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201.
202.
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因的克隆和表达 总被引:9,自引:2,他引:7
以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型25-4株基因组DNA为模板,用PCR扩增外膜蛋白(OMP)基因特异片段,并克隆于pMD 18-T中,经酶切及核苷酸序列分析鉴定后,亚克隆于原核表达载体pGEX-6P-1,成功构建了重组表达载体pGEX-omp;以此转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),经SDS-PAGE鉴定,表达的可溶性融合蛋白分子质量约为61 ku,命名为GST-OMP。以GST亲和层析柱纯化并利用Xa因子酶解,获得切掉标签的OMP。经ELISA检测,该OMP蛋白能够与兔抗APP的阳性血清反应,具有很好的免疫活性。GST-OMP蛋白的成功表达为APPOMP相关分子生物学功能的研制奠定了基础。 相似文献
203.
从炭疽杆菌基因组组成、炭疽杆菌基因组的特征及其在基因检测中的应用几方面阐述了炭疽杆菌基因检测技术的研究进展,探讨了分别位于pXO1和pXO2质粒上的主要致病毒素编码基因pagAl、ef、cya和参与荚膜合成的主要蛋白编码基因capA、capB和capC的作用,认为这些炭疽杆菌特异基因序列是建立基因检测体系的可靠基础,其标志性序列有早期发现的序列指纹图谱、高度保守基因序列和最新发现的高度特异基因序列,基因检测方法从早期的RFLP、VNTR、单重PCR、多重PCR发展到最新的实时定量PCR,随着标志性序列特异性的增加和检测方法的改进,炭疽杆菌的诊断工作变得更加准确和快捷。 相似文献
205.
参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物,通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC 3个基因,获得长约1 137、429、1 146 bp的片段,将其分别克隆到pMD 18-T中,经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子;再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后,转化BL21,在IPTG诱导下获得高效表达,经Western-blotting检测证实,表达产物CpsC有生物学活性,CpsA、CpsB无活性;将3种表达产物等量混合,做10倍递进稀释后,与分离出的猪嗜中性粒细胞作用,37℃5、0 mL/L CO2培养箱中温育4 h后加入底物液,测定D492 nm值。结果表明,App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用。 相似文献
206.
207.
208.
209.
本研究应用λgt11载体系统构建了禽源巴氏杆菌P1059菌株DNA的表达型基因文库。P1059DNA被机械剪切刀随机剪切成2~8kb大小的片段,其内部EcoRⅠ位点被甲基化后再在片段的两端连接上EcoRⅠ“接头”。然后将用EcoRⅠ酶消化的上述片段连接到λgt11载体臂上,在体外包装成重组噬菌体。将重组噬菌体感染大肠杆菌Y1090,用抗P1059高免家兔血清作为第一抗体,酶标羊抗兔IgG作为第二抗体对噬菌斑进行原位筛选。用筛选出来的7个抗原基因阳性克隆株分别溶原化于大肠杆菌Y1089,在IPTG诱导下使溶原菌表达出β半乳糖苷酶——外源性多肽链融合蛋白质。用惠斯顿免疫吸附试验检测从上述7株溶原菌所获得的融合蛋白质,均显示出特异性的抗原抗体反应。用小鼠作进一步的免疫保护试验证明,有一株溶原菌(PaC_1株)的粗制裂解物能使小鼠对P1059强毒菌的攻击具有较强的抵抗力。 相似文献
210.
N.At-Khaled E.Alarcon K.Bissell F.Boillot J.A.Caminero C-Y.Chiang P.Clevenbergh R.Dlodlo D.A.Enarson P.Enarson O.Ferroussier P.I.Fujiwara A.D.Harries E.Heldal S.G.Hinderaker S.J.Kim C.Lienhardt H.L.Rieder I.D.Rusen A.Trebucq A.Van Deun N.Wilson 赖钰基 王雪静 《党史博采》2010,(5)
异烟肼预防性治疗(isoniazid preventive therapy,IPT)是结核病防治规划(NTP)和艾滋病防治规划(NAP)联合行动的一项重要内容,目的是降低艾滋病病毒(HIV)感染者的结核病负担。然而,真正实施IPT的国家却很少。由于这一措施实施的失败,近期提出了称作“3个I“的口号(即实施感染控制(Infection control),预防结核病在卫生服务机构内传播;在艾滋病病毒感染者和艾滋病病人中加强结核病患者的发现IntensifiedTB case finding,和IPT。在本文中,我们首先回顾IPT的背景,然后讨论在HIV感染者中开展IPT面临的主要挑战,包括:实施IPT的责任和义务,发现结核分枝杆菌潜伏感染者,排除活动性结核病患者,预防异烟肼耐药,以及治疗时间和有效保护期。同时,我们也对几个目前尚未解决的、还在研究中的问题给予高度重视。最后,我们对现场如何推广IPT提出了可操作性的建议,包括:将IPT整合在艾滋病的一系列治疗关怀服务包中,遵照哲学上“边做边学“的原理开展实施性研究,制定入选IPT的流程图,制定和实施抗病毒治疗前的关怀服务,以及有关采购、供应、监控与评价等问题。我们支... 相似文献