残缘璃眼蜱subolesin基因的原核表达及表达产物的反应原性分析

为研究残缘璃眼蜱subolesin基因的生物学特性以及寻找新的抗蜱和蜱传病疫苗候选抗原,根据GenBank上登录的小亚璃眼蜱subolesin基因核苷酸序列设计特异性引物,以残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱的饥饿成蜱cDNA为模板,扩增出subolesin基因的完整阅读框(ORF)。将残缘璃眼蜱subolesin基因的PCR产物经EcoRⅠ+NotⅠ双酶切后连接至表达载体pGEX-4T-1,把重组质粒pGEX-4T-1-subolesin导入感受态细胞BL21(DE3)中,在37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达。利用SDS-PAGE分析subolesin基因的体外表达特征;用Western-blot分析Subolesin蛋白的反应原性。结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱subolesin基因的ORF长度分别为492、492、486bp,分别编码163、163、161个氨基酸。subolesin基因序列和推导的氨基酸序列的比对结果显示,残缘璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、微小牛蜱与参考的小亚璃眼蜱的核苷酸序列同源性分别为98%、98%、89%,氨基酸序列同源性分别为98%、99%、93%。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,重组残缘璃眼蜱Subolesin蛋白的分子质量为45ku,纯化的subolesin重组抗原可与抗残缘璃眼蜱全蜱血清、残缘璃眼蜱唾液腺、卵巢血清有较强的反应原性。     

尤氏泰勒虫OPRT基因的优化表达

为克隆和表达尤氏泰勒虫OPRT基因的功能区片段,并对重组OPRT蛋白的反应原性进行分析,以反转录得到的尤氏泰勒虫cDNA链为模板,PCR扩增出OPRT基因片段,然后将其克隆至pET-30a(+)载体;把构建成功的重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21进行优化表达,对诱导表达的蛋白纯化后用Western-blot分析它与吕氏泰勒虫和绵羊泰勒虫阳性血清是否发生交叉反应。结果显示,OPRT基因获得了不可溶性表达,最佳表达时间为6h,最佳表达温度为28℃,且表达的重组OPRT蛋白分别与上述2种泰勒虫阳性血清发生交叉反应。结果表明,OPRT同源基因也存在于吕氏泰勒虫和绵羊泰勒虫之中。     

结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。     

基于ITS2条形码序列对新型“香料”毒品植物成分的研究

目的应用DNA条形码片段ITS2对新型毒品样品中的植物成分进行分析。方法提取可疑毒品样本"spike99","K2","7号"中的植物基因组DNA,用ITS2通用引物进行扩增,对扩增产物进行测序,对序列校对拼接,应用BLAST方法在NCBI数据库中比对。结果 "spike 99"、"7号"各得到1条ITS2基因序列,"K2"得到2条ITS2基因序列,分别与紫花苜蓿、大麻、啤酒花、黄蜀葵的ITS2基因序列的同源性为100%。结论应用条形码技术可以成功分析新型毒品中的植物种属,为案件中植物样本的种属鉴定提供方法。     

河南汉族群体DYF403S1和DYF404S1序列分析及多态性

目的调查2个新的多拷贝基因座DYF403S1和DYF404S1在240例河南汉族群体无关男性个体中的遗传多态性,评价其法医学应用价值。方法用6-FAM荧光染料标记引物,PCR扩增产物采用ABI 3500遗传分析仪检测,根据分型检测结果,分别对2个基因座的不同等位基因进行序列分析。结果 DYF403S1基因座为4拷贝,该基因座包含2种核心序列并表现出2种不同的基序,等位基因分别为23~33、38~53。DYF404S1基因座为双拷贝,等位基因为11~18。本研究中2个多拷贝基因座组成的联合单体型共229种,出现最多的单体型为26-28-29-48/14-15,频率是0.016 7,仅出现1次的单体型共220种,占91.67%。单体型多样性(HD)和个体识别力(DP)分别为0.999 6和0.995 4,单体型辨别能力(DC)为0.954 2。结论 2个多拷贝基因座DYF403S1和DYF404S1在河南汉族群体中具有较高的遗传多态性。     

鸡传染性喉气管炎病毒中国王岗株糖蛋白gB基因克隆及鉴定

以ＰＵＣ１９质粒为载体构建了鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）ＥｃｏＲＩＤＮＡ文库。根据已经发表的澳大利亚ＩＬＴＶ－ＳＡ２株和英国ＩＬＴＶ－Ｖ８２２株的糖蛋白ｇＢ基因的核苷酸序列，设计并合成了一对引物，以ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ为模板，扩增出１．３３８ｋｂ的糖蛋白ｇＢ基因片段，用ＤＩＧ标记制备成核酸探针，从ＩＬＴＶＥｃｏＲＩＤＮＡ文库中筛选出阳性重组子，得到一个ＥｃｏＲＩ３．０ｋｂ的ＩＬＴＶＤＮＡ片段。经酶切分析表明，该３．０ｋｂＩＬＴＶＤＮＡＥｃｏＲＩ片段含有完整的糖蛋白ｇＢ基因，经ＰＣＲ和核酸杂交表明所克隆的糖蛋白ｇＢ基因是特异的。     

中国内蒙古达斡尔族15个STR基因座的多态性

<正> 应用PowerPlexTM16系统(Promega)荧光标记复合扩增试剂盒对101名中国内蒙古达斡尔族无关个体进行15个STR基因座的多态性调查,报道如下。1 材料与方法 101例中国内蒙古达斡尔族无关个体血样本由内蒙古包头医学院提供。样本用抽取静脉血涂于纱布     

检验混合斑中女性成份DNA基因型1例

在法医物证检验中，强奸案混合斑的DNA检验主要是指对男性成份的检验，因此多数情况下，要去除女性成份，以获得精子的基因型。在某些特定的情况下，检测混合斑中女性成份的基因型也可成为定案的关键证据，报道一例如下：     

危险基因：发现中国企业家群体的领导力缺陷

在过去的两年，在《中国企业家》杂志的帮助下，Hay（合益）集团对中国近40位各行业顸尖企业的领导人及其直接属下进行了深入的访谈，运用了一系列先进的研究工具，并借鉴中国一流商业观察人士的意见，发现总结了这些优秀企业领导者的成功基因及其要害“软肋”。可以说，这是迄今为止针对“中国企业家”这个群体所作的最全面的、定量和定性分析相结合的剖析解读。