辽宁省禽大肠埃希氏菌血清型的调查及其致病性试验

通过病原菌分离、血清型鉴定及本动物致病性试验对辽宁省禽大肠埃希氏菌的主要血清型分布与致病性进行了研究。2001～2005年从该省14个市的病死禽和死胚中分离出大肠埃希氏菌226株,血清型鉴定105株,其中O_(78)型占29．52%(31/105),O_(109)型占10．48%(11/105)。结果,O_(78)、O_(109)血清型是流行于该省致病性禽大肠埃希氏菌的优势血清型。随机选取49株分离菌,以每株1×10~7CFU的量于气管内给6只1日龄SPF鸡接种,根据接种后7 d内死亡和病变的情况,确定高致病株、中度致病株和低致病株,它们分别占75．5%、18．4%和6．1%。结果表明,所有分离菌株均有致病性,并在国内首次分离出禽O_(109)型大肠埃希氏菌。     

大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理

介绍了大肠杆菌耐热肠毒素b(STb)的编码基因、理化性质、免疫学特征、分泌特征、毒性相关氨基酸残基、空间结构、膜受体以及STb致动物腹泻的机理。认为STb是一种十分重要的肠毒素,应进一步加强对STb及其致腹泻机理的研究。     

耐氟喹诺酮类药物大肠埃希氏菌基因突变的MAMA-PCR检测

采用MAMA-PCR法对72株已知突变菌株的突变情况进行了检测。结果,有2种gyrA 83位突变:TCG→TTG和TCG缺失;4种gyrA 87位突变:GAC→AAC、GAC→GGC、GAC→TAC和GAC→CAC;1种parC 80位突变:AGC→ATC以及4种parC 84位突变:GAA→AAA、GAA→GCA、GAA→GGA和GAA→GTA。采用同样的方法,对38株未知突变菌株的检测结果显示,gyrA 83、gyrA 87、parC 80和parC 84位的突变检出的正确率分别为97．4％、94．7％、81．6%和94．7％。结果表明,MAMA-PCR有望成为监测耐氟喹诺酮类药物大肠埃希氏菌的分子生物学常规方法。     

产肠毒素性大肠埃希氏菌基因工程疫苗的研究进展

简述了产肠毒性大肠埃希氏菌(ETEC)K88-K99、K88ac-LTB、K99-F41和ST-LT双价基因工程疫苗的研制方法、生产工艺、免疫效果及生态效应及其研究进展,同时阐明了用这些疫苗免疫妊娠母畜,可使吸吮了母畜初乳的幼畜的腹泻发病率和死亡率显著下降,且不会带来生态环境污染。认为这些基因工程疫苗仍有不足之处,需要进一步加以改进。     

致病性大肠杆菌O_(157):H_7基因分型的研究进展

就目前的大肠杆菌O157:H7基因分型方法进行了综述,将其归纳为3类:基于DNA的限制性酶切技术、基于特异靶标的PCR扩增技术、基于基因组特定位点的DNA多态性分析技术,阐述和分析了这些技术所涉及的方法和技术特点。认为,大肠杆菌O157:H7具有重要的公共卫生学意义,开展流行病学调查和病原溯源追踪是防控大肠杆菌病的重要手段,而基因分型是大肠杆菌O157:H7鉴定和示踪的重要技术。     

临床分离动物源性大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平的测定

为研究大肠杆菌周浆蛋白AcrA表达水平与不同动物源性大肠杆菌多重耐药水平之间的关系,将获得的重组阳性质粒pET28a(+)-acrA转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经IPTG诱导表达,得到约42ku的目的蛋白。AcrA蛋白表达产物经侧带法纯化后免疫獭兔,制备抗AcrA的多克隆抗体,采用间接ELISA法检测临床分离的31株不同动物源性大肠杆菌中acrA基因的表达水平。结果显示,随着多数被检大肠杆菌多重耐药水平的提高,AcrA蛋白的表达量有上调的趋势。表明,动物源性大肠杆菌的多重耐药水平与AcrA蛋白的表达水平可能存在相关性。     

猕猴肠侵袭型大肠杆菌的分离鉴定及其毒力因子基因的检测

2010年5月从四川省某猕猴养殖场急性腹泻猕猴肠道内分离出4株致病性大肠杆菌,并对其进行了16SrDNA扩增、生化反应、血清型鉴定、药敏试验以及毒力因子基因的分子生物学检测。结果显示,该菌株血清型为O28;药敏试验证实该菌对多种抗生素具有抗性,并且呈现多重耐药性;攻毒试验证实该菌能够导致小白鼠大量死亡;多重PCR成功检测出侵袭性大肠杆菌的Einv毒力基因。确定该病原菌为肠侵袭型大肠杆菌,而且毒力很强。     

产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)乳牛乳腺炎大肠杆菌的检测及其基因型分布

为了解采自内蒙古和上海地区的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)乳牛乳腺炎大肠杆菌的流行特点、耐药性和基因型分布,采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)2005年推荐的初筛及纸片确认方法对内蒙古地区的58株和上海地区的22株乳牛乳腺炎大肠杆菌进行了ESBLs的检测及耐药性分析,并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果显示,内蒙古地区检出6株产ESBLs菌株,阳性率为10.34%,其中,有1株菌携带TEM-1基因,有1株携带CTX-M-14型基因,而有3株同时携带TEM-1型和CTX-M-14型2种基因,只有1株菌未检出上述基因。上海地区未检出产ESBLs菌株。结果表明,产ESBLs菌株多表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株。     

传染性腔上囊病病毒VP2基因表达条件的优化

用摇瓶培养法,对用作生产传染性腔上囊病基因工程亚单位疫苗的基因工程菌种BL21/pET28a VP2的表达条件进行了优化研究。其结果为:温度 37 ℃,诱导表达时间 3~7 h,用乳糖诱导时终浓度为20 mmol/L时即达到最高表达量;用IPTG诱导时终浓度为0.33 mmol/L时即达到最高表达量;乳糖的诱导效果优于IPTG。     

黏杆菌素对两种诱导多重耐药革兰氏阴性杆菌的体外抗菌活性

为评价黏杆菌素对兽医临床常见的多重耐药铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌的抗菌作用,以微量肉汤稀释法对2种诱导多重耐药菌株进行最低抑菌浓度和最小杀菌浓度测定;采用菌落计数法绘制黏杆菌素对2种诱导多重耐药菌株的时间-杀菌曲线。结果表明,黏杆菌素对铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为2和0.25μg/mL,最小杀菌浓度分别为2和0.5μg/mL。黏杆菌素在0.5、2、4、8、16倍最低抑菌浓度下,对多重耐药大肠杆菌不同时间点的杀菌速率差异显著(P<0.05),呈现浓度依赖性;对铜绿假单胞杆菌呈现部分浓度依赖性。黏杆菌素在2倍最低抑菌浓度下,多重耐药大肠杆菌和铜绿假单胞杆菌菌量在2h内显著下降,在4倍最低抑菌浓度下可在8h内将大肠杆菌全部杀死,在4h内将铜绿假单胞杆菌全部杀死。说明黏杆菌素对诱导多重耐药铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌具有强效、速效的杀菌作用。