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目的在全外显子组水平分析1例肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)猝死病例的相关致病性基因突变。方法对1例具有HCM病理学特征的猝死病例样本,利用Illumina~Hi Seq 2500平台进行全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)。测序数据分析以hg19为参照序列,筛选可疑的单核苷酸变异位点,通过PhyloP、PolyPhen-2、SIFT等软件进行突变的保守性和功能分析。结果经过筛选,发现该病例的MYBPC3基因发生C719R杂合突变。结论利用二代测序技术进行全外显子组水平的分子解剖(基因突变检测和分析),有助于明确HCM的分子机制,并为死因分析提供新的方法和思路。 相似文献
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为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第256~405aa的编码片段设计引物并进行PCR扩增,结果获得截短的gD基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化E.coli BL21(DE3)。经IPTG诱导后,获得大小为43.5ku的重组蛋白,命名为r-gD。Western-blot分析结果表明,r-gD具有较强的抗原性。 相似文献
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目的 定量测定人体外伤性癫痫灶中泛素(ubiquitin,Ub)和泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme,UbE1)的表达,研究泛素蛋白酶体系在外伤性癫痫(post-traumatic epilepsy,PTE)发病机制中所起的作用,探索其在PTE鉴定中的应用价值. 方法 分别收集颅脑外伤致癫痫患者脑癫痫灶组织(外伤性癫痫组)、非颅脑外伤性癫痫灶组织(非外伤性癫痫组)和交通事故死亡者正常脑组织(非癫痫组)各15例,应用RT-PCR、Western印迹技术检测3组中Ub和UbE1的含量,并对所得数据进行统计学分析. 结果 RTPCR、Western印迹技术测定显示Ub和UbE1的mRNA和蛋白质在3组中含量为外伤性癫痫组>非外伤性癫痫组>非癫痫组,两两比较,组间差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Ub和UbE1在癫痫灶组织中表达增加,且在外伤性癫痫灶组织中增加最为明显.推断泛素蛋白酶体系的活化是PTE神经元病理改变的重要机制之一. 相似文献
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目的运用尿液代谢组学方法对溴鼠灵毒性进行研究,揭示溴鼠灵干预对大鼠毒性作用的分子机制。方法采用气相色谱-质谱建立大鼠尿液的代谢指纹谱,采用主成分分析和偏最小二乘法判别分析比较溴鼠灵给药前后的代谢谱差异,利用正交偏最小二乘判别分析法找出与溴鼠灵毒性作用相关的差异代谢物。结果 PLS-DA得分图显示大鼠不同时点尿液样本代谢物轨迹在各时间段内相似度较好,呈现各自聚类现象。溴鼠灵中毒后,可诱导DNA损伤和突变,机体对神经损伤、肾损伤也出现修复、保护性反应。结论该研究结果表明代谢组学可为溴鼠灵毒性作用机制研究提供技术支持。 相似文献
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99.
信号肽对O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中表达及分泌的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
构建融合不同信号肽的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白真核表达载体,筛选不同的分泌型信号肽以提高O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)中的表达并使其分泌到CHO培养基中。通过PCR方法将10种不同的分泌型信号肽与串联表位基因的5′端相连,分别构建了真核表达载体并转染哺乳动物细胞CHO,采用Western-blot检测CHO培养基中重组表位蛋白累积量,研究结果表明,O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中成功分泌表达,不同的分泌型信号肽明显改变O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO培养基中的累积SCGB1D1 isoform信号肽介导的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白表达量最高。综上所述,合适的分泌型信号肽促进O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中的分泌。 相似文献
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