扩增12S rRNA基因鉴定生物检材种属

目的建立一种能够在同一反应条件下鉴定多个具体物种．又满足简单、快速、特异、灵敏、准确等实用要求的种属鉴定方法。方法从GenBank中获取人、鸡、鸭、鹅、猪、兔、鼠、绵羊、水牛、狗、山羊等11个物种的12SrRNA基因序列．设计一对针对上述11个物种的通用引物和分别针对人、鸡和鸭的特异引物,同时扩增各物种12SrRNA基因。以通用引物扩增片段为内部对照．以特异引物扩增片段用于人、鸡和鸭的种属鉴定,并分别对人、鸡、鸭单一检材以及人和鸡、人和鸭、鸡和鸭等二元混合DNA进行鉴定。结果通用引物扩增,各物种均有400bp左右的扩增片段：特异引物只对各自目标种属有扩增产物,片段大小：人163bp、鸡286bp、鸭374bp;测序结果与GenBank既有序列比对,Identities分值：人100％、鸡99％、鸭100％;通用引物扩增人、鸡和鸭检材的灵敏度为2．5Pg;特异引物扩增灵敏度人为2．5pg,鸡、鸭均为200Pg;混合DNA中任一种DNA的含量只要高于检测灵敏度即可被准确检出．不受另一种DNA量的干扰：盲测结果准确。结论本方法可以利用同一种PCR反应条件鉴定多个物种的种属。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的 建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。方法 采用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置5－15年的男、女血痕标本各50例、毛发各20例、骨骼各20例以及现场提取5－－20天的男、女腐败肌肉各10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PGA（9％T,3％C）电泳、银染显带检测扩增产物。结果 所有样本均得到正确结果,男性检材表现为83bp的Y特异性及80bp的X特异性2条谱带,而女性检材仅有1条80bp的X特异性谱带。结论 用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

生物素掺入反向杂交法在法医学中应用的研究

建立了一套快速、准确检测人类 HLA－ DQA基因的反向杂交检测技术,可准确判定 HLA－ DQA基因位点的 6个等位基因即 0101、 0102、 0103、 0201、 0301、 0401。调查了中国北方汉族人群中 200例无关个体的 HLA－ DQA基因频率及基因型的频率分布,杂合度 (H)为 0.75,个体识别能力 (DP)为 0.928。采用生物素直接掺入 PCR扩增的方法, 1ng的 DNA样品即可准确判型。对血液、血斑、精斑、精液与阴道液的混合斑、肌肉组织等检材进行检测,效果良好。在刑事案件及亲子关系鉴定中应用,准确地判定了检材的 HLA－ DQA基因型,为侦察破案提供了科学依据。将此项技术商品化,完成了试剂盒的研制。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的　建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。　方法　采用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置 5～ 15年的男、女血痕标本各 5 0例、毛发各 2 0例、骨骼各 2 0例以及现场提取 5 - - 2 0天的男、女腐败肌肉各 10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PAG( 9%T ,3 %C)电泳、银染显带检测扩增产物。　结果　所有样本均得到正确结果 ,男性检材表现为 83bp的Y特异性及 80bp的X特异性 2条谱带 ,而女性检材仅有 1条 80bp的X特异性谱带。　结论　用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便 ,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

复发性流产肾虚证小鼠子宫蜕膜组织miRNA表达谱检测及生物信息学分析

目的 探讨微小RNA（microRNA,miRNA）在复发性流产（repeated spontaneous abortion,RSA）肾虚证小鼠子宫蜕膜组织中的表达特征。方法 运用基因芯片技术对所采集的正常对照组和RSA小鼠蜕膜组织进行miRNA检测,运用Genespring软件对miRNA进行筛选及功能分析。应用生物信息学方法分析差异表达的miRNA及其靶向基因在RSA发生、发展中的作用。结果 芯片检测结果显示正常对照组和RSA肾虚证组筛选出差异表达的miRNA共有63条（22条上调、41条下调）,实时荧光定量PCR验证的miRNA的表达情况与miRNA芯片结果一致。京都基因与基因组百科全书通路富集分析及基因本体分析显示,其差异表达的miRNA涉及到PI3K-Akt信号通路、细胞吞噬通路、癌症通路、黏着斑通路、肌动蛋白细胞骨架调控通路、轴突导向信号、MAPK信号通路、PAP-1信号通路等。结论 RSA肾虚证小鼠子宫蜕膜组织中存在差异表达的micro RNA,可能涉及RSA肾虚证的发生、发展。     

叶下珠水提物对裸鼠人肝癌移植瘤HBx和VEGFR3表达的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒x基因（hepatitis B virux x gene, HBx）和血管内皮生长因子受体3（vascular endothelial growth factor receptor 3, VEGFR3）基因与乙型肝炎相关肝癌的相关性,以及叶下株水提物（aqueous extract of phyllanthus urinaria L, AEP）对HBx和VEGFR3蛋白表达的干预作用。方法 将60只Balb/c-nu裸鼠随机分为10组。分别复制转染HBx、氯霉素乙酞转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）和VEGFR3基因的HepG2肝癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,用AEP进行干预,以生理盐水、环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）作为对照,共治疗6周。观察模型复制后不同时间各组裸鼠的移植瘤生长状况,采用酶联免疫吸附试验检测各组裸鼠血清甲胎蛋白（alpha fetal protein, AFP）水平,采用Western blot方法检测移植瘤组织中HBx和VEGFR3蛋白表达水平。结果 肝癌移植瘤模型复制成功。各组裸鼠体质量均随着时间显著增长。实验结束时,接种HepG2-HBx细胞的各组中,AEP处理组肿瘤质量显著低于CTX处理组（P＜0.05）,其AFP水平显著高于NS处理组（P<0.05）,其移植瘤组织中HBx表达水平显著低于NS组（P<0.05）。接种相同肝癌细胞的各组中,AEP处理组VEGFR3表达水平最低,但与CTX组VEGFR3表达水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;AEP组和CTX组VEGFR3表达水平显著低于NS组（P＜0.05）。对于相同的处理因素,接种HepG-HBx细胞和HepG-CAT细胞的裸鼠移植瘤组织中VEGFR3表达水平均显著低于接种HepG-VEGFR3细胞的裸鼠（P＜0.01）。结论 AEP通过直接抑制HBx蛋白和VEGFR3蛋白表达,及通过抑制HBx蛋白表达而间接抑制VEGFR3蛋白表达,达到对肝癌移植瘤生长的抑制作用。     

人类胚胎基因编辑的多维风险与立法规制——《民法典》的人格权视阈关照

基因编辑时代,人格尊严遭遇到了来自于基因科技的巨大威胁与挑战,引发了诸多伦理风险、技术风险以及法律风险.人类基因胚胎技术一旦被滥用,将可能对人格尊严、意志自由、平等存在、公正追求、安全目标等法律价值与道德理念产生挑战.剖析基因编辑可能造成的多维风险,指出其伦理争议与立法体系缺位,可以厘清其蕴含的责任追究与权利救济等法律...     

基于钟基因Clock和Bmal1调控探究辰时针刺自发性高血压大鼠的降压机制

目的 以自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat,SHR）为观察对象,探究针刺降压的钟基因调控作用。方法 将24只SHR随机分为针刺组和模型组,12只Wistar-Kyoto（WKY）大鼠作为正常组。针刺组选择辰时针刺SHR双侧曲池、足三里穴,模型组和正常组仅接受与针刺组同等强度的捆绑操作。4周后,各组分别在辰、酉时随机抽取6只大鼠,测量鼠尾收缩压（systolic blood pressure, SBP）和舒张压（diastolic blood pressure, DBP）,然后检测血清5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、褪黑素（melatonin, MT）的含量以及心脏生物钟基因Clock和Bmal1的表达水平。结果 分组因素对SBP、DBP、血清MT含量、Clock表达结果的RQ值、Bmal1表达结果的RQ值的主效应均有统计学意义（P＜0.05）,时辰因素对各指标的主效应和两者的交互作用均无统计学意义（P＞0.05）。模型组辰、酉两个时辰的SBP和DBP均高于正常组（P<0.05）,针刺组辰时的SBP和DBP及酉时的SBP均低于模型组（P<0.05）。模型组辰时MT含量较正常组降低,5-HT含量较正常组升高（P<0.05）,针刺组辰时MT含量较模型组升高,5-HT含量较模型组降低（P<0.05）;针刺组酉时的MT含量较模型组升高（P<0.05）。针刺组辰时心脏Clock基因表达水平和酉时心脏Bmal1基因表达水平较模型组升高（P＜0．05）。结论 辰时针刺可以降低SHR的“双峰”血压,其作用机制可能与提高血清MT含量,减少5-HT含量以及提高心脏Clock和Bmal1基因的表达水平有关。     

基因距离、隐性知识与跨国知识流动

知识的有效传播和创造需要同时掌握显性知识和隐性知识。“知识螺旋”(SECI)模型阐述了隐性知识与显性知识之间的相互转化,提示相近的基因距离能有效促进隐性知识的传播,从而促进跨国知识流动。基于45个国家在1987—2006年期间的专利互引情况的研究表明：在控制了地理距离、语言和宗教等因素后,基因距离这一生物学特征仍然显著阻碍着跨国知识流动;基因距离的阻碍作用在地理距离较小、共同语言和共同宗教的国家间更强;跨国知识流动能解释基因距离对收入差异影响的50%。因此,国家之间的深层次差异仍然阻碍着隐性知识的传播。我国需要加强国际间人才流动、支持出国留学、扩大学术交流、利用开放网络改革教育方式等措施,促进隐性知识传播,减少跨国知识流动的障碍。