羊口疮病毒B2L截短重组蛋白刺激小鼠产生特异性抗体的研究

为研究羊口疮病毒(ORFV)新型亚单位疫苗,设计了ORFV B2L优势抗原表位截短重组蛋白,命名为HBBH并经原核表达和鉴定.以不同剂量HBBH不加或加不同佐剂,经滴鼻或颈部皮下注射免疫BALB/c小鼠,其中滴鼻共4组(HBBH 10 μg、20 μg、30μg和20 μg+LTB),注射组(HBBH 20 μg+20...     

骆驼科动物中东呼吸综合征冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

通过PCR扩增中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）RBD基因片段,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,转染哺乳动物细胞Expi293F,并利用带有StrepTrap标签的亲和柱纯化制备MERS-CoV RBD蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化后的RBD蛋白。以RBD蛋白为包被抗原,建立骆驼科动物MERS-CoV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,MERS-CoV RBD蛋白在Expi293F细胞中以分泌形式表达,纯化后RBD蛋白纯度大于95%;成功建立了骆驼科动物MERS-CoV抗体间接ELISA检测方法。将其初步应用于骆驼、羊驼血清抗体的检测,检测结果与已知血清结果相符合。基于真核表达纯化的高纯度MERSCoV RBD蛋白,建立了骆驼科动物MERS-CoV抗体间接ELISA检测方法,为骆驼、羊驼等骆驼科动物的MERSCoV疫苗免疫效果评价、疫病监测等相关研究奠定了基础。     

基于非洲猪瘟病毒B119L蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

为了建立一种针对非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体的血清学检测手段,参考ASFV Pig/HLJ/2018株全基因组序列合成非结构蛋白B119L的基因序列,成功构建重组表达质粒pCold-Ⅰ-B119L,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达获得重组蛋白,利用纯化后的B119L重组蛋白作为诊断抗原,建立检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示：原核表达的B119L蛋白的分子质量为14.4 ku,与预期相符;以其为包被抗原建立的间接ELISA检测方法的批间及批内变异系数均小于10%;标准阳性血清的最低检测稀释度为1︰5 120;对ASFV阳性血清具有特异性,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒阳性血清无交叉反应;该间接ELISA方法与商品化试剂盒的符合率为100%。本研究中建立的间接ELISA检测方法特异性、重复性、灵敏度良好,为ASFV的临床检测和流行病学调查提供了依据,对于预防ASFV的感染具有重要作用。     

猫传染性腹膜炎病毒S1蛋白的截短表达及其单克隆抗体的研制

为制备猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）S1蛋白的单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌表达系统截短表达了FIPV S1蛋白（rS1）并进行纯化,以rS1免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合和间接ELISA方法筛选到3株能稳定分泌针对rS1抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2D7、3D8、5G1。抗体亚型鉴定结果表明,2D7、5G1株抗体亚型为Ig G2a,3D8株抗体亚型为Ig G1,轻链均为κappa链;杂交瘤细胞染色体组型鉴定结果显示,3株杂交瘤细胞染色体数分别为102、103、100条,属于杂交瘤染色体组型;小鼠腹水的间接ELISA抗体效价可达1∶204 800。对小鼠腹水进行单克隆抗体纯化和鉴定,Western-blot结果显示,3株单克隆抗体均可与rS1发生特异性反应;IFA结果显示,3株单克隆抗体均能特异性识别细胞中的FIPV。上述结果表明,本研究获得了3株性能良好的抗rS1的单克隆抗体,为后期FIPV的早期诊断以及FIPV生物学功能的研究奠定了重要的物质基础。     

摇晃蛋白对小鼠海马MFS发育影响的双光子显微成像研究

为了掌握小鼠大脑发育过程中摇晃蛋白(reelin)与颗粒细胞苔藓纤维出芽(mossy fiber sprouting,MFS)的关系,通过双光子显微镜扫描转基因小鼠Thy1-GFP和Reln-Thy1-GFP的脑片,观察位于海马分子层的颗粒细胞苔藓纤维的出芽和发育情况,统计分析野生型小鼠和摇晃小鼠脑片在不同培养时期苔藓纤维出芽的数量和体积。结果显示,Thy1-GFP转基因小鼠的海马脑片是观察颗粒细胞苔藓出芽和发育的良好材料;野生型小鼠和摇晃小鼠海马苔藓纤维出芽的数量和体积随发育时间的延长有明显的动态变化。结果表明,摇晃蛋白能够促进颗粒细胞苔藓纤维出芽并参与轴突的发育。     

教你看懂化验单

“血清白蛋白”由肝脏制造，并释放到血液中．是血浆蛋白中的主要成分。它的主要功能是通过调控血液渗透压来维持正常循环的血量．白蛋白也可以与药物及许多大分子结合，担任输送任务。     

马克思主义中国化与中华民族精神的互动研究

马克思主义中国化的伟大事业深刻地改变了中国社会的发展进程和中华民族的历史命运,它深入地渗透于中华民族伟大复兴的历史进程和中国特色社会主义建设中。中华民族精神作为中华民族生命力和强大动力,已经成为马克思主义中国化研究深化过程中的关键性问题,二者相互影响,相互作用。开展马克思主义中国化与中华民族精神的互动关系研究,无论对当代中国的马克思主义完善和发展,还是现代社会主义核心价值观的培育和践行,都具有重要的意义。     

心肌缺血猝死心肌中高迁移率族蛋白B-1的表达研究

目的探讨高迁移率族蛋白B-1(High Mobility Group Box protein 1,HMGB1)在心肌缺血猝死后诊断中的法医学价值。方法收集不同案例心肌蜡块分为疑似早期心肌缺血猝死组(早期梗死组)20例、心肌梗死猝死组(心肌梗死组)15例、冠心病非心源性猝死组(对照组1)10例和正常心肌组(对照组2)10例,应用免疫组织化学二步法染色,观察心肌胞核和胞浆中HMGB1表达,用ImagePro Plus 6.0软件计算HMGB1表达的平均光密度,用SPSS 13.0对表达进行数据统计分析。结果 HMGB1在四组心肌细胞胞核中表达均呈阳性;早期梗死组和心肌梗死组胞浆均呈阳性表达,对照组1和对照组2胞浆呈阴性。各组平均光密度分别为0.3031±0.0557、0.3195±0.0523、0.0252±0.0030、0.0207±0.0029,早期梗死组和心肌梗死组的阳性反应与两个对照组相比存在显著差异(P﹤0.01)。结论 HMGB1可作为早期心肌缺血猝死的一个辅助诊断指标。     

扬子鳄Mx基因的原核表达和纯化及其多克隆抗体的制备

扬子鳄Mx以蛋白质的形式发挥其抗病毒功能,本试验通过构建pET28a-Mx质粒,将其转化入大肠杆菌感受态细胞中,用IPTG诱导其进行蛋白大量表达,并纯化蛋白。将纯化好的蛋白作为抗原,与弗氏佐剂充分乳化,免疫6周龄的BALB/c雌性小鼠,4次免疫后提取其血清,测定效价。应用Western-blot检测制备的鼠抗扬子鳄Mx多克隆抗体的特异性。结果显示,扬子鳄Mx蛋白原核表达载体构建成功,并且应用切胶纯化的方式成功纯化了该蛋白。制备的鼠抗扬子鳄Mx多克隆抗体的效价达1∶51 200以上。本试验研究结果为进一步研究扬子鳄Mx蛋白的抗病毒功能提供了物质条件。