水泡性口炎病毒N基因的克隆及其PCR检测方法的建立

根据国外发表的水泡性口炎病毒 (VSV)基因组核苷酸序列 ,设计了 2对特异性引物 ,通过RT PCR方法得到N基因。将此基因与 pGEM TEasyVector相连 ,通过蓝白斑筛选出阳性克隆 ,碱裂解法小剂量提取质粒。经测定 ,N基因与参考序列同源性高达 99%。同时根据克隆产物进行亚克隆 ,建立了VSV的PCR检测方法。     

大鼠弥漫性脑损伤后早期c-fos基因表达的法医学研究

目的观察大鼠弥漫性脑损伤后c-fos基因表达的规律。方法采用Marmarou的弥漫性脑损伤模型，分别于伤后15min，30min，1h，3h，6h，12h，24h取脑组织，运用免疫组化SABC法观察c-fos基因的表达。结果打击后15min时，即可观察到c-fos基因的表达，1h后表达明显增加，3h达到高峰，随着损伤时间的延长，阳性反应细胞逐渐减少，24h可见少量表达。表达呈弥漫性，以皮层、脑干最为明显，不同部位的变化趋势一致。对照组未见阳性反应细胞。结论c-fos基因的表达规律可用于弥漫性脑损伤的早期鉴定及损伤经过时间的推断。     

鹅细小病毒NS2基因以及VP1与VP3非重叠序列基因的真核表达

采用pBlueBacHis2A系统筛选鹅细小病毒(GPV)的检测抗原,利用PCR扩增和双酶切方法分别构建了含有NS2基因和VP1与VP3非重复序列基因的重组质粒pBlueBacHis2A-GPV-NS2、pBlueBa-cHis2A-GPV-VP(1-3),分别转染sf9细胞,得到重组病毒,分别表达出了54 ku的NS2融合蛋白和24 ku的VP(1-3)融合蛋白。Western-blotting和Dot-ELISA检测结果证实,表达产物具有特异性;间接免疫荧光试验证实,重组蛋白在细胞中获得了表达。     

竞争RT-PCR方法检测Ctr1基因mRNA变化的内参构建

构建定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的内参标准 ,用以检测铜代谢过程中Ctr1基因mRNA表达的变化情况。采用双引物 ,经 2次克隆将 4 0 0bp左右的外源基因片段插入到 5 30bp目的片段的单酶切位点中 ,构建成突变型DNA阳性竞争重组质粒。结果 ,成功构建了 930bp左右的竞争模板重组质粒。     

HLA-A位点DNA分型及其法医学应用

应用聚合酶链反应0寡核苷酸探针（PCR－SSO）斑点杂交技术，对222名辽宁地区汉族人群无关个体进行HLA－A基因检测，研究中国辽宁地区汉族群体的HLA－A座位基因分布状况。共检出HLA－A等位基因24个，其中以等位基因HLA－A0201最为常见，频率为0．2635；依次是2402101和1101，等位基因频率分别为0．1847和0．1262.理论杂合度为87％，个人鉴别机率为92％，非父排除率为73．3％。在中国辽宁汉族中检出73种基因型，对观察值和期望值进行X2检验，符合Hardy－Weinberg平衡定律（x2＝6．28，df＝9，0．5＜P＜0．75）。家系分析结果表明按照孟德尔方式遗传。提出的中国辽宁汉族HLA－A等位基因的遗传基因情况，可用于法医学个人识别和亲子鉴定。人类学，HLA相关疾病，及器官移植研究。     

猪IFN-α1基因的原核表达及其蛋白质结构的预测

利用RT-PCR技术,从被诱导的猪外周血单核细胞中克隆出了猪α1干扰素(IFN-α1)基因.序列分析表明,克隆的猪IFN-α1基因序列与GenBank上登录的猪IFN-α1基因的同源性为97.8%.用克隆的猪IFN-α1基因构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-IFN-α1.探讨了猪IFN-α1.基因表达的最佳条件,并在大肠杆菌中对此基因进行了表达.结果表明,IPTG的最佳诱导浓度为0.5 mmol/L,最适诱导温度为42℃,诱导9h表达量最大,表达产物约占菌体总蛋白的30%.SDS-PAGE分析表明,表达产物的分子质量为45 ku,且目的蛋白主要以包涵体的形式存在.经预测,猪IFN-α1蛋白为一结构松散的球状蛋白.     

鸡白痢沙门菌等位基因特异性PCR检测方法的建立

根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同,设计和合成了等位基因特异性PCR引物,建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法,并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示,该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌,检测灵敏度达100 pgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定,鉴定出33株鸡白痢沙门菌,符合率为94.3%。表明,建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。     

北京汉族群体中6个Y—STR遗传标记多态性调查

用PCR—PAGE技术调查了6个新的Y-STR基因座(DYS505、DYS533、DYS549、DYS576、DYS578和DYS641)在北京汉族群体中的分布,并评价他们在法医学中的应用价值,旨在筛选适合于法医学应用的新的Y-STR基因座。     

病毒性心肌炎心肌肠道病毒基因检测的研究进展 及其法医病理学应用前景

本文综述了近年病毒性心肌炎心肌道病毒基因检测的研究进展，介绍了RT－PCR、核酸原位杂交等庆心肌病毒基因检测中的应用，并展了其法医病理学应用前景。     

呼之欲出的基因经济

2000年 6月 26日，美、英、德、日、法、中六国科学家一起向全世界宣布，人类基因组工作草图绘制完毕，草图覆盖了基因组 97％的空间， 85％的基因序列已被组装起来， 50％以上的序列接近完成图标准， 20％的序列已经达到完成图标准，已有数千个基因被确定，数十个致病基因被定位。这意味着生命科学的研究实现了历史性的“阿波罗登月”，是达尔文时代以来生物学领域最重大、最杰出的突破。它给人类带来吉祥的福音，也拉动了以基因为载体的新型经济。一周内，我国沪深股市异动，一批与基因或多或少沾边的股票，如新黄浦、海王生物、复星实业…