金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB-ClFA共表达质粒的构建与原核表达

采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌纤黏蛋白B的D区和纤黏蛋白原凝集素A的A区基因片段进行了特异性扩增,并通过重叠延伸PCR扩增了FnBPB-ClFA串联基因,构建了克隆质粒pMD19-FnB-PB-ClFA。将该基因片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了表达质粒pET-FnBPB-ClFA,并将其转入宿主菌BL21(DE3)。SDS-PAGE分析表明,在1mmol/L IPTG诱导下,在51ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带。Western-blot分析表明,所表达的蛋白与目的蛋白一致。上述结果表明,该融合基因在原核细胞中成功表达。     

鸭疫里氏杆菌地区流行株的分离与外膜蛋白A的变异性分析

2010年从安徽省和江苏省境内发病鸭的病理组织中分离到8株鸭疫里氏杆菌(RA),分别被命名为AH1、AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3、JS4,其中AH1、JS4为血清1型,AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3为血清2型。8株RA的菌体形态、生化特性、PCR鉴定结果相同,但致病力不同,AH1毒力最弱,对鸭的发病致死率仅为16.7%。序列分析结果显示,8株分离菌的外膜蛋白A(OmpA)基因的核苷酸序列同源性为96.9%～100%,氨基酸序列同源性为98.2%～100%。将8株RA与GenBank中登录的其他55株RA的OmpA进行变异性分析,结果其核苷酸序列同源性为89.6%～100%,氨基酸序列同源性为90.2%～100%。从系统发育进化树中可将这63株RA分为4个亚群,不同国家和地区的RA株在亚群中没有显示地域或时间特征,而是呈现出了互相交叉的现象,RA的OmpA差异与血清型、分离时间和分离地点没有必然的联系,本试验近期分离的8个RA株分布在2个亚群中。     

大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

以热灭活的大肠杆菌O157∶H7(E.coli O157∶H7)菌体抗原为免疫原,E.coli O157∶H7菌体结合脂多糖(LPS)为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体。采用改良过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测E.coli O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法。结果,成功制备了9株稳定分泌E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体的杂交瘤细胞,其中7F9和7G2为LPS O-特异性多糖(O-SP)单克隆抗体,与E.coli O157∶H7菌体具有较好的反应性。此双抗体夹心ELISA方法对与受试的非O157菌株没有交叉反应,对E.coli O157∶H7纯培养菌液的检出下限为3×104CFU/mL。结果表明,建立的ELISA检测方法对E.coli O157具有较高的特异性和灵敏度,该方法有望与其他方法相结合用于对E.coli O157∶H7的检测。     

英美诽谤法的特殊抗辩事由研究

英美诽谤法为实现保护言论自由和尊重个人名誉的平衡,设计了诸多精细的特殊抗辩事由,包括以真实性作为完全抗辩的依据;涉及公共利益的、基于事实的、真诚的公允评论;法律授予特殊场合的特权抗辩(绝对特权和受约制特权)及制定法规定的严格责任抗辩事由.这些抗辩事由使英美法诽谤法实现了法益平衡的目的.     

超高分子量聚乙烯防弹材料在人工老化条件下的抗弹性能研究

本文通过对超高分子量聚乙烯防弹材料在热、湿热和光老化试验中的抗弹极限V50性能的考核,研究了进口和国产两种PE防弹材料样品在不同环境条件下的抗弹性能变化,得到了不同环境因素对PE防弹材料样品的影响规律,为软质防弹衣在服役期的使用和贮存条件提供了理论依据.     

商业秘密犯罪抗制对策论略

在日益发达的经济全球化的信息时代,侵犯商业秘密犯罪正如附生于经济体的“毒瘤”,吞噬着商事企业的健康活力。2009年的“力拓案”让国人对侵犯商业秘密犯罪危害的认识更深了一层,中国此类犯罪的猖獗令人再度警觉。在全球范围内,侵害商业秘密犯罪形势也不容乐观,美德日等国的“商业间谍”屡屡兴风作浪,给全球经济的健康发展造成巨大危害。各国都力图通过一些法律来遏制此类犯罪,中国也应从着手从立法、司法、行政管理、企业管理制度、商业伦理、传统文化等多重层面入手,来构建系统的侵犯商业秘密犯罪的抗制对策体系。     

诉讼时效抗辩权的法官释明问题探讨

我国现行立法对于诉讼过程中法官得否对诉讼时效进行释明的问题持否定态度。各国立法的规定以及学界的讨论也大体遵循此种思路。该问题涉及到实体法和程序法两方面,文章通过诉讼时效及其抗辩权、释明权和诉讼模式的分析,提出了诉讼时效抗辩权法官释明的具体标准,并对我国诉讼时效抗辩权法官释明的构建提出几点思考。     

鸡骨钙素多克隆抗体及其间接竞争ELISA试剂盒的制备与应用

为了建立鸡骨钙素间接竞争ELISA检测方法,使用原核表达的重组鸡骨钙素蛋白作为免疫原,免疫4只雄性新西兰大白兔,成功获得兔抗鸡骨钙素多克隆抗体。该抗体能用于Western-blot检测天然骨钙素。以天然提取的鸡骨钙素为包被抗原,葡聚糖A亲和纯化后的兔抗鸡骨钙素多克隆抗体为一抗建立ELISA反应。结果,最佳包被抗原浓度为0.5μg/mL,最佳抗体工作浓度为1∶10 000,标准品浓度在50～0.39ng/mL间,具有较好的线性关系,检测下限为0.34,批间变异系数和批内变异系数分别为10.6%和4%。使用制备的试剂盒测定30个鸡血清样本及其倍比稀释后的血清样本;结果,鸡血清骨钙素浓度为4.42～19.83ng/mL,稀释前与稀释后测定的血清样本浓度相关性r2=0.952。结果表明,制备的鸡骨钙素间接竞争ELISA试剂盒可用于定量检测鸡血清骨钙素含量。     

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒(ALV)的方法,以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/mL,且与禽类常见的病毒鸡传染性支气管炎病毒、马立克病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒等无交叉反应。动物感染试验结果表明,用该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌物中的禽白血病病毒。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法的符合率分别为96.5%和93.8%。证实,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。     

家庭理财应注意的问题

所谓家庭理财,就是利用企业理财和金融管理的方法对家庭经济（主要指家庭收入和支出）进行计划和管理,增强家庭经济实力,提高抗风险能力。简单说就是利用开源节流的原则,增加收入,节省支出,用最合理的方式来达到目标。这样的目标小到增添家电设备、外出旅游,大到买车、购屋、储备子女的教育经费直至安排退休后的晚年生活,等等。