阪崎克罗诺杆菌RPA-LF检测方法的建立

以阪崎克罗诺杆菌特异性基因16SrRNA和外膜蛋白基因ompA为靶序列,设计适用于重组酶聚合酶扩增-侧流层析技术(RPA-LF)的引物和探针,并优化反应条件.结果表明,RPA反应可在25～45℃进行,10～20 min即可完成.优化条件后,RPA-LF总反应时间仅为20 min,包括RPA在39℃反应15 min,RP...     

流产布氏杆菌BPE123基因的克隆表达及生物信息学分析

根据GenBank中流产布氏杆菌BPE123基因序列(登录号:NC_006933.1),设计引物,以布氏杆菌病疫苗菌A19全基因组DNA为模板扩增BPE123基因,将目的基因克隆入pEASY-T3载体,测序正确后,双酶切pEASY-T3-BPE123,目的片段BPE123连入pET-32a(+)表达载体,构建表达质粒pET-32a(+)-BPE123,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;对BPE123基因进行生物信息学分析。结果显示,成功构建了重组菌pET-32a(+)-BPE123-BL21(DE3),诱导表达了融合蛋白BPE123。生物信息学分析显示,BPE123基因N端25个氨基酸是其信号肽,与其相互作用的蛋白大都与菌毛相关,它们是flgF、fliI、motA、BruAb2_0155、BruAb2_0121和BruAb2_0125。布氏杆菌属内BPE123基因序列的同源性高达99%。本研究获得了BPE123蛋白并预测了BPE123基因的相关生物学功能,为进一步探索该蛋白的免疫原性和在布氏杆菌胞内寄生过程中的作用奠定了基础。     

日本明治社会疾病意义之考察

进入明治时期以来,近代工业文明给日本带来财富的同时,也导致了贫困与疾病的恶性循环。明治维新与霍乱病的流行密切相关,＂殖产兴业＂的近代化目标直接导致了肺结核的大范围蔓延,日本军代的近代化进程就是与脚气病斗争的历史。明治政府将公共卫生看做是实现＂富国强兵＂的重要手段,对个人身体的管理和改造成为日本实现近代化的基础。     

产毒素多杀巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌在猪萎缩性鼻炎中的流行病学研究

从发生临床型萎缩性鼻炎的7个猪场的319头猪的鼻腔分离多杀巴氏杆菌,其中获得A型20株,内有产毒素株5株,D型85株,内有产毒素株76株。产毒素菌株占总分离株的77.1％(81/105)。各年龄的猪均有产毒素株感染。另从临床型萎缩性鼻炎阴性的3个猪场共95头猪的鼻腔分得A型多杀巴氏杆菌1株和D型12株,后者仅1株产生毒素。从此10个猪场的不同年龄猪的鼻腔均分离到支气管败血波氏杆菌,此菌阳性检出率为47.8％(196/412),其感染率与萎缩性鼻炎的发生率无关。调查结果表明,产毒素多杀巴氏杆菌与临床型萎缩性鼻炎的发生有关,支气管败血波氏杆菌感染有助于产毒素多杀巴氏杆菌在猪鼻腔定居,二者混合感染导致猪发生严重的持续性萎缩性鼻炎。饲养管理不良可以促进产毒素多杀巴氏杆菌的传播,加重疫情的发展。     

产单核细胞李氏杆菌感染鼠的肝细胞凋亡的荧光定量PCR检测

为探讨产单核细胞李氏杆菌感染小鼠的肝细胞凋亡机制及不同毒力菌株引起的肝细胞凋亡的差异,选取毒力差异显著的2株产单核细胞李氏杆菌,建立不同毒力及菌量的小鼠感染模型(A组低剂量攻弱毒、B组半数致死量攻弱毒、C组半数致死量攻强毒、D组过量攻强毒),利用建立的小鼠肝细胞凋亡因子荧光定量PCR方法,检测小鼠肝细胞凋亡途径的重要因子表达量的变化,同时应用TUNEL技术(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)检测凋亡情况。TUNEL结果显示,4组小鼠均存在不同程度的肝细胞凋亡,凋亡程度与细菌毒力呈正相关。荧光定量PCR结果显示,死亡受体途径的重要因子Caspase-3和Caspase-8的变化趋势相似,在4组小鼠表达量变化大体呈现相似的趋势(P0.05),即在感染早期(12h~2d)表达量急剧升高,至峰值后逐渐降低;NF-κB在感染早期升高,且在感染后期也维持在较高的水平;线粒体凋亡途径的重要因子bcl-2、bax组间和组内的变化趋势都不是很明显(P0.05)。表明产单核细胞李氏杆菌介导的肝细胞凋亡存在剂量及毒力依赖性,并主要依赖死亡受体途径,线粒体凋亡途径在这一过程中并不发挥主要作用。     

口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达

为了将口蹄疫病毒(FMDV)中和表位展示在病毒样颗粒(VLP)表面,以猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白为骨架,用FMDV O/Mya-98/2010毒株G-H环替换PCV2自身中和表位,构建嵌合衣壳蛋白CaO。为分泌表达CaO蛋白,在芽胞杆菌穿梭质粒pHCMC05的多克隆位点中顺次插入枯草芽胞杆菌P43启动子和中性蛋白酶B分泌信号肽(nprBsp),构建分泌型大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒p7257-P43。然后将合成的CaO基因插入p7257-P43质粒nprBsp的下游,构建分泌表达质粒p7257-P43-CaO。将该质粒转化枯草芽胞杆菌WB800,氯霉素诱导表达。上清经SDS-PAGE检测,嵌合蛋白CaO在枯草芽胞杆菌中得到表达。Western-blot证实,该蛋白具有反应原性。免疫电镜可观察到直径约15nm±2nm的VLP,表明嵌合蛋白在体外能有效组装。     

禽分枝杆菌副结核亚种map0862基因与map2154c基因的串联重组表达

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因.采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c.将融合基因与原核表达载体pET32a( )连接,构建了重组质粒pET0862-2154c.将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测.结果表明.表达的重组蛋白map0862-2154c的分子质量为76 ku,可用于建立诊断副结核病的ELISA.     

植物源蜡样芽胞杆菌在动物体内的生物效应

对植物源蜡样芽胞杆菌FS株在动物体内的生物效应进行了研究。结果 ,饲喂FS菌液的断奶仔猪粪便中大肠埃希氏菌、肠球菌明显减少 ,而乳酸菌、双歧杆菌增多 ;断奶仔猪饲喂FS菌液 30d ,日增重比对照组增加 33.6 3% ,腹泻发生率比对照组降低 5 7.14 % ;血清总球蛋白提高4 .80 % ,SOD提高 7.70 % ;以FS 0 .2 5亿菌 /mL给小白鼠饮水 4 0d ,脾指数提高 118.98% ;小白鼠安全试验观察 15d ,未出现死亡 ,饲喂断奶仔猪 30d ,未出现不良反应 ,显示FS菌株安全性好。     

解读西方政府信用思想

在西方千年的政治思想史中,对政府信用的探讨一直不绝于耳.西方政府信用思想最早可以追溯到古希腊时期的柏拉图,历经马基雅维里的嬗变,到社会契约论时代获得了较大发展.社会契约论从宏观政治的层面阐释了政府的权力来自于人民的信托,信用是政府存在的道义基础.进入现代后,经济学研究方法渗透到了社会科学的诸多领域,作为新制度经济学的分支,委托代理理论秉承社会契约论的理念,从微观层面对政府信用问题进行了更为细致的探讨,力求找到克服委托代理关系中的信息不对称问题从而防范政府失信的机制.     

产单核细胞李氏杆菌突变株的感染动力学研究

以BALB/c小鼠为实验动物模型,对actA基因和plcB基因双缺失的产单核细胞李氏杆菌(LM)yzuLM1-2菌株进行感染动力学研究。分别用减毒突变株yzuLM1-2和野生型菌株yzuLM4给BALB/c小鼠静脉注射或灌服,并对脏器中LM的分布动态进行测定。结果显示,在显著高于野生型菌株感染剂量的条件下注射或灌服接种后,减毒突变株组小鼠肝和脾中的LM数量迅速下降,被清除的速度显著快于野生型菌株组。溶血素(LLO)抗体的测定结果显示,减毒突变株菌能和野生型菌同样激发较高水平的抗体。小鼠免疫保护试验结果显示,减毒突变株免疫组对同种血清型LM的攻击具有较好的免疫保护力,可达100%。结果表明,yzuLM1-2突变株侵袭力下降,致病力降低,能激发较高水平的抗体产生,可以作为预防动物李氏杆菌病的候选疫苗菌株,并为用作运送外源保护性抗原的载体提供了材料。