无血凝性兔出血症病毒VP60蛋白分子特性的分析及其在大肠杆菌内的高效表达

分离出1株在4、25、37℃条件下均不能凝集人"O"型红细胞的兔出血症病毒(RHDV),命名为SQ-1株;采用RT-PCR扩增获得病毒主要结构蛋白VP60蛋白基因,并对目的基因进行测序及分析;将目的基因定向克隆入原核表达载体pET-30a的多克隆位点,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,纯化重组蛋白,用Western-blot检测其反应原性。测序与同源性分析结果显示,该毒株属于RHDV抗原遗传变异株(RHDVa),所扩增的VP60基因的ORF为1 740bp,编码579个氨基酸残基,与世界上其他RHDV毒株的核苷酸序列的同源性为89.9%～98.0%,与已报道的无血凝特性的病毒株whn-1株及低血凝性的Rainham株的核苷酸序列的同源性分别为95.2%及90.8%。重组质粒经IPTG诱导后目的基因获得表达,重组蛋白与预期大小一致,分子质量约为60ku,主要以包涵体形式存在。Western-blot检测证实,纯化蛋白能够与RHDV阳性血清发生良好的杂交反应,说明该重组蛋白具有良好的反应原性。     

应用ABR法评定外伤性耳聋

本文通过对40例外伤性耳聋的症状、病变和听力检查,重点讨论了鼓膜损伤所致的听力障碍,其损伤程度不超过50dB,给法医学鉴定中耳损伤程度提供了客观数据。进一步验证了ABR检查在判定听力损失的意义,对夸大、伪聋的识别优于其它听力检查。从临床耳聋程度分类法就《人体重伤鉴定标准(试行)》中,关于听力损伤的重伤标准进行了探讨。     

NGO的三重功能——以地震救援经验为基础的分析

汶川大地震救援行动中数以万计公民的积极参与,为中国NGO的发展和研究积累了宝贵的历史经验.在提供信息、快速反应、疏通瓶颈三个方面,NGO的独特作用是不可替代的.NGo的志愿精神、专业精神、合作精神等共同构成了公民社会进一步发育的要件.     

汲取宝贵经验 扎实做好常态化疫情防控工作

<正>自“0801”疫情暴发以来,海南省委、省政府坚决贯彻落实党中央决策部署,在国务院联防联控机制的有力指导下,全省人民万众一心齐心抗疫,取得了疫情阻击战的重大胜利,群众生产生活逐步恢复正常秩序。但在应对本轮疫情挑战中,海南暴露出在抗疫物资储备、应急反应机制、公共卫生设施布局、基层治理等方面存在的突出问题。如何总结本轮疫情防控工作中的有效做法和经验教训,形成一套可参考、可借鉴的机制和办法？笔者认为,应尽快补齐我省疫情防控和公共卫生领域短板,     

肾康颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者血清超敏C-反应蛋白及凝血功能的影响

目的 观察慢性肾炎脾肾亏虚证患者血清超敏C-反应蛋白（high-sensitive C-reactive protein, hs-CRP）和凝血功能的变化及肾康颗粒对其干预作用。方法 选择慢性肾炎脾肾亏虚证患者55例,随机将其分为对照组28例和试验组27例,并设正常组20例。两组患者均给予常规基础治疗,试验组在此基础上加服肾康颗粒,疗程共8周。比较两组治疗后临床疗效,检测治疗前后尿白蛋白肌酐比值(urinary albumin to creatinine ratio,UACR)、24 h 尿蛋白定量(24-hour urine protein,24hUP)、血白蛋白（albumin, Alb）、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, SCr)、hs-CRP、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶时间（thrombin time,TT）和纤维蛋白原(fibrinogen,Fib)的变化。结果 试验组临床疗效显著优于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后24hUP、UACR均较治疗前降低,血Alb较治疗前升高(P<0.05),试验组改善程度优于对照组(P<0.05)。两组患者治疗前血清hs-CRP、Fib水平较正常组显著升高,PT、APTT、TT明显缩短(P<0.05),治疗后两组血清hs-CRP、Fib水平较治疗前明显下降,PT、APTT、TT较治疗前明显延长(P<0.05）,试验组改善程度优于对照组(P<0.05)。结论 肾康颗粒能有效改善慢性肾炎脾肾亏虚证患者的临床症状,减少尿蛋白,其作用机制可能与降低血清hs-CRP,抑制体内微炎性反应,改善高凝状态有关。     

芦黄颗粒治疗动脉粥样硬化60例

目的 观察芦黄颗粒对动脉粥样硬化患者动脉功能、血脂、血液流变性及血清炎症因子的影响。方法 将符合纳入标准的动脉粥样硬化患者60例随机分为治疗组及对照组,每组30例;治疗组在标准化西医治疗基础上联用芦黄颗粒,对照组仅予西医标准化治疗,治疗8周后比较两组患者中医证候积分、颈动脉内膜中层厚度、阻力指数、极速成像脉搏波传导速度、血脂、血液流变性、血清炎症因子（C- 反应蛋白、白细胞介素- 6、肿瘤坏死因子- α）及肝肾功能的变化。结果 ①治疗后两组中医证候积分均有改善（P<0.05）,且治疗组明显优于对照组（P<0.05）;②治疗后两组双侧颈动脉极速成像脉搏波传导速度、阻力指数均有改善（P<0.05）,且治疗组优于对照组（P<0.05）,双侧颈动脉内膜中层厚度治疗前后差异无统计学意义（P>0.05）;③治疗后两组血脂、血清炎症因子均有改善（P<0.05）,且治疗组优于对照组（P<0.05）;④治疗后两组血液流变学指标均有改善（P<0.05）,且治疗组明显优于对照组（P<0.05）;⑤两组治疗后肝肾功能均无明显异常。结论 芦黄颗粒可通过改善患者动脉功能、血液流变性,调节血脂及血清炎症因子水平,延缓动脉粥样硬化的进程。     

畅心饮治疗冠心病心绞痛痰瘀搏结证临床研究

目的 观察畅心饮治疗冠心病心绞痛的疗效及其可能的机制。方法 将冠心病心绞痛符合痰瘀搏结证患者随机分为对照组和治疗组,每组40例,对照组按标准西医治疗,治疗组在其基础上加服畅心饮。观察两组心绞痛和中医证候疗效,以及治疗前后总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、脂蛋白a\[(lipoprotein (a),Lp(a)\]、超敏C反应蛋白（high-sensitive reactive protein,hs-CRP）、空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）、糖化血红蛋白A1c（glycosylated haemoglobin A1c,HbA1c）、血前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9（proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9）水平。结果 治疗组心绞痛和中医证候疗效均优于对照组（P<0.05）。与治疗前比较,对照组治疗后hs-CRP、TC、LDL-C、HDL-C、Lp（a）、FPG、HbA1c、PCSK9水平均无明显变化（P>0.05）,治疗组治疗后hs-CRP、TC、LDL-C、Lp（a）、PCSK9水平显著降低（P<0.05）;治疗组治疗前后hs-CRP、TC、LDL-C、PCSK9降低值显著大于对照组（P<0.05）。结论 畅心饮治疗冠心病心绞痛痰瘀博结证的机制可能是通过降低血PCSK9水平以降低血脂水平与炎症反应以改善动脉粥样硬化。     

高生物利用度姜黄素对肿瘤坏死因子-α致人脐静脉内皮细胞炎症损伤模型的保护作用

目的 观察纳米制姜黄素（PURCUMIN ）与普通姜黄素（Curcumin 95%）的体内药物代谢动力学特征及体外抗炎作用。方法 分别灌胃给予200 mg/kg的PURCUMIN 和Curcumin 95%,观察两者在SD大鼠体内的药物代谢动力学参数,并计算相对生物利用度以评价PURCUMIN 的制剂优势。利用肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）刺激人脐静脉内皮细胞,在体外模拟炎症诱导的内皮细胞损伤模型。以关键炎症因子水平、关键炎症因子的基因表达水平及核因子-κB抑制蛋白（inhibitor of nuclear factor-κB,IκB）/核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）信号通路中关键蛋白的表达水平,评价两种姜黄素制剂在不同给药浓度和不同作用时间下对内皮细胞的保护作用。结果 在相同给药剂量（200 mg/kg）下,PURCUMIN 相较于Curcumin 95%在大鼠体内的暴露量增加了17.5倍。姜黄素能有效抑制TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症,且PURCUMIN 的抗炎效果更为显著。在相同干预时间下,低浓度（1 μmol/L）的PURCUMIN 即可显著降低细胞培养上清中前列腺素E2、白细胞介素-1β、白细胞介素-6、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）的水平（P＜0.05）,抑制环氧合酶-2、MCP-1 mRNA表达（P＜0.05）,抑制IκB/NF-κB信号通路的激活（P＜0.05）,其药理作用与高浓度（10 μmol/L）Curcumin 95%相当;在相同干预浓度下,PURCUMIN 在2 h时即可显著降低上述炎症因子水平,抑制IκB/NF-κB信号通路激活（P＜0.05）,其药理作用与Curcumin 95%干预4 h时相当。结论 PURCUMIN 在较低浓度、较短时间即可发挥较好的抗炎作用,这可能与其显著提升的生物利用度有关。     

复方健胰胶囊对非酒精性脂肪肝病患者血清超敏C-反应蛋白、肿瘤坏死因子-α和白介素-18的影响

目的 观察复方健胰胶囊对非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）患者血清相关炎性因子的影响,探讨其作用机制。方法 将60例NAFLD患者分为对照组和治疗组各30例,对照组予常规治疗,治疗组在对照组基础上加用复方健胰胶囊,疗程1个月,观察两组中医证候疗效及两组治疗前后血清超敏C-反应蛋白（high sensitive C-reactive protein, hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-18（interleukin-18, IL-18）的变化。结果 治疗组中医证候疗效显著优于对照组（P<0.01）。治疗后对照组hs-CRP、IL-18均较治疗前显著降低（P<0.01）;治疗组治疗后hs-CRP、TNF-α和IL-18均显著降低（P<0.01）,且治疗组在降低hs-CRP、TNF-α和IL-18方面显著优于对照组（P<0.01）。结论 复方健胰胶囊治疗NAFLD的作用机制可能与抗炎、调节炎性因子表达有关。     

行气调神针刺疗法对缺血性卒中后抑郁大鼠左前皮质及海马CREB和PDE4 mRNA表达的影响

目的 观察cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)和磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4,PDE4)在缺血性卒中后抑郁(post stroke depression,PSD)发病中的作用及行气调神针刺疗法对其的影响。方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、行气调神针刺组、西药组,每组各20只。采用大脑中动脉电凝结合应激和孤养的方法复制PSD模型。针刺组取“人中”、双侧“合谷”和双侧“太冲”,针刺治疗6周,西药组予以盐酸氟西汀灌胃治疗6周。采用RT-PCR检测左前皮质及海马CREB mRNA和PDE4 mRNA的表达水平。结果 最终各组样本量为11。与正常组比较,模型组大鼠左前皮质及海马CREB mRNA表达水平显著下调(P<0.01),PDE4 mRNA表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,西药组及针刺组大鼠左前皮质及海马CREB mRNA表达水平显著上调(P<0.01),PDE4 mRNA表达水平显著下调(P<0.01)。结论 行气调神针刺疗法治疗PSD的机制与上调脑组织CREB mRNA的表达和下调PDE4 mRNA的表达有关。