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42.
43.
荧光标记复合扩增毛细管电泳法在SNP分型中的应用 总被引:3,自引:1,他引:2
目的采用荧光标记复合扩增毛细管电泳法,对辽南地区汉族人群13个SNP进行等位基因频率调查,并评价其法医学应用价值。方法选择13个双等位基因SNP,应用荧光标记片段长度差异等位基因特异性复合扩增SNP分型方法,对辽南地区汉族人群进行群体调查。结果每个SNP纯合子为单一产物峰,杂合子则为长度不同的两个产物峰。不同位点扩增产物长度不同,根据产物长度和产物峰数量进行SNP分型,其结果与直接测序完全一致。同时获得辽南地区汉族人群13个SNP等位基因频率。结论采用荧光标记复合扩增毛细管电泳法进行SNP分型,方法简单实用,在法医学个人识别领域具有较高的应用。 相似文献
44.
为了解重庆市山羊博尔纳病隐性带毒情况,分析博尔纳病病毒(BDV)的种系来源。采用巢式逆转录酶PCR结合荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技术对重庆市60只山羊外周血单核细胞 (PBMCs)及脑组织中的BDV P24基因片段进行了检测,将阳性产物测序,并与国外BDV毒株进行了比较。结果,山羊外周血检测阳性率为8.3%(5/60),脑组织检测阳性率为10%(6/60)。该 BDV P24片段核苷酸序列与马源BDV H1766株同源性最高,达96.51%,与标准株Strain V和 He/80同源性为95.35%,并且编码的氨基酸序列也相同。表明,重庆市山羊中存在动物源性博尔纳病隐性带毒。该BDV P24核苷酸序列与Strain V和He/80株具有高度同源性。 相似文献
45.
PRRSV和PCV-2以及PRV多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立 总被引:5,自引:1,他引:5
根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法.敏感性试验结果显示,PRRSV、PCV-2的敏感性可达250拷贝/μL,PRV的敏感性可达500拷贝/μL.表明,该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性,可以用于PRRSV、PCV-2和PRV的快速检测. 相似文献
46.
47.
为建立肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据肺炎克雷伯菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR。结果显示,该方法与猪肺炎支原体、猪鼻支原体、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌、多杀性巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽胞杆菌、猪丹毒杆菌、奇异变形杆菌和化脓隐秘杆菌共15种细菌无交叉反应;标准品浓度在2.29×109~2.29×104 copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低可检测到2.29×102 copies/μL的标准品阳性质粒;批内和批间变异系数均小于3%。临床样品的检测结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和检测快速的优点,可用于肺炎克雷伯菌感染的早期诊断、样品的快速检测以及肺炎克雷伯菌的定量分析。 相似文献
48.
49.
目的:建立分光光度法测定糖肾康颗粒中总多糖的含量。方法:紫外分光光度法,苯酚.硫酸法。结果:总多糖在1.0658-8.5262范围内呈良好线性关系,r=0.9997。平均回收率为99.14%,RSD为0.98%(n=5)。结论:方法简便准确,重复性好,可作为糖肾康颗粒的含量测定方法。 相似文献
50.
6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析体系的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的为在310基因分析仪上进行6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光STR复合扩增分型建立基础条件。方法以pGEM载体作为靶DNA,设计引物扩增获得500~80bp的13个长度不等DNA片段,以这些片段纯化物作为模板DNA,分别扩增获得6FAM、HEX、TMR和ROX标记的M atrix标准物,用4种M atrix标准物在310基因分析仪上构建可用于6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析的M atrix文件。结果扩增所得的13个非标记片段,长度分别为80、100、120、140、160、180、200、220、260、300、340、400、500bp,在非变性聚丙烯酰胺凝胶连续电泳-银染凝胶上均表现为单条带,6FAM、HEX、TMR、ROX分别标记的片段通过310基因分析仪检测均为单峰。混合ROX标记的80、120、180、220、260、300bp的6个片段获得的内标,显示出良好的线性关系。结论建立了有效的6FAM-HEX-TMR-ROX四色荧光分析M atrix,为进行多个STR基因座荧光标记复合扩增检测奠定了基础。 相似文献