猪圆环病毒2型ORF2与EGFP融合蛋白表达载体的构建及在鸭心肌细胞中的表达

为研究猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因在异源细胞上的表达及生物学特性,构建了PCV2ORF2与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因真核表达载体pEGFP-N1-ORF2。采用脂质体法转染体外培养的鸭心肌细胞后,通过直接荧光观察EGFP-ORF2融合蛋白在鸭心肌细胞中的分布定位,经RT-PCR、间接免疫荧光方法检测ORF2基因在鸭心肌细胞中的表达。结果显示,转染48 h后有绿色荧光出现,RT-PCR和间接免疫荧光法检测均为阳性。证实,PCV2 ORF2基因在鸭心肌细胞内获得了成功表达。     

血栓调节蛋白表达与大鼠脑挫伤时间的相关性

目的观察大鼠实验性脑挫伤后不同时问内脑组织、血浆中血栓调节蛋白（TM）的变化,探讨其与损伤经过时间的关系。方法参照Feeney’S法建立大鼠脑挫伤模型,在伤后1h、4h、8h、12h、24h、3d、7d7个时问点提取心帆及脑组织检材,运用酶联免疫法（ELISA法）检测f血浆TM含量,用免疫组织化学方法检测脑组织中TM刖性表达。检测数据应川SPSS13．0统计软件分析处理。结果与对照组比较,TM的阳性表达、IOD值和血浆含量存挫伤后4h开始增加,至24h达到高峰,随后逐渐减少,伤后3dTM血浆含量仍高于对照组,7d后基本恢复至对照纰水平。伤后4h～3d之间各组与对照组比较均有统计学意义（P〈0．05）。结论脑挫伤后TM表达随时间变化的规律性有助于推断呐损伤时间。     

小反刍兽疫病毒非结构蛋白V基因的克隆及其编码蛋白的结构与功能

采用RT-PCR技术从小反刍兽疫病毒总RNA中扩增到P基因一段896bp序列,克隆至pET-30a(+)载体中,对其进行最大开放阅读框691位定点突变(插入一个G碱基),获得小反刍兽疫病毒V基因,利用生物信息学软件对麻疹病毒属V蛋白氨基酸序列进行比对,同时使用I-TASSER服务器对小反刍兽疫病毒V蛋白三级结构进行同源建模,分析其结构与功能。结果显示,小反刍兽疫病毒V蛋白氨基酸序列与麻疹病毒、犬瘟热病毒、牛瘟病毒和海豹瘟病毒V蛋白的相似性分别为61.1%、56.0%、61.7%和51.7%,三级结构预测显示V蛋白由多α-螺旋的N-端结构域、中间结构域和含锌指结构的C-端结构域组成。本研究成功克隆了小反刍兽疫病毒V基因,预测分析了V蛋白结构和功能的关系,为其分子生物学和功能的进一步研究奠定了基础。     

埃博拉病毒苏丹型核蛋白的原核表达及纯化

将目的基因NP亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中,构建了重组表达载体pET-28(a)-S-NP,然后用重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,并利用IPTG诱导蛋白表达。将表达的蛋白利用His-Band Ni+柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果显示,重组质粒经双酶切后可得到与目的片段长度相同的特异性条带;测序结果显示此特异性条带与参考序列完全匹配,没有突变。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,表达正确。结果表明,成功构建了重组表达质粒,且表达产物正确。     

当前国际安全体系的转型与中国国际安全体系观

国际安全体系是国际体系的重要组成部分,也是其核心内容。它指的是国际体系中的行为体为维护国家安全和国际和平与稳定而相互影响、相互作用,从而形成一个由特定行为规范和运行机制构成的整体。国际安全体系具有相对的稳定性,但也处在动态变化中。     

猪脑心肌炎病毒非结构蛋白2C的原核表达及其反应原性

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)非结构蛋白2C基因设计合成了1对特异性引物,通过RT-PCR扩增得到了2C基因片段.将2C基因定向克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了重组原核表达质粒GEX-6P-2C,并将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经用0.1 mmo1/L IPTG诱导,成功表达了62 ku的目的重组蛋白.Western-b1ot分析表明,表达的2C重组蛋白可以分别被猪源或兔源抗EMCV阳性血清识别;以浓度为0.5μg/mL的重组蛋白包被聚苯乙烯微量反应板,能够特异性地检测到猪抗EMCV抗体.证明表达的EMCV重组非结构蛋白2C具有良好的反应原性,可以替代EMCV全病毒进行安全、特异、敏感的基于重组诊断抗原的猪脑心肌炎血清学检测技术研究.     

肠毒素性大肠杆菌K99-ST1融合基因的克隆及原核表达

为有效预防肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起的犊牛和羔羊腹泻,将PCR扩增获得的ETEC K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段,借助pUCm-T载体,构建了重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得了融合基因K99-ST1;使用EcoR I Sal I双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET-30a中,成功构建了表达载体pET-K99-ST1,将其转入表达茵株BL21(DE3)中,经IPTG诱导,获得31 ku的蛋白;Western-blotring结果显示,该融合蛋白可与K99阳性血清发生特异性反应.     

转发市食品药品监管局等八部门关于开展兴奋剂生产经营专项治理工作意见的通知

<正> 各区、县人民政府,各委、局,各直属单位:市食品药品监管局、市公安局、市通信局、市卫生局、天津海关、市工商局、市体育局和市奥足办《关于开展兴奋剂生产经营专项治理工作的意见》已经市人民政府领导同志同意,现转发给你们,请照此执行。     

大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白降解规律的初探研究

目的探讨大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白（tubulin）的降解规律与死亡时间（PMI）的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克处死后，置于RXZ智能型人工气候箱内，实验条件设定为：20℃恒温，湿度50％。分别于大鼠死后0、1、2、3、5和7d时剖取心肌和肺脏组织，应用Western-Blot法检测心肌和肺脏tubulin的含量，并对所得数据进行统计学分析。结果Tubulin在正常大鼠心肌和肺内高表达，死后1d时其含量已开始下降，至死后7d时仍可检测到微管蛋白的存在，但tubulin在肺脏内的降解速度快于心肌。两种组织内tubulin含量随PMI变化的回归方程及相关系数分别为：心肌Y=-1726．Ix＋14083，r=0．9684；肺脏Y=-1439．89x＋12041，r=0．9808。结论大鼠死后心肌和肺脏tubulin的含量逐渐减少，与PMI具有相关性。     

社会环境与未成年人思想道德建设的互动研究

马克思、恩格斯认为“人创造环境，同样环境也创造人”。未成年人的思想道德建设状况与社会环境的优劣状况密不可分。未成年人的成长与社会环境之间相互影响、相互发展和相互作用。一方面，社会环境决定、影响和制约着未成年人的思想道德素质，未成年人思想道德素质的高低与社会环境的优劣有着密切的关系，良好的社会环境为未成年人思想道德素质的提高提供了保障；另一方面，人具有自主能动性，未成年人综合素质的高低也会反作用于社会环境，未成年人综合素质的全面增强是形成社会环境良好状况的途径之一。