微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bin91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物.采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoR I酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91.再次测序正确后将其用Sac Ⅰ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83 ku的重组Bm91蛋白.     

猪肺炎霉形体Dnak-P97融合基因的表达及其产物的生物学活性

应用DNA重组技术,将猪肺炎霉形体黏附因子P97 C末端基因与猪肺炎霉形体伴侣蛋白Dnak C末端基因同时克隆到pET-30a表达载体上,构建了重组表达载体.将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h.用BugBusterTM Ni-NTA His·Bind纯化试剂盒在自然条件下对目的蛋白进行了纯化;经Western-blotting和动物试验,证实,该蛋白具有良好的生物学活性.     

胸膜肺炎放线杆菌apx I A基因在不同宿主系统中的表达及密码子偏好性分析

用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株APP259的基因组DNA中,扩增了约954 bp的apx I A基因片段,分别构建了大肠杆菌表达栽体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A.对目的基因密码子偏好性进行了分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2%;有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%.利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A分别进行表达.结果显示,目的基因在大肠杆菌中能以包涵体形式进行高效表达,其融合蛋白占菌体总蛋白的32%;在毕赤酵母中则以较低水平分泌表达至培养基的上清液中,40倍浓缩后方能检测到少量目的蛋白.证实,目的基因序列中的密码子偏好性影响其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达.     

细粒棘球绦虫六钩蚴EG95抗原基因的克隆及原核表达

利用RT PCR从激活的细粒棘球绦虫六钩蚴中扩增了EG95 cDNA,并亚克隆至原核表达载体pGEX 4T 1上,转化至大肠埃希氏菌BL21,用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白质。结果表明,从六钩蚴中克隆到了EG95 cDNA,序列长度为481 bp,包括471 bp的开放阅读框,与新西兰株EG95抗原基因序列完全一致;SDS PAGE电泳结果显示,重组表达质粒产生了约42 ku的目的带,其中EG95蛋白质的分子质量约为15.2 ku,与预期结果一致;Western blotting试验检测表明,融合表达产物可与囊性包虫病人血清发生反应。试验结果提示,EG95 基因高度保守,所表达的EG95蛋白作为抗原疫苗具有广泛的适用性。     

新城疫病毒HN基因在CHO/dhfr-细胞中的表达

为了实现新城疫病毒血凝素一神经氨酸酶(HN)基因在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达,构建了同时含有HN基因和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的真核表达载体pCI-HN-D.将纯化后的重组质粒通过脂质体转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢(CHO/dhfr)细胞,经3轮氨甲喋吟加压筛选,获得了稳定表达HN基因的细胞株.用间接免疫荧光和免疫印迹检测目的蛋白的表达情况.结果表明,HN基因在CHO/dhfr细胞中成功表达.     

林志慧赴孝感调研保障房建设

8月5日,省人大常委会副主任林志慧赴孝感市调研保障性住房建设情况。林志慧一行先后到孝感市红光花园、西城嘉园、沙沟廉租房住宅小区、三军帅府等一个建成和三个在建的保障性住房建设项目现场实地考察,重点就工程建设质量方面问题同当地领导、项目负责人和工程技术人员进行探讨,深入保障房入住户进行     

婚姻中“七年之痒”的进化因素

20世纪70年代末80年代初,中共中央、国务院提出,要普遍提倡一对夫妇只生育一个孩子。在此情况下,计划生育政策一度抽紧。地方政府最终把"提倡"当作"政治任务"来抓,基本只准生一个孩子。这就形成了国家生育政策与家庭个人生育需求之间的重大反差。从而也就出现了于1985后离婚率的逐步大幅度攀升的社会现象,引发了社会界、学术界的关注和讨论,"七年之痒"的西方概念由此也引进到了中国,并分析和讨论到至今。     

让文明成为城市的传承基因——陕西省宝鸡市创建全国文明城市纪实

陕西省宝鸡市是炎帝故里，周秦文化的发祥地，神农在这里教民稼穑，周公在这里制礼作乐……自古以来，宝鸡文明都是中华文明最重要的组成部分。最近十多年，宝鸡市将创建全国文明城市作为全市科学发展的一项战略任务常抓不懈，让文明成为城市的传承基因。     

政治清明的传统基因与时代内涵——新时期官员腐败行为及其治理系列之四

坚决反对腐败、建设廉洁政治,是中国共产党一贯坚持的鲜明政治立场,是人民高度关注的重大政治问题。从历史的角度来看,政治清明内含着丰富的传统因素,而时代的发展又赋予了它诸多崭新的内涵。尊重历史传统、构建现代法治、完善民主政治,则成为实现我国政治清明的必然要求。     

国学引导确定职场努力方向

正国学精髓宽广而伟大,你在不知不觉中就会运用到,在竞争的职场上,国学也帮我在职场中确立了正确的思想,在工作中起到了激励作用。职场中"君子坦荡荡"对于我们这些平常百姓来说,国学的影响必离不开我们的工作与生活,且息息相关,潜移默化,无处不在。上班之初,我在一家铁路站段从事工程技术工作。因文章多有发表、获奖,故经常受邀参加路局报社组织的外