PCR-RFLP在mtDNA多态性分析中的应用

目的探讨PCR-RFLP法在mtDNA多态性分析中的应用价值。方法应用限制酶RsaI和MnlI消化mtDNA D-LOOP区（HVI16106～16297）PCR扩增产物,聚丙烯凝胶电泳进行RFLP分型,对不同PCR-RFLP分型扩增产物进行测序,并对150例辽宁汉族随机个体及30例真三联家系血样进行检验。结果在150例随机个体中,RsaI和MnlI酶切分别发现3和8种表型,DNA测序结果和PAGE分型结果一致,GD值分别为0.107,0.670。联合两种酶切,发现12种表型,GD值为0.708。在30个家系中,母子的RFLP带型完全相同。结论 PCR-RFLP法适合在基层实验室mtDNA分析中应用。     

伪狂犬病病毒分子生物学的研究进展

介绍了伪狂犬病病毒基因组的特点及编码蛋白,论述了伪狂犬病病毒分子生物学诊断方法,包括核酸探针诊断方法、PCR诊断方法、LAMP诊断方法、鉴别诊断方法,并就其基因工程疫苗方面的研究进行了着重阐述。     

蛋鸡J亚群禽白血病病毒分离株SD1009株感染性克隆的构建与病毒拯救

为探究蛋鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,从山东省某鸡场送检的蛋鸡病料中分离鉴定出1株ALV-J,命名为SD1009株,采用PCR方法分3段扩增出SD1009株的前病毒cDNA,PCR产物经克隆酶切后顺次连接,获得1个含有完整ALV-J前病毒cDNA的重组质粒,命名为pBW-SD1009。全长测序及序列比对分析发现,近年来分离的ALV-J都存在缺失部分rTM和DR区的序列,缺失长度为205bp。通过外源基因嵌合的方式,将205bp嵌合进入,又获得了1个前病毒cDNA的重组质粒,命名为pBW-SD1009A205,将pBW-SD1009和pBW-SD1009A205分别转染DF1细胞,通过间接免疫荧光试验,禽白血病抗原试剂盒检测,反转录酶试剂盒检验,表明拯救出了2株病毒,分别命名为rSD1009和rSD1009A205。本研究成功构建了蛋鸡ALV-J的感染性克隆,并在序列分析的基础上,又构建了第2株补全缺失序列的感染性克隆,结果表明缺失部分rTM和DR区的序列,对病毒的拯救以及病毒的复制动力学无显著影响。     

两株乙型脑炎病毒的分离鉴定与生物学特性研究

2009年从四川多个地区的猪场采集流产死胎及库蚊样本12份,采用BHK-21细胞培养方法分离出2株乙型脑炎病毒,分别命名为JEV-CZ1与JEV-YA1,PrM/C基因与疫苗株SA-14-14-2的同源性分别为90.9%与99.6%,基因分型研究显示JEV-CZ1株为基因Ⅰ型乙型脑炎病毒,JEV-YA1株为基因Ⅲ型。分离株在BHK-21细胞中能产生明显的细胞病变,其细胞半数感染量(TCID50)分别为10-6.206 TCID50/0.025mL与10-4.943 TCID50/0.025mL。经脑内注射测得分离株对体重9～11g小鼠的半数致死量(LD50)分别为9.97LD50/0.1mL和6.95LD50/0.1mL,其中JEV-CZ1株毒力较强。小鼠接种分离株3～4d后出现抽搐、肢体痉挛、异常兴奋等神经症状,5～7d后全部死亡,剖检可见脑部充血、水肿;病理切片观察可见脑内神经细胞变性坏死,其他器官也出现不同程度的病变。结果表明这2个分离株符合乙型脑炎病毒的特征。     

EU update

This is the latest edition of Baker & McKenzie’s column on developments in EU law relating to IP, IT and telecommunications. This article summarises recent developments that are considered important for practitioners, students and academics in a wide range of information technology, e-commerce, telecommunications and intellectual property areas. It cannot be exhaustive but intends to address the important points. This is a hard copy reference guide, but links to outside web sites are included where possible. No responsibility is assumed for the accuracy of information contained in these links.     

龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

目的建立用于显微捕获单细胞技术的龙胆紫染色法并评价其应用效果。方法制作20枚口腔拭子脱落细包悬液,配制0．05g／mL龙胆紫染液。取100μL口腔细胞悬液加入0．15、0．25、0．5、1．0、2．0μL染色液,考察最佳染色浓度;争别染色5、10、30、60min,考察最佳染色时间;用最佳条件染色后抓捕3个细胞,采用联合LV-PCR技术扩增并进行DNA分驯佥测,进行重复试验20次,并对同一检材未经染色的抓捕细胞进行检测,用于比对STR分型成功率。将龙胆紫染色法用于案例检材的口腔上皮细胞分离检验。结果1001μL细胞悬液加入0．5止0．05g／mL龙胆紫染液,染色5min,胞核呈紫工色,与胞浆对比明显;染色时间延长不影响染色效果及细胞分离检验结果。优化后的龙胆紫染色法对低体积扩增无归显抑制（P〉0．05）。应用此染色法于案例检材,胞核标识清晰,STR分型结果达同一认定标准。结论龙胆紫染色法刚于细胞核的发现,有助于提高显微捕获单细胞技术的检测效能。     

清代遗骸Y-STR检验1例

法医学实践中经常遇到对骨骼DNA检验的案例,但对保存超过100年的骨骼样本的检验报道较少。本文成功提取到150年前土埋遗骸的骨骼DNA,采用Y—filer试剂盒在9700型扩增仪上进行扩增,3130XL型遗传分析仪进行检测,得到遗骸Y—STR分型,并与对照样本比对,确认了遗骸身份。     

关于法庭科学DNA数据库若干问题的探讨

本文论述常染色体STR基因座的选取和数量对数据库直接匹配、亲缘关系检索、失踪人员检索等数据库检索应用可能带来的影响,指出大容量DNA数据库在应用中可能出现的问题,并讨论应用数据库时需要考虑的群体和群体内差异,以及Y染色体和线粒体DNA对数据库检索的辅助作用。旨在为今后建设和完善具有中国特色的大容量DNA数据库提供参考和帮助。     

人体接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响

目的比较3种常见的接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响。方法收集烟蒂、牙刷、纱线手套各10份;分别采用95℃、70℃直接裂解和TNE、SDS、PK预消化方式进行前处理,再用磁珠法提取纯化DNA,并进行DNA定量,统计提取的接触DNA量和IPC CT值;同时用Sinofiler复合扩增系统进行STR分型检测。结果 3种方法前处理后用磁珠提取的DNA纯度均较高I,PC CT值在26.63～27.19之间。用预消化法获得的DNA量高于裂解法,而95℃裂解与70℃裂解方法提取的DNA量无显著性差异。STR扩增检测结果亦表明,采用预消化法处理的样品STR分型成功率高于裂解法9,5℃与70℃裂解方法处理的样品STR分型成功率无显著性差异。结论人体接触检材采用预消化磁珠法提取DNA,有助于提高STR检验成功率。     

单核细胞增生李斯特菌野毒株prfA基因的克隆及其分子特征分析

利用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌(LM)TA野毒株prfA基因进行扩增,将其克隆后测序,并对该分离株prfA基因及其编码蛋白进行分子特征和遗传变异分析。结果显示,TA株prfA基因全长为714bp,编码237个氨基酸。通过对推导的prfA蛋白氨基酸序列结构域分析发现,该蛋白从N端到C端分别包括1个β-环结构域(18～97aa)、1个α-螺旋构成的C区(110～136aa)、1个α-螺旋构成的D区(136～155aa)、1个由螺旋-转角-螺旋构成的HTH结构域(170～196aa)和1个由α-螺旋构成的亮氨酸拉链G区结构域(211～237aa)。通过对GenBank中登录的35株分离株prfA基因遗传变异分析发现,不同地域分离株的prfA基因在核苷酸水平以点突变为主;TA株第197位氨基酸由赖氨酸(Lys,K)突变为天冬氨酸(Asn,N)。