口疮病毒VIR蛋白多克隆抗体的制备及VIR蛋白的亚细胞定位观察

为研究口疮病毒VIR蛋白的生物学特性,构建了含有VIR基因的重组表达质粒pET-VIR和含有绿色荧光蛋白融合真核重组质粒pEGFP-VIR;诱导表达和纯化VIR蛋白,并用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定抗体效价,用Western-blot鉴定抗体的反应原性。利用脂质体介导法将pEGFP-VIR质粒转染绵羊睾丸细胞,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞核染色后激光扫描共聚焦显微镜观察VIR在细胞内的表达和亚细胞定位。结果显示,表达和纯化了含有GST标签的GSTVIR蛋白,主要以可溶性形式存在,其分子质量约27ku,制备的多克隆抗体效价达1∶218;Western-blot分析结果显示,此多克隆抗体有较好的特异性反应;VIR蛋白主要定位于细胞核内。本试验结果为VIR生物学功能的深入研究奠定了基础。     

尸体颈部扼痕擦拭物检验Y-STR破案1例

某年3月8日,在某地一公园桥下发现一具女尸,经法医检验确定被害人为掐扼颈部致机械性窒息死亡。现场遗留有女士背包1个,用棉签二次转移法擦取背包表面可疑斑迹处及尸体颈部扼痕处送检。     

内质网应激参与介导脂多糖诱导的大鼠肝细胞凋亡

目的探讨内质网应激在脂多糖（1ipopolvsaccharide,LPS）诱导的肝细胞凋亡中的作用。方法肝细胞系BRL细胞培养,用LPS、内质网应激诱导剂毒胡萝卜素（thapsigargin,TG）、内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyricacid,4-PBA）分别或组合处理肝细胞。用M1Tr比色法检测细胞活力的变化．Heochst33258荧光染色检测细胞凋亡形态的变化,AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率．Western印迹法检测内质网应激标志蛋白GRP78和内质网应激相关的凋亡蛋白CHOP、caspase-12和激活型caspase-3的表达。结果LPS引起肝细胞活力降低、细胞凋亡率明显增加,并具有量效和时效关系,LPS诱导GRP78、CHOP、easpase-12和激活型caspase-3的表达上调：TG可引起肝细胞活力降低和细胞凋亡增加,并能加重LPS引起的肝细胞损伤;4-PBA明显抑制LPS引起的肝细胞凋亡增加。结论内质网应激拳与介导了T,PS引起的肝细胞凋亡．提示内盾网应激暑T,PS诱导肝细胞桶伤的节娶发病给径-     

液基细胞学技术应用于血样羊水栓塞的诊断

目的：建立基于液基细胞学技术的血样羊水栓塞的诊断方法,并对其有效性进行研究。方法收集羊水栓塞者血液样本,分别用两种直接涂片法（上清涂片法、沉淀涂片法）和两种液基细胞涂片法（自动涂片法、人工涂片法）对血液样本中的羊水成分进行检测,对4种方法的羊水成分检出率进行比较。结果建立的两种液基细胞涂片法的羊水成分检出率（分别为84.6%、92.3%）明显高于直接涂片法（分别为53.8%、61.5%）。结论液基细胞涂片法可以提高羊水栓塞的检出率。     

牛蒡子药材中内果皮石细胞与牛蒡苷含量相关性研究

目的对牛蒡子药材中内果皮石细胞显微特征指数与牛蒡苷含量的相关性进行研究,从显微鉴定的角度评价其质量,为中药材"辨状论质"提供依据。方法采用容量分析的方法测定牛蒡子药材中内果皮石细胞显微特征指数,采用HPLC色谱法测定牛蒡苷的含量,对两组数据进行SPSS统计,并进行相关性分析。结果牛蒡子药材中内果皮石细胞显微特征指数与牛蒡苷含量呈负相关,且高度相关,有极显著的统计学意义。结论为牛蒡子药材的质量评价,从显微鉴定的角度给出了新的参考。     

手部脱落细胞DNA转移及二次转移的实验研究

目的研究脱落细胞遗留者洗手时间及所接触客体类型对手部脱落细胞转移的影响,同时考察手部脱落细胞DNA是否能够发生二次转移。方法 9名志愿者在洗手后30min、2h、6h分别握持木柄螺丝刀、橡胶柄螺丝刀、胶木插头1min和佩戴粗纱手套15min,对上述物品进行DNA提取检测,同时进行手部脱落细胞的二次转移实验。结果从志愿者接触过的物品中能够获得的STR基因座数量随着接触者洗手后时间的延长而增加;在洗手后30min和2h的触摸实验中,4种客体检出的基因座数量存在统计学差异,从手套中检出的基因座数量多于从木柄和橡胶柄螺丝刀中检出的数量;从脱落细胞遗留状态较差者握持过的螺丝刀中,检出了与该物品没有直接接触的脱落细胞遗留状态较好者部分STR基因座。结论接触者最后一次洗手时间是影响脱落细胞DNA转移的一个重要因素,在接触性DNA的提取检测和结果解释过程中,对有可能发生的二次转移现象应予以高度注意。     

指纹脱落细胞的STR检验

正现场遗留的帽子、口罩、衣服、手套等生物学检材,一般含有较多脱落细胞,DNA检验比较容易,然而对于指、掌纹短时间接触部位,由于所含脱落细胞少,且部分细胞核DNA容易降解,STR分型成功率较低。本研究对指纹脱落细胞分别应用Chelex-100、QIAamp DNA Investigator Kit、Mag Attract M48 DNA Manual Kit磁珠及直接扩增法进行STR检验,并比较分析。     

急性乙醇中毒大鼠脑皮质α-syn表达与神经细胞凋亡的关系

目的观察急性乙醇中毒大鼠脑皮质α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)表达及神经细胞凋亡的变化,探讨乙醇对神经细胞损害的机制。方法用50%乙醇溶液灌胃方法制作大鼠急性乙醇中毒模型。采用免疫组织化学染色技术和图像分析方法观察大鼠急性乙醇中毒后1 h、3 h、6 h、12 h脑皮质内α-syn和caspase-3的表达。测定阳性细胞数和平均光密度值,分析其变化趋势,并进行方差分析和t检验。结果急性乙醇中毒组大鼠脑皮质α-syn染色阳性细胞数和平均光密度值均呈上升趋势,6 h达到峰值,12 h略有下降,但仍高于1 h、3 h组。中毒后12 h以内,大鼠脑皮质的caspase-3阳性细胞数和平均光密度值均呈逐渐上升趋势。结论急性乙醇中毒后脑水肿、缺氧引起α-syn异常聚集可能参与乙醇中毒后早期神经细胞凋亡过程。     

非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析

非洲马瘟（African horse sickness,AHS）是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AH...     

鸭瘟病毒CY07株诱导的细胞凋亡及凋亡对其增殖的影响

通过荧光染色对鸭瘟病毒(DPV)CY07株诱导的细胞凋亡进行了测定,并通过real-time PCR测定了其在鸭胚成纤维细胞上的增殖规律,探讨了DPV CY07诱导鸭瘟发生的机制.结果显示,DPV CY07株诱导鸭胚成纤维细胞凋亡的凋亡率于接毒后第12 h时达到峰值12.85%,对照毒株鸭瘟标准毒诱导的细胞凋亡在接毒后第8 h达到峰值10.57%.DPV CY07株的数量在接毒后第20 h开始急剧增加,至第24 h增幅为102.02;鸭瘟标准毒的数量在接毒后第16 h开始急剧增加,至第24 h增幅为102.21,且试验结束时DPV CY07株的病毒量低于鸭瘟标准毒株.说明,DPV CY07株诱导细胞凋亡的能力较强,这可能是其毒力强的主要原因.