热休克蛋白的分类,基因调控及其功能

已往研究发现,所有生物体细胞在环境温度突然升高时,会发生一种非常相似的反应,最初称之为热休克反应（heash。kresPOns）,其典型表现为细胞内一组蛋白质的表达迅速增加,乃将其命名为热休克蛋白（Heatshockproteins,HSPs）。随后,人们发现热休克反应除了能被热损伤所诱导外,也能被其他因素诱导,其中包括：氨基酸类似物、各种重金属、代谢性毒物、缺血、缺氧、损伤等。目前认为各种应激因子引起的热休克反应更确切地应称为应激反应（stressresronse）,是一种以基因表达和调控方面变化为主的细胞应激反应,热休克蛋白应称为应激…     

大鼠闭合性脑损伤后血清髓鞘碱性蛋白研究

用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心方法研究了大鼠闭合性弥漫性脑损伤后,血清髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）含量的时序变化。正常大鼠血清中ＭＢＰ为６．１６３３±１．５３０１ｎｇ／ｍｌ（Ｘ±Ｓ）。伤后立即死亡组大鼠的血清ＭＢＰ为１１．３８１８±２．６５７４ｎｇ／ｍｌ,伤后１５ｍｉｎ,为１０．８３１９±２．３１３５ｎｇ／ｍｌ,此血清高ＭＢＰ水平一直持续到伤后３天。伤后第４天和第５天,血清ＭＢＰ基本恢复到正常水平。立即死亡组、伤后１５ｍｉｎ组和伤后３天之内各组的ＭＢＰ水平与正常组和伤后第４天和第５天的比较,Ｐ＜０．０１。认为可进一步探讨将血清ＭＢＰ含量的检测,作为脑震荡性脑损伤的辅助生化诊断指标之一     

脑络欣通对脑缺血再灌注模型鼠神经细胞凋亡及P53蛋白表达的影响

目的: 研究脑络欣通对脑缺血再灌注模型鼠神经细胞凋亡及P53蛋白表达的影响.方法:采用饥饿、劳累、高脂饮食等多因素复制大鼠气虚血瘀证模型,然后用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉2 h,复制局灶性脑缺血再灌注模型,于再灌注1,3 d,用TUNEL法和免疫组化法分别检测脑缺血半暗带凋亡细胞和P53蛋白表达.结果:与模型组比较,脑络欣通组脑缺血半暗带的凋亡细胞和P53蛋白表达显著减少(P＜0.05).结论:抑制P53蛋白的表达是脑络欣通抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一.     

基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的间接ELISA检测方法的建立与应用

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种危害性极强的病毒性疾病,该病的发生和流行对全球养猪业、猪肉食品供应及经济发展造成了巨大影响.ASFV基因组较大、编码蛋白众多,但目前很多病毒蛋白的功能尚不清楚.由于缺乏有效...     

禽传染性支气管炎病毒N蛋白保守B细胞抗原表位的鉴定

应用噬菌体随机十二肽库技术对针对IBV GX-YL5株N蛋白的单抗N2D5进行抗原表位的鉴定。将淘选得到的噬菌体随机十二肽库第3轮洗脱液进行二代测序,将测序结果中出现频率最高的3个十二肽序列合成肽后验证是否为模拟表位;根据获得的模拟表位预测相应的天然表位序列并合成多肽和原核表达进行验证,同时对获得的天然表位进行保守性和交叉反应性分析。结果显示,第3轮筛选洗脱液测序出现频率最高的3个序列中有2个为模拟表位,即VVGRAMAYSTIP和DGVLLGTSGEST;预测天然表位序列为¹⁵⁸IPLNRGRGGRST¹⁶⁹;预测天然表位的合成肽的ELISA和Dot-blotting分析以及其原核表达蛋白的Western-blotting分析表明,¹⁵⁸IPLNRGRGGRST¹⁶⁹是IBV的一个天然表位序列;保守性和交叉反应性分析显示该天然表位具有高度保守性。结果表明,本研究成功鉴定出IBV GX-YL5 N蛋白上的一个高度保守的表位¹⁵⁸IPLNRGRGGRST¹⁶⁹     

PRRSV中和表位串联Fc分子的表达与免疫原性鉴定

为融合表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）中和表位和Fc分子,首先合成PRRSVGP3和GP5的串联B细胞中和表位与鼠Ig G1-Fc的m Fc-GP35-Bp基因片段,将其克隆到pFastBac载体上,构建重组质粒pFastBac-m Fc-GP35-Bp,经蓝白斑筛选出重组杆粒Bacmid-m Fc-GP35-Bp,并转染昆虫Sf9细胞,获得重组杆状病毒rBV-m Fc-GP35-Bp。通过Western-blot分析重组蛋白的反应原性,免疫小鼠后,通过间接ELISA检验其免疫原性,病毒中和试验检测中和抗体水平。结果显示,m Fc-GP35-Bp蛋白在昆虫Sf9细胞中获得表达,且可分泌至上清;用m Fc-GP35-Bp蛋白免疫小鼠后,ELISA测定抗体效价可达1∶100 000,三免后第4周仍可检测到较高抗体水平;中和抗体效价介于1∶40和1∶80之间。结果表明,表达的重组m Fc-GP35-Bp蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,可刺激机体产生中和抗体,与Fc分子融合表达延长了抗体在血清中存在的时间,本试验为PRRSV中和表位疫苗的研发奠定了基础。     

电击死大鼠皮肤超微结构及心肌HIF-2α、H-FABP的表达变化

目的 观察电击死大鼠皮肤超微结构,检测心肌细胞中缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factor-2α,HIF-2α)和心脏型脂肪酸结合蛋白(heart type-fatty acid-binding protein,H-FABP)的表达变化,为电击死的法医学鉴定提供依据.方法 建立大鼠电击模型,将...     

PRRS病毒M蛋白在大肠埃希氏菌中的高效表达

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF6基因从pGEM-T-ORF6重组质粒中亚克隆到pET-5a原核表达载体上,成功构建重组表达质粒pET5-ORF6.将其转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导表达,其细菌裂解物经SDS-PAGE可检测到分子质量约为19 ku的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白占菌体总蛋白的26.8%,采用重组菌裂解物作为包被抗原进行ELISA检测,结果表明表达的蛋白显示特异性.     

犬瘟热病毒昆明分离株的生物学特性

从1只曾接种过犬瘟热弱毒疫苗但又发病的宠物犬血样中分离到1株犬瘟热病毒(CDV),命名为CDV昆明分离株(CDV-KM)。该毒株可使Vero细胞产生以细胞融合及空泡化为特征的细胞病变,病毒效价为105.8TCID50/mL或1.76×106PFU/mL,并能在鸡胚绒毛尿囊膜、鸡胚成纤维细胞及MDCK细胞上增殖。微量中和试验结果发现,自制的犬抗CDV-KM株同份血清对CDV-KM株与参考毒株CDV-Onder-stepoort的中和抗体效价即半数保护量分别为1:142和1:132,显示二者未存在明显的中和表位差异。RT-PCR、RFLP和DNA测序分析结果显示,使用参照组合引物CDV-P2/P3/P4扩增,均可得到被认为指示弱毒株特征的177bp核酸片段;而H蛋白全长基因扩增产物未见能指示野生毒株特征的NdeⅠ和SspⅠ酶切位点;H蛋白基因与Onderstepoort小空斑变异株、鸡胚适应株和大空斑变异株的核酸序列同源性分别为98.84%、98.90%和100%。表明该分离株属于疫苗基因群。     

缺失信号肽和跨膜区的PRRSV GP5融合蛋白基因的表达

通过分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株GP5基因序列,设计了2对引物,经PCR扩增,获得不含信号肽和跨膜功能区的GP5基因片段,长度分别为121 bp和248 bp。应用酶切位点相连构建融合基因技术,将2段基因亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组表达质粒pET-GP5。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导后获得高效表达。免疫印迹试验证实,表达的融合蛋白能与特异性血清抗体反应,表明表达的PRRSV GP5蛋白具有良好的生物学活性。