猪圆环病毒2型ORF2与EGFP融合蛋白表达载体的构建及在鸭心肌细胞中的表达

为研究猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因在异源细胞上的表达及生物学特性,构建了PCV2ORF2与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因真核表达载体pEGFP-N1-ORF2。采用脂质体法转染体外培养的鸭心肌细胞后,通过直接荧光观察EGFP-ORF2融合蛋白在鸭心肌细胞中的分布定位,经RT-PCR、间接免疫荧光方法检测ORF2基因在鸭心肌细胞中的表达。结果显示,转染48 h后有绿色荧光出现,RT-PCR和间接免疫荧光法检测均为阳性。证实,PCV2 ORF2基因在鸭心肌细胞内获得了成功表达。     

血栓调节蛋白表达与大鼠脑挫伤时间的相关性

目的观察大鼠实验性脑挫伤后不同时问内脑组织、血浆中血栓调节蛋白（TM）的变化,探讨其与损伤经过时间的关系。方法参照Feeney’S法建立大鼠脑挫伤模型,在伤后1h、4h、8h、12h、24h、3d、7d7个时问点提取心帆及脑组织检材,运用酶联免疫法（ELISA法）检测f血浆TM含量,用免疫组织化学方法检测脑组织中TM刖性表达。检测数据应川SPSS13．0统计软件分析处理。结果与对照组比较,TM的阳性表达、IOD值和血浆含量存挫伤后4h开始增加,至24h达到高峰,随后逐渐减少,伤后3dTM血浆含量仍高于对照组,7d后基本恢复至对照纰水平。伤后4h～3d之间各组与对照组比较均有统计学意义（P〈0．05）。结论脑挫伤后TM表达随时间变化的规律性有助于推断呐损伤时间。     

小反刍兽疫病毒非结构蛋白V基因的克隆及其编码蛋白的结构与功能

采用RT-PCR技术从小反刍兽疫病毒总RNA中扩增到P基因一段896bp序列,克隆至pET-30a(+)载体中,对其进行最大开放阅读框691位定点突变(插入一个G碱基),获得小反刍兽疫病毒V基因,利用生物信息学软件对麻疹病毒属V蛋白氨基酸序列进行比对,同时使用I-TASSER服务器对小反刍兽疫病毒V蛋白三级结构进行同源建模,分析其结构与功能。结果显示,小反刍兽疫病毒V蛋白氨基酸序列与麻疹病毒、犬瘟热病毒、牛瘟病毒和海豹瘟病毒V蛋白的相似性分别为61.1%、56.0%、61.7%和51.7%,三级结构预测显示V蛋白由多α-螺旋的N-端结构域、中间结构域和含锌指结构的C-端结构域组成。本研究成功克隆了小反刍兽疫病毒V基因,预测分析了V蛋白结构和功能的关系,为其分子生物学和功能的进一步研究奠定了基础。     

埃博拉病毒苏丹型核蛋白的原核表达及纯化

将目的基因NP亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中,构建了重组表达载体pET-28(a)-S-NP,然后用重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,并利用IPTG诱导蛋白表达。将表达的蛋白利用His-Band Ni+柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果显示,重组质粒经双酶切后可得到与目的片段长度相同的特异性条带;测序结果显示此特异性条带与参考序列完全匹配,没有突变。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,表达正确。结果表明,成功构建了重组表达质粒,且表达产物正确。     

大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系

目的研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct值的线性关系,并建立推断早期死亡时间的线性回归方程。结果随死亡时间的延长,3种组织内β-actin mRNA的水平均发生了显著的下降,心肌和肾组织中β-actin mRNA死后24h内的降解速率更显著,而脑组织中β-actin mRNA的降解速率变化不明显。各组织的Ct值变化与死亡时间之间存在一定的线性关系。结论大鼠死亡早期脑、心肌和肾组织内β-actin mRNA降解明显,可以通过其降解规律来推断早期死亡时间。     

换届选举警惕“护廉网”漏洞——干部任前公示中一种不容忽视的现象

干部任前公示期间问题难查出,任后问题败露后,原来群众举报反映的大都是事实的现象,在干部腐败案件中带有一定的普遍性,值得警惕     

文化“魂”与“体”辩证关系刍议

党的十七届六中全会《决定》指出,社会主义核心价值体系是兴国之魂,是社会主义先进文化的精髓,决定着中国特色社会主义发展方向。要把社会主义核心价值体系融入国民教育、精神文明建设和党的建设全过程,贯穿改革开放和社会主义现代化建设各领域,     

警察防卫控制训练理念新探

警察防卫控制训练长期以来主要是通过“教师讲解示范一学生模仿练习”的形式进行教学训练,注重整齐划一、严格的组织纪律,学生的个性发展被压抑,忽视了学生的学习方法的培养及学生生理、心理和认知水平的发展。在警察防卫控制训练中引入元认知理论、快乐体育理论、终身体育理论,来指导学生的训练,让学生懂得学,也懂得为什么要这样学,在辛苦的警察防卫控制训练中找到快乐,从而为树立终身进行防卫控制训练打下基础,提高公安队伍的战斗力。     

公安院校警体技能课余训练制约因素分析及机制构建探讨

正通过文献资料,实地访谈、坐谈和个案调查等方法,对四川警察学院以及部分同类兄弟院校警体技能课余训练现状进行了调查,分析探讨了当前公安院校课余训练开展过程中存在的问题,并针对问题提出理论支持和实践参考。研究发现,当前我国部分公安院校警体技能教育“重课堂、轻课余”现象仍然存在。课余训练科目单一、竞赛形式传统;学生终身体育意识不强;师资匮乏,能动性不高;场地设备有限;领导重视不够;课余训练管理保障机制欠缺等问题,是制约课余训练良性开展的主要素。     

IQ损伤值在智力损伤鉴定中的应用价值

目的探讨IQ损伤值评估在智力损伤鉴定中的应用价值。方法对266例智力损伤鉴定资料进行回顾性分析,采用"事前智力水平的估计方法"评估伤前IQ,按IQ损伤值(伤前与伤后IQ的差值)对智力损伤进行评定,并与根据原鉴定当时IQ评定的智力损伤结果及与专家意见进行比较。结果鉴定当时IQ评定结果与IQ损伤值评定结果不一致率为40.23%(107/266),二者一致性差(k=0.367);鉴定当时IQ评定结果与专家最终评定意见一致率为63.91%,而IQ损伤值评定结果与专家最终评定意见一致率为89.85%,一致性好于前者。结论在智力损伤鉴定中,根据IQ损伤值比根据鉴定当时IQ评定结果做出的鉴定结论更为科学。伤前IQ评估在智力损伤的司法鉴定中有较重要的应用价值。