接后克隆、测序,并与已发表的NADL、Osloss、SD-1、184、D、H、Yak等BVDV毒株序列进行比较.结果表明NCD株P125基因区无插入或缺失变异,但存在着核苷酸的替换;经聚类分析初步认为NCD株属于Ⅰa型.NCD株与长春184、H株核苷酸序列差异较大,而亲缘关系较近,表明BVDV在同一地区存在不同进化来源的毒株.     

实验性病毒性心肌炎纤维连接蛋白的免疫组化研究

探索轻度病毒性心肌炎的法医病理学诊断方法。以适量coxsackieB3病毒感染Balb/c小鼠 ,造成小鼠轻度病毒性心肌炎 ,对病鼠的心肌进行纤维连接蛋白的LSAB免疫组化染色。结果发现 ,心肌炎鼠心肌组织内Fn大量沉积 ,部分心肌细胞内Fn阳性。Fn -LSAB染色可显示病毒性心肌炎轻度的心肌损害 ,Fn沉积是心肌组织存在炎症性病理变化的可靠标志之一。     

新视野

手机终端取得突破性进展，预计中国经济今年增长9．25％，全球竟争力最新排名，我国成立反洗钱工作管理处，北京大学跻身全球大学第17位……     

鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备

采用差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯鸭肠炎病毒 (DEV)鸭胚成纤维细胞适应毒 ,免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经间接ELISA筛选 ,有限稀释法 3次克隆 ,获得了 2株稳定分泌DEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1B6和 2G8。经鉴定 ,2株单克隆抗体分别为IgM和IgG1 亚类 ,腹水ELISA效价均达到 1∶1 0 7以上。以 2G8单抗腹水为材料 ,采用间接免疫荧光抗体技术对DEV标准毒感染的鸭胚成纤维细胞进行检测 ,结果表明 ,用该抗体可特异性检出接毒后 6h感染细胞中的DEV ,且感染后 4 8h免疫荧光强度最高 ,该单抗与细胞成分和鸭肝炎病毒无交叉反应。将杂交瘤细胞冻存 3和 6个月 ,复苏后仍能稳定分泌单克隆抗体     

兔病毒性出血症病毒血凝作用的扫描电镜观察

扫描电镜下可见到病毒与红细胞表面上的受体物质结合后,迅速与细胞膜成分融合。引起红细胞肿胀、凹面消失,并由盘形变成圆球形。病毒结合部的细胞膜逐渐向外突起,突起部顶端又与其他邻近的红细胞膜结合并使之发生锥状突起。在4℃时形成的突起较短,而在室温、37℃时形成细长的突起。随着反应时间的延长,逐渐变成细长的突起,并且从突起的顶端释放出病毒颗粒。释放病毒后的红细胞表面粗糙呈球形。高浓度病毒与红细胞作用时引起细胞膜相互融合。但血凝抑制反应后的红细胞表面无任何变化。     

犬冠状病毒压力灭活苗的制备与应用研究

使用静水压高压灭活的方法制备犬冠状病毒(CCV)蜂胶佐剂灭活苗,将此灭活苗免疫接种易感犬,同时以CCV甲醛灭活苗作对比试验.结果表明,CCV压力灭活苗安全可靠,其诱导试验犬产生中和抗体的能力明显高于该病毒的甲醛灭活苗,临床应用证明该灭活苗可以控制犬冠状病毒性肠炎的发生与流行.     

猪细小病毒SC-1株VP2基因的定点突变及其对该基因表达的影响

根据GenBank中的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列设计并合成了2对突变引物,对PPV SC-1株VP2基因进行了定点突变.利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建含报告基因EGFP的重组质粒pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B);利用脂质体介导法将上述重组质粒转染COS-7细胞,从而研究该突变对VP2基因表达的影响.结果显示,成功构建了合突变体及EGFP的真核表达载体;在倒置荧光显微镜下,突变后的质粒转染呈现不同的荧光信号,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品与阳性对照相似,荧光信号均匀分布于细胞中.提示,突变的引入是导致表达差异的主要原因.     

胞内劳森菌与猪增生性肠炎的研究进展

概述了致猪增生性肠炎的胞内劳森菌的病原特征,阐述了该病原在分离培养、诊断方法、防控措施以及我国的流行现状等方面的研究进展,包括组织学、免疫学、分子生物学等方面所取得的进展.